Cincia Rural, Santa Maria, v.31, n.5, p.
917-928, 2001
ISSN 0103-8478
LIGNINAS MTODOS DE OBTENO E CARACTERIZAO QUMICA
LIGNINS ISOLATION METHODS AND CHEMICAL CHARACTERIZATION
Elosa de Oliveira Simes Saliba1 Norberto Mrio Rodriguez1 Srgio Antnio Lemos de Morais2
Dorila Pil-Veloso3
REVISO BIBLIOGRFICA
RESUMO
Esta reviso apresenta uma pequena histria sobre
os estudos de ligninas. So apresentados tambm vrios mtodos
de isolamento e quantificao de grupos funcionais de ligninas
por mtodos qumicos e fsicos.
Palavras-chave: ligninas, isolamento de ligninas, caracterizao
de ligninas.
SUMMARY
This review presents a short history of the study of
the lignins. There are also various methods for isolation and
quantification of functional groups in lignins by chemical and
physical methods being presented.
Key words: lignins, lignins isolation, lignins characterization.
INTRODUO
A palavra lignina vem do latim lignum,
que significa madeira. Trata-se de um dos principais
componentes dos tecidos de gimnospermas e
angiospermas, ocorrendo em vegetais e tecidos
vasculares. Sabe-se que a lignina tem um importante
papel no transporte de gua, nutrientes e
metablitos, sendo responsvel pela resistncia
mecnica de vegetais, alm de proteger os tecidos
contra o ataque de microorganismos. Vegetais
primitivos como fungos, algas e liquens no so
lignificados (FENGEL & WEGENER, 1984).
1
Departamento de Zootecnia, Escola de Veterinria da Universidade Federal Minas Gerais (UFMG), CP 567, 30161-970, Belo
Horizonte, MG. E-mail: saliba@vet.ufmg.br. Autor para correspondncia.
2
Departamento de Qumica, Universidade Federal de Uberlndia.
3
Departamento de Qumica, ICEx, UFMG.
Recebido para publicao em 26.11.99 Aprovado em 13.12.00
917
Em estudos realizados h
aproximadamente 150 anos, foi possvel verificar o
interesse cientfico e econmico sobre a lignina,
concluindo-se que a lignina uma substncia
amorfa, de natureza aromtica e muito complexa, e
faz parte da parede celular e da lamela mdia dos
vegetais.
Apesar de todos os estudos realizados at
hoje sobre lignina, muitos pontos, relativos
principalmente sua estrutura, permanecem em
dvida. Isto decorre da grande diversidade da
estrutura das ligninas quando se passa de uma
espcie vegetal para outra ou, at mesmo, dentro da
mesma espcie, quando so analisadas partes
diferentes do vegetal. Pode-se observar em
eucaliptos cultivados na Europa ou no Brasil
diferenas na constituio de suas ligninas, devidas,
principalmente, s diferentes condies de solo e de
clima. A lignina um polmero de constituio
difcil de ser estabelecida, por causa no somente da
complexidade de sua formao, baseada em
unidades fenilpropanides interligadas por diferentes
tipos de ligaes, como tambm porque sofre
modificaes estruturais durante seu isolamento das
paredes celulares (MORAIS 1987, 1992).
Devido a abundncia de resduos de
cultura disponveis e a natureza recalcitrante da
lignina, que de alguma maneira inibe o
aproveitamento dos carboidratos estruturais pelo
animal, este trabalho tem como objetivo apresentar
918 Saliba et al.
uma reviso geral sobre os principais aspectos
relativos ao estudo de ligninas
2. LIGNINAS
2.1 Definio
Cabem aqui outras definies encontradas
na literatura, alm da definio puramente qumica.
Lignina um polmero derivado de unidades
fenilpropanides denominadas C6C3 ou,
simplesmente, unidades C9, repetidas de forma
irregular, que tm sua origem na polimerizao
desidrogenativa do lcool coniferlico. A lignina
deve ser definida claramente de acordo com o
trabalho em questo, devido grande diversidade de
maneiras de tratamento para seu isolamento.
LAPIERRE (1993) classificou a lignina em core e
no core, com base em sua susceptibilidade relativa
hidrlise.
- Lignina no core: consiste de compostos fenlicos
de baixo peso molecular, liberados da parede celular
por hidrlise, que representada por cidos p-
hidroxicinmico ster-ligados.
- Lignina core: consiste de polmeros fenilpropani-
des da parede celular, altamente condensados e
muito resistentes degradao. Eles so compostos
de unidades p-hidroxifenila (H), guaiacila (G) e
siringila (S), em propores diferentes, de acordo
com sua origem.
SARKANEM & LUDWIG (1971)
observaram que a quantidade relativa da frao
molar de aldedos produzidos pela reao de
oxidao com nitrobenzeno um indicador da
abundncia relativa das unidades C9 (H, G e S).
Assim, numa classificao inicial de ligninas
segundo a presena dessas unidades, tem-se que:
ligninas de madeiras duras, ou angiospermas, so
formadas principalmente de unidades G e S; ligninas
de madeiras moles, ou gimnospermas, so formadas
fundamentalmente de unidades G; ligninas de
gramneas compreendem G-S-H. Porm, existem
ligninas de certas espcies de gimnospermas e de
gramneas que apresentam abundncia de G e S
(CHEN, 1991).
Ligninas de plantas herbceas so do tipo
S-G, sendo mais parecidas com a ligninas de
angiospermas que de gimnospermas (SARKANEN
& LUDWIG, 1971). Portanto, em uma conceituao
mais precisa, as ligninas so classificadas nos
seguintes grupos: Tipo G; Tipo G-S; e Tipo H-G-S
(CHen, 1991; PIL-VELOSO et al., 1993). Em
estudos realizados por SALIBA et al. em 1999a,
pode se verificar que a lignina da folha do milho
do tipo H-G-S.
Em plantas herbceas, a lignina no pode
ser definida apenas como proveniente de derivados
cidos fenlicos. Deve-se trabalhar com as definies
core e no core para descrever o material residual e
os componentes cidos hidrocinmicos liberados
durante a hidrlise, respectivamente. Assim, essas
definies, segundo RALPH & HELM (1993), so
convenientes para investigaes dentro do aspecto
nutricional das forragens, bem como para comparar a
composio das plantas, pois esta terminologia
discute aspectos moleculares da estrutura da lignina.
Portanto, somente derivados do cido hidrocinmico,
que esto covalentemente ligados aos polmeros da
parede celular, so liberados durante a hidrlise,
constituindo a chamada lignina no core.
Conseqentemente, derivados de cidos
hidrocinmicos que compem a lignina atravs de
ligaes inter-resistentes a hidrlise, pela definio,
constituem as ligninas core.
2.2 Nomenclatura
O sistema mais comum de nomenclatura
na qumica da lignina o que se fundamenta na
unidade bsica fenilpropanide, C6C3, designando os
carbonos da cadeia aliftica, C3, como , no caso do
carbono benzlico, e e , seqencialmente, para os
demais tomos. O anel aromtico numerado,
iniciando-se a contagem pelo carbono ligado
cadeia aliftica1, C3.
O anel aromtico denominado, de
acordo com seus substituintes ,como:
Guaiacila (G) R1 = OH, R2 = H e R3 = OCH3
Siringila (S) R1 = OH e R2 = R3 = OCH3 e
p - Hidroxifenila (H) R1 = OH e R2 = R3 = H
Cincia Rural, v. 31, n. 5, 2001.
 Ligninas Mtodos de obteno e caracterizao qumica.
As ligaes entre os monmeros para
formar dilignis e trilignis podem ser identificadas
baseando-se na numerao dos monmeros,
utilizando-se para distingui-los nmeros marcados.
Como exemplo, o dilignol abaixo apresenta ligaes
-5' e -0-4
As primeiras tentativas de proposio de
uma estrutura para a lignina foram feitas por
FREUDENBERG & NEISH (1968), combinando
919
resultados da reao de polimerizao
desidrogenativa do lcool coniferlico com dados
analticos obtidos at ento.
GLASSER & GLASSER (1981) tambm
propuseram um esquema e estrutura para a lignina
de madeiras moles. Para tal, foram necessrias
anlises elementares, determinao de acares e
cinzas, determinao de grupos funcionais por
espectroscopia de Ressonncia Magntica Nuclear
(RMN) de 1H e reao de oxidao com
permanganato seguida da anlise dos produtos
formados por cromatografia gasosa ligada
espectrometria de massa (CGMS) e por
cromatografia de permeao em gel (CPG). Os
resultados dessas anlises, associados aos dados da
literatura e simulao por computador dos modos
possveis de acoplamento dos radicais dos derivados
do lcool cinamlico, possibilitaram a formulao de
um esquema para a estrutura dessas ligninas.
Foi publicado por NIMZ (1974) um
esquema estrutural para a lignina da faia (Fagus
silvatica), incluindo dados obtidos por RMN de 13C.
PIL-VELOSO et al. (1993) propuseram um
esquema estrutural para a lignina da madeira moda
de Eucalyptus grandis, apresentado a seguir, a partir
dos estudos de seus grupos funcionais e anlise
elementar.
Cincia Rural, v. 31, n. 5, 2001.
920
2.3 MTODOS DE OBTENO
A avaliao da lignina core in situ
normalmente feita atravs do extrato livre de parede
celular, o qual pode ser obtido aps extrao prvia
com solventes orgnicos para eliminar os componentes
solveis. Isto importante para minimizar os
problemas de interferncia entre a lignina core e outros
fenlicos solveis (MORAIS et al. 1991).
A preparao da lignina livre de
contaminantes pode ser obtida por vigoroso
tratamento, o qual modifica a estrutura da lignina
(SARKANEN & LUDWIG, 1971). A mais
freqente frao de lignina solvel usada para
estudos analticos a preparada de amostras modas
(Bjrkman 1954, apud LAPIERRE 1993;
SARKANEN & LUDWIG, 1971). SALIBA et al.
(1998) verificaram que a lignina moda e isolada
com solventes orgnicos a ideal para estudos de
caracterizao, pois sofre poucas modificaes.
2.3.1 Hidrlise
A lignina de hidrlise obtida durante a
hidrlise da madeira a uma temperatura de 180-
190C, sob presso de 12-14atm, e com soluo de
H2SO4 de 0,5 a 1,0%. Devido s condies de
extrao, ocorre uma transformao da matria-
prima vegetal, na qual os polissacardeos so
convertidos a monossacardeos (pentoses e hexoses),
restando um produto insolvel (rendimento de 25 -
40%) denominado lignina tcnica bruta (LTB).
2.3.2 Isolamento
O isolamento de lignina envolve o
preparo de amostras livres de extrativos. A tcnica
empregada no deve causar alteraes de natureza
qumica, ocasionando mudanas estruturais, em que
a lignina resultante difere da original presente no
vegetal, chamada protolignina.
So trs os processos bsicos de isolamento
(FENGEL & WEGENER, 1984):
- como resduo;
- como derivado;
- como extrativo;
a) como resduo - o mtodo de Klason, no qual
pela hidrlise cida, os polissacardeos so
removidos e a lignina liberada como resduo.
b) como derivado - neste mtodo, o vegetal, ao
ser tratado com determinados reagentes, forma
produtos solveis que sero separados.
b)1. Processo organossolve - Envolve reao com
um lcool (metanol, isobutanol, ciclo hexanol ou
lcool benzlico) e cido actico. Os lcoois
combinam com a lignina na presena de cidos
minerais formando a lignina alcolica, solvel, com
rendimento de 30%.
b)2. Processo do cido tiogliclico - Este cido
reage com a lignina na presena de HCl diludo
formando o cido ligno-tiogliclico. O componente
Saliba et al.
principal da lignina que participa desta reao o
lcool benzlico (reao de substituio
nucleoflica).
b)3. Derivado da indstria de celulose - Da
indstria de papel so obtidos dois tipos de lignina
como subprodutos. a lignina sulftica e a Kraft
(sulftica). A lignina sulftica obtida pelo
tratamento da madeira com hidrxido de sdio e
sulfito de sdio; a sulftica produzida pela
reao da madeira com sulfeto de sdio em meio
bsico.
c) como extrativo - A lignina obtida pela
extrao com solventes orgnicos a partir do vegetal
finamente modo. Como mencionado anteriormente,
a lignina obtida por este mtodo assemelha-se mais
com a protolignina. Os principais tipos de ligninas
obtidas por extrao so:
- lignina nativa, ou de Brauns;
- lignina liberada enzimaticamente;
- lignina de madeira moda (LAI & SARKANEN,
1971).
c)1. Lignina nativa (LN), ou de Brauns (LB) - No
procedimento original, a madeira do vegetal era
finamente moda e a extrao inicial era feita com
ter, seguindo-se uma extrao com gua fria e,
aps, com etanol 95%. Neste ltimo extrato, a
lignina era precipitada pela adio de H2O. A
purificao final consistia na dissoluo do
precipitado em dioxano e na reprecipitao por
adio de ter etlico. O rendimento dessa lignina
muito baixo, representando de 2 a 4% da lignina
total presente na madeira.
c)2. Lignina liberada enzimaticamente - Em
partculas do vegetal com dimenses de 60 mesh,
faz-se a extrao com ter e gua. Posteriormente,
o material pr-extrado submetido a uma cultura
de determinados tipos de fungos por um perodo
de 13 a 15 meses. Os fungos atacam somente os
polissacardeos, propiciando uma hidrlise
enzimtica e liberando a lignina intacta. A lignina
, ento, extrada do meio com etanol 95% e
purificada, como no caso da lignina nativa, tendo-
se um rendimento de 20% do teor da lignina total
da madeira.
c)3. Lignina de madeira moda (LMM) - Esta uma
das mais estudadas para a anlise estrutural, pois a
lignina no sofre grandes transformaes qumicas,
representando, assim, a composio mdia da
lignina do vegetal. Sua obteno feita a partir do
vegetal livre de extratos finamente triturado em
moinho de bolas por dois ou trs dias. Faz-se, ento,
a extrao desse p com mistura dioxano-gua (9:1)
ou acetona: gua (9:1), que resulta em soluo
contendo a LMM. Aps remoo do solvente, o
extrato purificado pela solubilizao em cido
actico e precipitado por adio de gua. Essa
lignina pode ainda ser purificada por solubilizao
em NaOH 0,1 N e por precipitao por adio de
HCl 0,3 N. Por este mtodo, possvel extrair at
Cincia Rural, v. 31, n. 5, 2001.
 Ligninas Mtodos de obteno e caracterizao qumica. 921

cerca de 50% da lignina total do vegetal (FENGEL quantitativamente alguns picos de absoro
& WEGENER, 1984). observados (TAI et al., 1990; MORAIS et al., 1994;
SALIBA et al., 1998).
3 CARACTERIZAO DE LIGNINAS Devido ao fato de ser a da lignina material
amorfo e constitudo de monmeros de estrutura
A estrutura das ligninas deve ser qumica de grande complexidade, de distribuio
determinada a partir de uma amostra pura, ou seja, varivel no polmero ou, mesmo formada de
livre de carboidratos e outros extrativos. diferentes fraes de macromolcula, no possvel
importante tambm definir a escolha do aplicar a teoria de grupo para a interpretao de seus
procedimento de extrao para que a lignina espectros IV (MORAIS, 1987). Na metodologia de
resultante tenha propriedades fsicas e qumicas interpretao de espectros IV de ligninas, so
semelhantes protolignina in situ original, empregados compostos-modelo que podem ser
presente no vegetal. A seguir, determina-se o usados como padres ou ento para relacionar
percentual de grupos metoxlicos e outros grupos alguns picos de absoro. Assim, atribuies dos
funcionais, por mtodos qumicos e picos de absoro IV de ligninas no so feitas
espectroscpicos no infravermelho (IV), de apenas a partir de um simples espectro mas, sim,
ressonncia magntica nuclear (RMN de 1 H e estudando comparativamente tambm os espectros
13
C). Faz-se tambm o estudo de reaes de IV de alguns de seus derivados e de compostos-
degradao e oxidao com permanganato de modelo (TAI et al., 1990). Esses derivados so
potssio e nitrobenzeno, assim como de obtidos por reaes de metilao, acetilao e
degradao por pirlise. Os produtos da reduo com borohidreto de sdio e hidreto de ltio e
degradao e oxidao so, ento, analisados por alumnio.
cromatografia gasosa acoplada espectrometria Na tabela 1, so mostrados os principais
de massa. Emprega-se ainda cromatografia de picos de absoro caractersticos no IV para ligninas
permeao em gel, para determinar a distribuio de madeira dura, que so do tipo guaiacila-siringila,
dos pesos moleculares de fragmentos que ligninas de madeiras moles, que so do tipo
compem a lignina (NASCIMENTO et al., 1992). guaiacila (G); e gramneas, que so do tipo
guaiacila-siringila-p-hidroxifenila (G-S-H).
3.1 ESTUDO DE LIGNINAS NO
INFRAVERMELHO (IV) Tabela 1 - Principais atribuies dos picos de absoro no IV de
ligninas.
A chamada radiao IV corresponde
regio do espectro eletromagntico situada entre a
COMPRIMENTO DE ONDA (CM-1)
regio do visvel e a das microondas. A poro de
maior utilidade para o estudo de molculas orgnicas Madeira Madeira Gramnea Atribuio
situa-se entre 4000 e 400cm-1.. O espectro no IV Mole (G) Dura (G-S) (G-S-H)
caracterstico da substncia como um todo, mas 3400 3400 3400 Grupos hidroxlico
certas ligaes de grupos de tomos do origem a 3000 3000 3000 C-H aromtico
bandas que ocorrem mais ou menos na mesma 2936 2936 2936 C-H aliftico
freqncia, independentemente da estrutura da 2850 2850 2850 C-H aliftico
molcula. justamente a presena dessas bandas 1720-1700 1720-1690 C=O
no conjugada
caractersticas de ligaes de determinados grupos 1675-1660 1660-1650 C=O
que permite a obteno, mediante simples exame do Conjugada
espectro e consulta a tabelas, de informaes 1656 C = O Cetonas conjugadas
estruturais teis (SILVERSTEIN et al., 1979). p-substitudas
1673 cido p-cumrico
A espectroscopia no infravermelho 1470-1460 1470-1460 1470-1460 C-H de grupos metlicos
muito utilizada para a caracterizao dos 1430-1415 1430-1415 C-C de anis aromticos
constituintes da cadeia polimrica, pois, permite C-H de grupos metlicos
determinar os tipos de ligaes e grupos funcionais. 1270 1275 1265 C-O de anis guaiaclicos
A regio de interesse no espectro IV de ligninas 1240-1230 C-O de anis siringlicos
C-O de anis guaiaclicos
tambm a mais comum para substncias orgnicas C-O de fenis
em geral, compreendida entre 4000 e 700cm-1 (2,5 a 1235 Unidades sinapila e
14,3m). A literatura tambm mostra trabalhos p-cumarila
feitos no IV prximo, entre 7000 - 4000cm-1 (1,42 - 1140 1085 C-O de lcoois secundrios
865-815 915-815 870 C-H aromticos
2,5m). (SARKANEN & LUDIWIG, 1971). A
caracterizao de picos de absoro no IV se faz
principalmente de modo qualitativo, por comparao Tabela adaptada de:
- SARKANEN & LUDWIG (1971) H = P - hidroxifenila
com dados tabelados. Entretanto, alguns estudos tm - JUNG & HIMMELSBACH (1989) G = Guaiacila
sido desenvolvidos a fim de avaliar - MORAIS (1992) S = siringila

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922 Saliba et al.

3.2 ESTUDO DE LIGNINAS POR Tabela 2 - Atribuio dos sinais de hidrognio em oito regies do espectro de RMN de
1
RESSONNCIA MAGNTICA H de ligninas.
NUCLEAR (RMN):
Regio Tipo de hidrognio responsvel pelo sinal
Os maiores comprimentos de 1 8,00 - 11,50 Carboxlico e aldedico
onda da radiao eletromagntica esto 2 6,28 - 8,00 Aromticos e vinlicos
envolvidos no chamado espectro de 3 5,74 - 6,28 -vinlico e benzlicos
RMN. As amostras so submetidas a 4 5,18 - 5,74 Benzlico
campos magnticos fortes e irradiadas 5 2,50 - 5,18 Metoxlicos e muitos outros hidrognios ligados cadeia C3,
por radiofreqncias cujos valores que podem ser , e
6 2,10 - 2,50 Acetoxlicos aromticos
dependem do nucleo do tomo 7 1,58 - 2,10 Acetoxlicos difticos e acetoclicos aromticos orto ligao
estudado. O estudo do espectro RMN bifenlica
d uma idia das vizinhanas e dos 8 0,38 - 1,53 Alifticos altamente blindados
arranjos relativos desses componentes.
A espectroscopia de RMN Fonte: MORAIS (1992)
tem sido grandemente utilizada em
muitos estudos de anlise estrutural de ligninas 3.2.2 ANLISE DE LIGNINAS POR RMN DE
13
(HIMMELSBACH & BARTON II, 1980; C
HIMMELSBACH et al., 1983; BARTON II, 1988;
JUNG & HIMMELSBACH, 1989; SALIBA, 1998). Nimz (1976) apud MORAIS, 1992, em
estudos de lignina de madeira moda (LMM) da Faia
ANLISE DE LIGNINAS POR RMN DE 1H (Fagus silvatica), introduziu a RMN de 13C para
auxiliar na caracterizao de ligninas. Como na
As ligninas so substncias de alto peso RMN de 1H, para um estudo da atribuio dos
molecular (PM). Portanto, assim como os polmeros, deslocamentos qumicos em unidades , relativos
so problemticas para a anlise por RMN. Formam aos sinais de 13C da molcula, foi necessrio o uso
solues viscosas, nas quais as molculas possuem de compostos-modelo, os quais possibilitam
pouca mobilidade, no permitindo a obteno de um caracterizar os vrios tipos de ligaes encontradas
bom sinal. Seus espectros apresentam bandas na estrutura das ligninas. Esta metodologia tem sido
bastante largas e de difcil identificao, podendo de grande emprego na caracterizao de ligninas por
conter em suas constituies hidrognios blindados RMN (FERREIRA et al., 1993 e 1995; PIL-
por determinados grupos qumicos. A RMN de 1H VELOSO et al., 1993; DRUMOND, 1992, ALVES,
aplicada ao estudo de ligninas tem sua principal 1995; SALIBA, 1998).
vantagem na possibilidade do clculo, a partir do Na tabela 3, esto relacionados os valores
espectro, do nmero total de hidrognios ligados a de deslocamentos qumicos 13C em e suas
cadeias alifticas e aos ncleos aromticos. Pode-se, respectivas atribuies para ligninas.
ainda, obter uma estimativa do nmero de Na figura 1, apresentam-se os compostos-
hidrognios hidroxlicos alifticos e aromticos, modelo, juntamente com a proposta estrutural para a
assim como do nmero de hidrognios metoxlicos lignina da Faia, onde so representados carbonos
(PIL-VELOSO et al., 1991; CHEN & ROBERT, que possibilitam as atribuies da tabela 1.4. Mante-
1988). Devido dificuldade de solubilizao de ve-se a numerao estabelecida pelos autores para
ligninas nos solventes usualmente empregados para unidades estruturais e compostos-modelo.
a obteno de espectros de RMN de 1H, procede-se
sua acetilao. Uma vez acetilada a lignina, o 3.3 ESTUDO DE GRUPOS FUNCIONAIS E DE
derivado obtido torna-se totalmente solvel nos FRMULAS MNIMAS
solventes orgnicos (MORAIS, 1992). Em
Os grupos funcionais presentes na ma-
espectrmetros que operaram em altas freqncias
cromolcula da lignina que sobressaem so: hidro-
(270-400 MHZ), podem-se observar segmentos de
xlicos alifticos e aromticos, teres, carbonilas e
estruturas presentes em pequenas propores e, metoxilas, alm de unidades dos tipos siringila,
portanto, os sinais de hidrognios de grupos guaiacila e p-hidroxifenila. Para o estudo de cada um
aldedicos e de estruturas formadas por ligaes desses grupos funcionais e unidades, envolve-se a
comuns em ligninas do tipo -5, -, -4, etc. combinao de mtodos qumicos e espectroscpi-
A tabela 2 mostra as oito regies cos. Como a lignina, por definio, um polmero
principais do espectro de RMN de 1H de ligninas. composto de unidades do tipo fenilpropanides (C9),

Cincia Rural, v. 31, n. 5, 2001.

 Ligninas Mtodos de obteno e caracterizao qumica. 923

Tabela 3 - Lista de atribuies dos sinais de RMN de 13C para ligninas.

DESLOCAMENTOS () ATRIBUIES

195,2 C-- em 1, 5', 10, 16, 25; C- em 15

192,7 C- em vanilina
174,4 -COOH aliftico em 26, 27, 28
172,6 -COOH aliftico em 29, 30
171,8 O-C=O em steres alifticos em 13 e 20
162,0 C4 em 10'; C5 em 25
154,5 C3 e C5 em 2,3, 5, 5', 9', 11, 12, 19, 21, 22, 24; C4 em 16,; C- em 15
152,9 C4 em 6', 18
150,6 C4 em 4, 8, 13, 14, 20, 24; C3 em 1, 16
148,5 C3 em 4, 6', 7, 8, 9, 13, 14, 18, 20, 23, 24, C3 e C5 em 6,17; C4 em 9
146,6 C3 em 7, 15, 23, 25'
144,8 C3 em 25, 25'; C4 em 5'
138,7 C4 em 2, 3, 5, 11, 12, 9', 21, 22, 24, C1 em 2, 11, 21, 24', 25'; C3 em 15; C6 em 25'
136,0 C1 em 4, 9, 13, 14, 20, 24; C4 em 6, 7
133,6 C1 em 3, 5, 6, 7, 9, 12 ,17, 19, 23
132,7 C1 em 1, 6', 8, 10, 10', 18; C- em 15, 8; C2 em 10, C- em 18
130,2 C1 em 15, 16, 15', C- em 6'
129,0 C5 em 9; C2 e C6 em 10'; C6 em 10
126,7 C6 em 1, 16; C1 em 25
120,1 C6 em 4, 7, 13, 14, 20, 23, 24
117,5 C6 em 15
115,6 C5 em 7, 23; C2 em 8; C3 e C5 em 10'
113,8 C5 em 8, 6'; C2 em 1
112,0 C2 em 6', 7, 9, 18, 23, 25'
107,1 C2 e C6 em 3, 5', 12, 24'; C6 e, 25
105,1 C2 em C6 em 2, 5, 6, 9', 11, 17, 19, 21, 22
88,1 C em 14, 24
86,8 C em 4, 9, 13, 17, 20, 23; C em 6, 21, 22, 25
81,0 C em 1, 5', 10, 16, 25
75,0 C em 2, 7, 11
73,3 C em 4, 9, 13, 17, 20, 23; C em 6, 9', 10', 21, 22
63,8 C em 1, 5', 6', 10, 16, 18, 25; C em 2, 7, 11
61,3 C em 4, 9, 13, 17, 20, 23
56,3 OCH3; C em 24'
54,5 C em 6, 21, 22, 25'
54,0 C em 14, 24, 24'
46,8 C em 9', 10'
34,5 C - (em G-CH2-CH2-COOH) em 32
31,5 C- (em G-CH2-CH2-COOH) em 32
28,6 -CH2 (em C5-CH2-C5) em 33
26,5 -CH2- ou -CH3
24,6 -CH2- ou -CH3
20,5 -CH3 ou CH3-C=0
17,8 C em 34
13,6 C'em 34

Adaptada de MORAIS, 1987

determina-se a sua frmula mnima tomando como 3.3.1 DETERMINAO DE GRUPOS

base tais unidades (FENGEL & WEGENER, 1984). METOXLICOS
necessrio o conhecimento da porcentagem de C, H, O
e de grupos metoxila (OCH3) presentes na lignina para As ligninas so formadas a partir de trs precursores
se ter a frmula mnima em termos dessas unidades bsicos, que so os lcoois p-cumarlico, coniferlico
fenilpropanides (PIL-VELOSO et al., 1991). e sinaplico.

Cincia Rural, v. 31, n. 5, 2001.

924 Saliba et al.

13
Figura 1 - Fragmentos de esquema estrutural de lignina e compostos-modelo utilizados para atribuies dos sinais de RMN de C, na
tabela 3.

Cincia Rural, v. 31, n. 5, 2001.

 Ligninas Mtodos de obteno e caracterizao qumica. 925

As razes molares entre esses trs 3.3.2 METODOLOGIA USUAL PARA O

constituintes dependem do tipo de vegetal. O ESTUDO DA FRMULA MNIMA DE
composto (1) no possui metoxila, o (2) e o (3) LIGNINAS
possuem, respectivamente, 1 e 2 grupos por mol. O Freudemberg & Neih (1968)
grupo metoxlico considerado um grupo funcional desenvolveram uma srie de clculos que permitem
caracterstico de ligninas e seus derivados, sendo de o estudo de frmulas mnimas de ligninas. Os grupos
grande importncia a determinao do seu contedo metoxila so expressos como uma unidade separada
dos demais tomos de C, H e O da molcula. Por
na anlise da macromolcula (Sarkanen & Fengel, esta razo, subtrai-se o contedo de C, H e O
1984 apud FENGEL & WEGENER, 1984; correspondente metoxila do total encontrado para
MORAIS, 1992). esses tomos.
A presena marcante dos grupos Denominam-se Cp, Hp e Op as
porcentagens individuais dos elementos contidos na
metoxlicos na maioria das unidades
metoxila. O contedo total na macromolcula desses
fenilpropanides da lignina leva a que sejam elementos expresso por %C, %H e %O, as
expressos como parte integrante da frmula mnima porcentagens resultantes so dadas pelas relaes:
de ligninas, a qual baseada na unidade %C' = %C - Cp
fenilpropanide. A porcentagem de metoxilas em %H '= %H - Hp
madeiras moles varia de 12 a 16% e nas madeiras
%O' = %O - Op
duras de 18 a 22%. Segundo SALIBA et al. (2000),
Se essas relaes so expressas em
a porcentagem de metoxila para a lignina da palha nmeros relativos, resultantes da diviso pelas
de milho 6,67 e 1,79% para a da palha de soja. respectivas massas (M), tem-se a frmula mnima
Zeisel (1985) apud PIL-VELOSO et al. representada por:
(1993) desenvolveu um dos primeiros mtodos para Cx Hy Oz (OCH3)d
a determinao de grupos metoxlicos. Por outro
lado, Viebock e colaboradores desenvolveram uma
tcnica para a determinao de metoxilas, a qual Se a frmula mnima para a lignina for
pode ser utilizada para amostras com enxofre. considerada como funo de sua unidade bsica C6
Segundo NASCIMENTO (1989), os C3, ou C9, pode ser escrita:
sinais devidos a grupos metoxila so claramente (Cx Hy Oz (OCH3)d)n onde X . n = 9.
observados na regio do espectro RMN de 1H que, reescrita em termos de unidades C9, resulta em:
compreendida entre = 3,5 - 4,0. Atravs da curva C9 Hy 9 O 9 (OCH3)d 9
de integrao desses sinais, as metoxilas podem ser x x x
avaliadas semiquantitativamente. A presena de Substituindo x, y, z e d na equao acima, tem-se:
grupos metoxila em ligninas pode tambm ser
avaliada por RMN de 13C. Esses grupos apresentam HIDROGNIO:
sinais de ressonncia do 13C situados na regio 276,60 (% H) - 27,00 (% OCH3)
compreendida entre = 55 a 57. H = _________________________________________
2,584 (% C) - % OCH3
OXIGNIO:
17,46 (% O) - 9 (% OCH3)
O = ________________________________
2,584 (% C) - % OCH3
METOXILA :
9 (% OCH3)
OCH3 = ____________________________
2,584 (%C)-% OCH3
A partir das porcentagens de C, H e O,
determinadas pela anlise elementar, possvel

Cincia Rural, v. 31, n. 5, 2001.

926 Saliba et al.

determinar a frmula mnima para a lignina, basea-

da em unidades C9.

3.3.3 DETERMINAO DE HIDROXILAS

TOTAIS

As hidroxilas so o segundo grupo

funcional mais estudado em ligninas, que podem
estar presentes tanto como hidroxilas fenlicas
quanto como hidroxilas alifticas (MORAIS, 1987).
A tcnica de titulao condutivimtrica
bastante conveniente para a determinao da
concentrao de hidroxilas em ligninas, por ser de
utilizao fcil e rpida (Sarkanen & Schuerch,
1955) apud PIL-VELOSO et al., 1993. A reao
envolvida nesta titulao constitui-se em uma
reao de neutralizao de carboxilas e de fenis
com hidrxido de ltio. O ponto de equivalncia
determinado facilmente (MORAIS, 1987).

3.3.4 DETERMINAO DE CARBONILAS

EM LIGNINAS

Este grupo funcional est presente em

todos os tipos de ligninas, podendo ser
determinado por vrias tcnicas:
- reduo com boroidreto de sdio em meio
alcalino, estimando-se o consumo de boroidreto
de sdio durante a reao;
- estudo da absoro no IV de compostos-modelo;
- hidrogenao;
- reao de oximao.
Na figura 2, constam as principais
subestruturas que contm carbonilas, presentes em
ligninas.
3.3.5 ESTUDOS QUMICOS DE
DEGRADAO DE LIGNINAS POR
OXIDAO COM NITROBENZENO
ADLER (1977), em reviso, cita que a
oxidao de ligninas com nitrobenzeno foi
introduzida por Freudemberg e colaboradores em
1939. Segundo a literatura, a oxidao de madeiras
moles produz como produto principal a vanilina (4).
A oxidao de madeiras duras tem como produtos a
vanilina e o siringaldedo (5). No caso das
gramneas, alm desses dois aldedos, produzido o
p-hidroxibenzaldedo (6).
Alm dos aldedos, a oxidao com
nitrobenzeno d origem tambm, em quantidades
muito inferiores, aos respectivos cidos:
A relao molar dos aldedos e cidos
produzidos depende da natureza, espcie e
constituio da macromolcula da lignina.
Figura 2 Principais subestruturas que contm carbonila, presentes em
lignina.
Em estudos feitos por Lapierre et al.
(1987) apud MORAIS (1992), foi verificado que
nesta reao, sob catlise bsica, ocorre inicialmente o
rompimento das ligaes alquil-arila, formando os
ons fenolatos e, na seqncia, acontece a quebra das
ligaes C C , dando origem a aldedos.
Entretanto, o mecanismo dessa reao no bem
entendido. Uma informao importante que se pode
tirar dessa oxidao refere-se ao teor total de aldedos
e cidos formados. Verificado por SALIBA et al.
(1999b) os aldedos obtidos atravs da oxidao com
nitrobenzeno, interferem diferentemente na digesto
dos carboidratos das plantas nos animais.
A anlise de grupos funcionais tais como
metoxilas, hidroxilas e carbonilas e a determinao
de grupos siringila, guaiacila e p-hidroxifenila,
presentes na estrutura da macromolcula, so
fundamentais para um conhecimento aprofundado da
natureza de uma lignina. A partir desse
conhecimento, pode-se interferir quimicamente, se
necessrio, em seus grupos funcionais, a fim de se
obtere derivados que possam ser utilizados em
diferentes aplicaes (MORAIS, 1992).

Cincia Rural, v. 31, n. 5, 2001.

 Ligninas Mtodos de obteno e caracterizao qumica.
Parte dos objetivos deste trabalho foi
caracterizar quimicamente as ligninas dos resduos
agrcolas de milho (RM) e de soja (RS) e verificar
como as mesmas afetam a digestibilidade dos
carboidratos estruturais.
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