CÓDIGO: IT.LH.85.

02
PESQUISA DE INIBIDORES DE
FACTORES DA COAGULAÇÃO

1. OBJECTIVO
Instrução de trabalho para a pesquisa de Inibidores dos Factor VII, VIII, IX e XI da coagulação.

2. DESCRIÇÃO

Como Plasma Normal usar o Hemosil Normal Control ou Hemosil Calibration Plasma. Hidratar o(s)
controlo(s) ou calibrador(es) necessários à realização do procedimento.
- Verificar o último resultado do doente. (Se o resultado for negativo fazer apenas 2 diluições, se
o resultado for positivo fazer diluições até dois tubos acima do último resultado do doente).
- Para cada 5 diluições (tubos) é necessário um frasco de controlo/calibrador.

Identificar tubos com a identificação do doente e com letras de A a Z consoante o nº de diluições

pretendidas.

Tubo A: Plasma normal + Factor Diluente

Tubo B: Plasma normal + Plasma Doente  Diluição 1
Tubo C: Plasma normal + (Plasma Doente/2)  Diluição 2
Tubo D: Plasma normal + (Plasma Doente/4)  Diluição 4
.............

Pipetar 200 µl de Factor Diluente para todos os tubos com excepção do tubo B.

A B   C   D   E   F   G   H

...

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Pipetar 200 µl de Plasma Doente (amostra) para o tubo B.

A B   C   D   E   F   G   H

Pipetar 200 µl de Plasma Doente (amostra) para o tubo C, homogeneizar e transferir 200 µl da mistura
para o tubo D, fazendo diluições sucessivas até ao último tubo definido.
Rejeitar 200µl do último tubo.

200µl 200µl 200µl 200µl 200µl 200µl

                    
A B   C   D   E    F    G    H  Desprezar

               

Pipetar 200 µl de Plasma Normal para todos os tubos. 

A B   C   D    E    F   G    H  

                           

Homogeneizar e incubar: Factor VIII - 2 horas a 37ºC no banho Maria

Factor VII, IX e XI – 15 minutos a Temp. ambiente

No final do tempo de incubação, as amostras são colocadas no equipamento para determinar o título de
inibidores.

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Determinação do título de inibidores em unidades OXFORD ( Factor VII e Factor XI) :

Colocar o tubo A e o tubo B no equipamento ACL TOP (Ver IT para processamento de amostras no ACL
TOP) e programar o teste Factor VII ou Factor XI.

Comparar os resultados de A e B.
Se: B > ou = A  Pesquisa de inibidores negativa
B > 15 % e < 30 % de A  1 unidade Oxford
B < 15 % de A  Efectuar doseamento em tubo C
C > 15 % e < 30 % de A  2 unidades Oxford
C < 15 % de A  Efectuar doseamento em tubo D
D > 15 % e < 30 % de A  4 unidades Oxford
......................

Determinação do título de inibidores em unidades BETHESDA ( Factor VIII e Factor IX) :

O tubo A corresponde a uma actividade de 100% e deve ser usado como calibrador, para calibrar a
técnica FVIII_IN ou FIX_IN.

NOTA: Quando se colocar o tubo A como calibrador, não poderão existir outros frascos de calibrador no
equipamento!

- Colocar no equipamento ACL TOP o tubo B e seleccionar o teste FVIII_IN ou FIX_IN. (Ver IT para
processamento de amostras no ACL TOP).

Interpretação:
- 1 Unidade Bethesda corresponde a 50 % de inibição
- Se no tubo B se obtiver aproximadamente 50% de actividade residual do factor VIII ou IX
corresponde a 1UB.
- Se o resultado for inferior a 50% no tubo B, efectuar o mesmo procedimento para o tubo C e
diluições sucessivas (D, E, F, etc) até obter um valor aproximado de 50%.
- Usar o valor mais aproximado de 50 % para calcular o título de inibidores.

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Cálculo:

Na fórmula de cálculo criada em excell colocar:

- % FVIII ou FIX residual mais próxima de 50%

- Diluição em que essa percentagem foi obtida.

EX: Tubo D (PN+D/4) = 50,4 % F VIII residual

Título de Inibidores: 0.992 x 4 = 3.968 UB

ELABORADO APROVADO

Paulo Morgado / Carina Calisto João Carvalho de Sousa

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