MÉTODOS DE ESTUDO EM

BIOLOGIA CELULAR

Prof.: Ivan Sales Henriques

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MICROSCOPIA

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 MICROSCÓPIO ÓPTICO
“APARELHO COM LENTES ÓPTICAS QUE MAXIMIZA UM SER OU
ESTRUTURAS MINÚSCULAS A UM TAMANHO DE BOA OBSERVAÇÃO”

BACTÉRIAS

CÉLULA
LEUCÓCITOS

CÉLULAS
SANGUÍNEAS

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PRINCIPAIS COMPONENTES DE UM MICROSCÓPIO ÓPTICO

O MICROSCÓPIO ÓPTICO, É TAMBÉM CONHECIDO

COMO MICROSCÓPIO DE LUZ.

COMPÕE-SE DE UMA PARTE MECÂNICA

QUE SERVE DE SUPORTE PARA A PARTE
ÓPTICA.

PARTE ÓPTICA
É CONSTITUÍDA POR TRÊS SISTEMAS DE LENTES:
O CONDENSADOR, AS OBJETIVAS E AS OCULARES.

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 PRINCIPAIS COMPONENTES DA PARTE ÓPTICA
CONDENSADOR
Sua finalidade é projetar um cone de luz sobre as células que estão sendo
examinadas ao microscópio.
Após atravessar as células, esse feixe luminoso, em forma de cone, penetra nas
objetivas.

OBJETIVAS

Projetam uma imagem aumentada, no plano focal das oculares, que novamente a
amplia.

OCULARES

As imagens fornecidas pela oculares podem ser percebidas pela retina.

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Princípios da formação da imagem ao Microscópio

Imagem II
Imagem
objeto I

F F F
C C C

Fonte objetiva
de luz condensadora ocular

Fonte de luz → Lente condensadora → Lentes objetivas → Lente ocular

O posicionamento estratégico das lentes no microscópio proporcionam a

formação de uma imagem Invertida.
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 OCULARES

BRAÇO OU
SUPORTE
OBJETIVAS

PLATINA REVÓLVER

CONDENSADOR PARAFUSO
MACROMÉTRICO

LÂMPADA PARAFUSO
MICROMÉTRICO

BASE

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9
PRINCIPAIS UNIDADES DE MEDIDAS USADAS NA MICROSCOPIA

MICRÔMETRO (µm) 1mm = 1.000 μm

NANÔMERO (nm) 1μm = 1.000 nm

1nm = 10 Å
ÂNGSTROM (Å)

ESTA UNIDADE ESTÁ SENDO SUBSTITUÍDA PELO NANÔMETRO

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ESPECIFICAÇÕES DAS OBJETIVAS E SUAS AMPLIAÇÕES
OBJETIVAS AMPLIAÇÃO TOTAL
(COM OCULAR DE 10X) (VER SEMPRE AS OCULARES)

04 x 40 X

10 x 100 X

40 x 400 X

100 x
1000 X
(Sempre usar com óleo de Imersão)

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 COMO USAR O MICROSCÓPIO

1. INICIE SEMPRE PELA OBJETIVA DE MENOR AUMENTO.

2. NA OBSERVAÇÃO DE UMA PREPARAÇÃO, OLHE PELA OCULAR E MOVA O
MACROMÉTRICO MUITO LENTAMENTE, ASSIM QUE A IMAGEM APARECER, MESMO
CONFUSA, PARE E COMPLETE A FOCALIZAÇÃO COM O MICROMÉTRICO.

USANDO A OBJETIVA 100x

 O USO DA OBJETIVA DE IMERSÃO É MAIS DELICADA POIS, A DISTÂNCIA FOCAL ENTRE A

FACE DA OBJETIVA E A PARTE SUPERIOR DA LAMÍNULA, DIMINUI QUANDO A AMPLIAÇÃO É
AUMENTADA.

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Microscopia Eletrônica
Microscópio de Luz
- Cortes -
 Microscópio de Luz - ML

Microscópio Eletrônico de
Transmissão - MET Microscópio Eletrônico de
Varredura - MEV
DIFERENÇAS DE IMAGENS ENTRE UM MICROSCÓPIO ÓPTICO (MO)
E UM MICROSCÓPIO ELETRÔNICO (ME)
MICROSCOPIA ELETRÔNICA (ME) DE
BACTÉRIAS COMENSAIS
HEMÁCIAS LEUCÓCITO

PLAQUETAS

EOSINÓFILOS

LINFÓCITO

MICROSCOPIA ÓPTICA EM
LÂMINA DE TECIDO
SANGUÍNEO

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 PREPARAÇÃO DAS
AMOSTRAS BIOLÓGICAS

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 FIXAÇÃO

• Consiste na utilização de procedimentos físicos ou

químicos para imobilizar as substâncias constituintes das
células e dos tecidos, fornecendo maior resistência para
suportar as demais etapas.

• Além disso, os fixadores retardam os efeitos post mortem

do tecido, mantendo sua arquitetura normal.

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 FIXAÇÃO

• Os agentes fixadores mais utilizados são o formol

tamponado e o líquido de Bouin.

• Ambos fixam as proteínas evitando sua degradação.

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 MICROTONIA
• Esta etapa consiste, basicamente, em utilizar um micrótomo
para obter cortes sucessivos, delgados e uniformes, a partir
dos blocos de parafina com as peças incluídas.

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 MICROTONIA

Fotografia de um micrótomo para cortes em resina (Retirado de Junqueira e Carneiro, 1995)

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COLORAÇÃO

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 COLORAÇÃO
QUASE TODAS AS ORGANELAS SÃO TRANSPARENTES E
INCOLORES, O QUE DIFICULTA SEU ESTUDO MICROSCÓPICO. LOGO,
A COLORAÇÃO FACILITA A VISUALIZAÇÃO DAS ESTRUTURAS DOS
TECIDOS.

PARA VENCER ESSA DIFICULDADE, FORAM CRIADOS NUMEROSOS

PROCESSOS DE COLORAÇÃO QUE TORNAM VISÍVEIS OS DIVERSOS
COMPONENTES CELULARES.

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A MAIORIA DOS CORANTES COMPORTA-SE COMO ÁCIDOS OU BASES
ESTRUTURAS BASOFÍLICAS:
 SÃO OS COMPONENTES DOS TECIDOS
QUE SE CORAM FACILMENTE COM
CORANTES BÁSICOS (EX.: Hematoxilina)
EX: ESTRUTURAS ÁCIDAS (NÚCLEOS)
ESTRUTURAS ACIDÓFILAS:
 SÃO OS COMPONENTES DOS
TECIDOS QUE SE CORAM FACILMENTE
COM CORANTES ÁCIDOS (Ex.: EOSINA)
EX: ESTRUTURAS BÁSICAS (CITOPLASMA E
ORGANELAS)
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TÉCNICAS DE COLORAÇÃO MAIS USUAIS, TÉCNICA DE IMPREGNAÇÃO
PELA PRATA E ALGUNS DOS RESULTADOS OBTIDOS COM ELAS:
FIBRAS FIBRAS
TÉCNICAS CONSTITUINTES NÚCLEOS CITOPLASMA
COLÁGENAS RETICULARES

HEMALÚMEN AZUL
(Hematoxilina),
ROSA ROSA
HE e
EOSINA

FUCCINA ÁCIDA
E
TRICRÔMICO PONCEAU DE VERMELHO
DE MASSON XILIDINA,
VERDE-LUZ VERDE

IMPREGNAÇÃO
ARGÊNTICA SOLUÇÕES DE
PARA FIBRAS SAIS DE PRATA
PRETO
RETICULARES

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