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Este documento visa estabelecer diretrizes para a elaboração dos exames bacterioscópicos.
2 CAMPO DE APLICAÇÃO
Este procedimento é aplicável a todas as análises onde foram solicitados os exames
bacterioscópicos pelos métodos de Gram, Giemsa, Panótico e Fontana Tribondeau de materiais
clínicos diversos ou de crescimento bacteriano obtido em meios de cultura , realizados pela
Seção de microbiologia das diversas regionais onde se realizam os exames.
3 RESPONSABILIDADE
2) PRINCÍPIO:
O preparo do paciente, amostra primária, recipiente e aditivo podem ser verificados dentro da
IG- Instruções Gerais de cada sigla de exame.
Os esfregaços feitos sobre lâminas, secos ao ar e fixados pelo calor, posteriormente são
submetidos à coloração de Gram e sua visualização é feita em microscópio óptico comum,
podendo-se usar aumentos variáveis, mas para leitura final é feito em aumento de 100x. Ao
microscópio é possível a visualização de estruturas bacterianas/fúngicas/celulares que podem
ser classificadas de acordo com:
Morfologia: Cocos, bacilos, bastonetes, leveduras, leucócitos polimorfonucleares e células.
Afinidade com corantes: Se coram de roxo, Cocos Gram positivos, Leveduras, Cocobacilos e
Bacilos Gram positivos. Adquirem coloração rosa os Bacilos Gram negativos e diplococos Gram
negativos.
Arranjos: Os Cocos podem estar em arranjos isolados, aos pares, cadeias ou agrupados e as
leveduras podem ser encontradas em gemulação e/ou pseudofilamentos e devem ser
reportadas sempre que observado a presença de pseudofilamentação.
3) AMOSTRA:
- Esfregaços preparados de qualquer material clínico ou a partir de um crescimento bacteriano.
- Exame bacterioscópico pelo método de GRAM : Vide IG : GRAM DIVERSOS
- Exame bacterioscópico pelo método de GIEMSA: Vide IG : ACANTAX
- Exame bacterioscópico pelo método de Panótico : coloração interna
5) KITS:
Kit Panótico Rápido – Laborclin, manter em temperatura ambiente.
6) REAGENTES :
Coloração manual
Cristal violeta; armazenado a temperatura ambiente, válido por 8 meses
Lugol; armazenado a temperatura ambiente, válido por 8 meses
Álcool cetona; armazenado a temperatura ambiente, válido por 3 anos
Safranina; armazenado a temperatura ambiente, válido por 8 meses
Para o preparo dos corantes e soluções, vide manual de corantes da Seção de Preparo de Meios
de Cultura ITR_REA_00043.
Giemsa
8) CALIBRAÇÃO:
Para quem utiliza o equipamento PREVICOLOR, todas as manutenções diárias, semanais e
mensais do equipamento devem ser feitas e registras no sistema PRISMA.
Leitura e Interpretação:
Ler em objetiva de imersão
Verificar a presença/ausência de estruturas bacterianas ou leveduriformes.
Toda amostra de hemocultura onde não tenha sido visualizado micro-organismos coráveis pelo
método de Gram, deve ser realizado uma lâmina com coloração de Panótico. A ausência de
micro-organismos na coloração de Panótico deve ter sempre dupla conferencia. Na presença de
micro-organismos na coloração de Panótico, semear a amostra em meios específicos para
crescimento do suposto micro-organismo.
A amostra positiva para Trichomonas por coloração de GRAM deverá ser confirmada por mais de
um leitor.
Leitura e Interpretação:
Ler em objetiva de imersão
Verificar a presença de Acanthamoeba.
Anotar resultado em campo próprio no Software SCC ou Sistema de Microbiologia.
11) PROVÁVEIS CAUSAS DE ERRO/ INTERFERÊNCIAS:
Esfregaços cujo conteúdo microscópico não representa uma microbiota referente ao
material, solicitar coloração de lâmina reserva. No caso de materiais que nos foi enviado a
amostra clínica coletada em frasco estéril apropriado, realizar um novo esfregaço.
Lâminas cuja coloração não está adequada: solicitar coloração de lâmina reserva quando houver.
Sempre que recebermos GRAMVAG sem cultura (WVAG/WVAGTE) a leitura da lamina deverá
ser realizada por dois colaboradores diferentes. O segundo leitor deverá checar a quantificação
inicial e dar atenção especial à detecção de estruturas leveduriformes.
O corante cristal violeta não foi filtrado em filtro duplo antes de colocar na pisseta.
Liberação realizada pelos assessores técnicos e colaboradores habilitados para esta finalidade.
Resultados críticos são avaliados por assessor médico e se necessário entrar em contato com o
médico assistente para discussão do mesmo
5 REFERÊNCIAS
POP – Procedimento Operacional Padrão – engloba as instruções da fase analítica, que somadas
às instruções gerais, complementam todas as informações da realização de um exame, desde o
atendimento até a entrega do resultado.
7 ANEXOS
1. Cristal-violeta 1 minuto.
2. Lavar com água corrente.
3. Lugol 1 minuto.
4. Descorar com álcool-acetona, até que não escorra mais o cristal violeta.
5. Lavar com água corrente.
6. Safranina por cerca de 30 segundos a um minuto.
7. Lavar com água corrente, limpar a parte de baixo da lamina e deixar secar ao ar ou sobre a
chapa aquecedora