CURSO: MTEC PI EM MEIO AMBIENTE

DISCIPLINA: MICROBIOLOGIA
TURMA: 2º ANO
PROFESSORA: ANA CLAUDIA

Análise de Coliformes Totais e Coloração de Gram

25/10/2023 e 08/11/2023

ANA JÚLIA BRUFATO

BEATRIZ YAMADA MARTINELI
GABRIELA SILVA GUETHE
MATTHEUS MACÊDO DE OLIVEIRA

ARARAS/SP
 Microbiologia

Análise de Coliformes Totais e Coloração de Gram

Introdução:
Os coliformes totais são bacilos gram-negativos, aeróbios ou anaeróbios facultativos, não
esporogênicos, oxidase-negativos, que fermentam lactose com produção de gás a 35,0 ± 0,5ºC em
24-48 horas. São exemplos de coliformes totais a Escherichia, Enterobacter e Klebsiella.
A Coloração de Gram é importante pois é utilizada para classificar bactérias com base no
tamanho, morfologia celular e comportamento diante dos corantes.

Objetivos:
Podemos destacar alguns dos objetivos diante da análise de coliformes totais e a coloração
de gram foram, identificar se havia ou não contaminação, e identificar se as bactérias eram gram-
negativas ou gram-positivas.

Metodologia:
Para ocorrer a experiencia em sala de aula ,usamos os equipamentos de proteção individual,
que foram indicados pela professora, como jaleco, cabelo preso, luva, sapato fechado e calça jeans.
Os materiais utilizados foram:

 Erlenmeyer;
 Meio de cultura PCA e PDA;
 Placa de petri;
 Bico de Bunsen;
 Cotonete;
 Pisseta;
 Becker;
 Pipeta;
 Alça de inoculação;
 Lamparina;
 Tubo de ensaio;
 Lâmina;
 Lamínula;
 Corantes.
 Microbiologia

Os métodos para fazer a Coloração de Gram foram :

 Fixar a amostra;
 Cubra o esfregaço com violeta-de metila e deixe por aproximadamente 15 segundos; sabre
a lâmina coberta com violeta de-metila e deixe agir por mais 45 segundos;
 Adicione igual quantidade de água
 Escorra o corante e lave em um filete de água corrente. Cubra a lâmina com lugol e deixe
agir por aproximadamente 1 minuto;
 Escorra o lugol e lave em um filete de água corrente;
 Adicione álcool-cetona sobre a lâmina, descorando-a, até que não desprenda mais corante;
 Lave em um filete de água corrente;
 Cubra a lâmina com Safranina e deixe agir por aproximadamente 30 segundos;
 Lave em um filete de água corrente;
 Coloque uma lamínula, acrescente uma gota de óleo de imersão e observe na objetiva de
100x.

Os métodos para fazer a Análise dos Coliformes Totais foram:

 Homogeneizar e transferir as alíquotas;

 Diluir a amostra para tubos de ensaios contendo, no fundo, um tubo invertido para coleta
de gás (tubo de Durhan), e o meio de cultura apropriado (caldo lauril triptose).
Para demonstrar esse processo podemos utilizar uma ilustração:

Imagem 1: Diluições de tubos de ensaio contendo tubo de Durhan invertido

Resultados:
Após fazermos a análise dos coliformes totais, identificamos que houve gram positivo nos
três tubos de ensaio de 10-¹ e nos tubos de ensaio 10-² e 10-³ houve gram negativos. Observamos
alguns microrganismos na nossa amostra tirada em uma poça de água no estacionamento na
escola. O resultado que encontramos é a manifestação nítida de fungos e bactérias.
 Microbiologia

Foi notado que na placa de petri da nossa amostra foi encontrado o crescimento de 5
colônias de bactérias e um fungo.
Podemos ilustrar com imagens:

Imagem 2 e 3: tubos de ensaio com o meio de cultura e coleta da amostra na placa de petri.

Imagem 4 e 5: amostra depois de uma semana na geladeira.

Imagem 6, 7 e 8: tubos de ensaio depois de uma semana na geladeira, podemos observar gram
positivo e gram negativo.
 Microbiologia

Imagem 8, 9, 10 ,11 e 12: procedimentos para a realização da coloração de gram.

Imagem 13, 14, 15 e 16: processo de pigmentação dos corantes

 Microbiologia

Imagem 17: os microrganismos observados no microscópio após a coloração de gram.

Conclusão:
Concluímos que perante as aulas práticas nossos objetivos alcançados, conseguimos
identificar se as bactérias são gram-positivas ou negativas, aprendemos sobre como fazer e como
funciona a coloração de gram.

Referências Bibliográficas:
https://bancadapronta.wordpress.com/2013/09/03/analises-de-coliformes-por-tubos-multiplos/
https://foodsafetybrazil.org/bacterias-gram-positivas-e-negativas-o-que-isso-quer-dizer/
#:~:text=Por%20que%20%C3%A9%20importante%20saber%20se%20a%20bact%C3%A9ria
%20%C3%A9%20gram,das%20bact%C3%A9rias%20conforme%20a%20necessidade
https://kasvi.com.br/bacteria-gram-positiva-gram-negativa/#:~:text=A%20colora%C3%A7%C3%A3o
%20de%20Gram%20%C3%A9,las%20ou%20identificar%20sua%20estrutura
https://kasvi.com.br/qual-a-diferenca-entre-coliformes-totais-e-termotolerantes/#:~:text=Esse
%20grupo%20inclui%20tr%C3%AAs%20g%C3%AAneros,Klebsiella%20de%20origem%20n%C3%A3o
%20fecal
https://www.cff.org.br/sistemas/geral/revista/pdf/77/i02-qualidademicro.pdf