INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO, CIÊNCIA E TECNOLOGIA DE SERGIPE

CAMPUS SÃO CRISTÓVÃO

GERÊNCIA DE ENSINO

COORDENAÇÃO DO CURSO SUPERIOR EM TECNOLOGIA DE ALIMENTOS

DANIELA SEVERINA DA SILVA

TÉCNICA BÁSICA DE CONTAGEM DE MICRO-ORGANISMO

SÃO CRISTÓVÃO/SE
2024
 DANIELA SEVERINA DA SILVA

RELATÓRIO DA TÉCNICAS BÁSICAS DE CONTAGEM DE MICRO-ORGANISMO

PELO NUMERO MAIS PROVÁVEL (NMP)

Relatório da técnicas básicas de contagem de

micro-organismo pelo numero mais
provável(NMP), apresentado como requisito
parcial à nota da disciplina Microbiologia Geral,
do Curso Superior de Tecnologia em
Alimentos, do Instituto Federal de Sergipe –
Campus São Cristóvão.
Professor: Prof.ª Dr.ª Juliana Serio

SÃO CRISTÓVÃO/SE
2024
 SUMÁRIO

1. INTRODUÇÃO..............................................................................…………….04
2. OBJETIVO.................................................................…………………………..05
3. METODOLOGIA..............................................................................…………..05
3.1 Materiais…………………………………………………………………………05
3.2 Técnica do NMP no Laboratório………………………………………………06
4. RESULTADOS E DISCUSSÃO..............................................…………………08
4.1 A técnica do NMP: Prova Presuntiva…………………………………………08
4.2 Técnica do NMP: Prova Confirmativa………………………………………..10
4.3 técnica do NMP: Prova Confirmativa para Termotolerante………………..10
4.4 Resultados da técnica do NMP……………………………………………….11
5. CONSIDERAÇÕES FINAL ...............................………………………………..12
REFERÊNCIAS.............................................................................……………….13
1. INTRODUÇÃO

A técnica do numero mais provável e um método de analises quantitativo que

permite determinar o numero mais provável ( NMP ) dos micro-organismo alvo da amostra
em uma serie de tubos, contendo um meio de cultura liquido adequado ao seu
crescimento, com essa, determinação de numero de micro-organismo e baseado no
principio de que, subdividindo a amostra em alíquotas, algumas alíquotas vão conter
micro-organismo outros não, dependendo da quantidade dos micro-organismo na amostra
,(SILVA, 2017. p 76.)
São Procedimento de métodos alternativos de contagem de células viáveis
recomendados principalmente para amostras de baixa densidade celular para o meio
liquido, da primeira etapa o caldo utilizado e (LST), na segunda etapa o caldo (BV) e a
terceira epata o caldo (EC) facilitando o crescimento microbiano especifico da amostra,
usado principalmente para analises por ml/g que segundo a teoria estatístico tera maior
probabilidade de representar o numero populacional de micro-organismo nas amostras.
Essa técnica do NMP tem como objetivo principal confirmar a presença de
coliformes e sendo bastante versátil, permitindo a enumerações de diferentes grupos ou
especies de micro-organismo no qual sua principal aplicações são a contagem de
coliformes totais, coliformes termotolerantes e E. coli em água e alimentos. (SILVA,2017,
P 76)
Os resultados da técnica do NMP se dará através das combinações de tubos
positivos que permite estimar por cálculos de probabilidade populacional de micro-
organismo na amostra
para essa técnica os resultados sera obtidos por uma tabela que tera os valores já
calculados e tabulados conformes os números dos tubos positivos, esse números mais
provável se ler na tabela de Hoshins.

4
2. OBJETIVO

Conhecer os procedimentos da técnica do numero mais provável conhecida como ( NMP)

em amostra de água.
Informar com base na técnica do NMP a quantidade e o tipo de micro-organismo
encontrado na água

3 METODOLOGIA

3.1 Materiais
Pipetas de 2 ml
Amostra de água
Bico de Bunser
Tubos de ensaio
Tubos de Durham
Estufa
Equipamento para Banho maria
Meio de cultura saletina e especifica
Alca de drigalski
Geladeira
Suporte para tubos de ensaio

5
3.2 Técnica do NMP no Laboratório

Primeira etapa: prova presuntiva do NMP.

Colocasse 9 tubos de ensaio no suporte de tubo de ensaio com o caldo (LST)
Lauril Sulfato Triptose de múltiplos de 3 com tubos de Durham com diluições de 10 ml, 1
ml e 0,1 ml, onde são marcados os tubos com as diluições especifica para cada tudo, 3
tubos de diluição de 10 ml, 3 tubos com diluição 1 ml e 3 tubos com diluição de 0,1 ml.
Feito a marcação nos tubos e realizado a transferência para cada tubos com a
amostra de água com uma pipeta de 2 ml para cada tudo com suas diluições
respectivamente, com os tubos já pronto da amostra sera colocado na estufa a 35 graus
por 24 horas, no dia seguente e observado a turvação nos tubos e a presença da
formação de gás nos tubos de Durham.
Ocorrendo essa presença nos tubos com as diluições da amostra sera linda como
positivo e a não presença da turvação e nem a formação do gás essa amostra sera
negativo.
Ao observar os tubos que são positivos nessa primeira etapa comprova que a
crescimento de micro-organismo, mas não especifica que tipo de micro-organismo
cresceu nesse meio, onde sera necessário fazer mais de um procedimento para identificar
o micro-organismo.

Segunda etapa: prova confirmativa do NMP

Nesse procedimento e realizado com os tubos que deram positivo na prova
presuntiva com o bico de bunser acesso para não ocorre contaminação na amostra e com
o auxilio da alca de drigalski que e necessário flambar a alca no bico de bunser antes de
transferir as alicortas de um tubo para o ouro no qual a alca sera flambada em cada tudo
que sera transferido a amostra positiva.
sendo transferindo da amostra positiva para os tubos com caldo Verde Brilhante
Bile (VB), esse caldo e especifico para confirmar na amostra a contaminação de
coliformes totais, onde os tubos são marcados com as mesma diluições dos tubos
positivos do caldo (LST). Realizando essa transferência para os tubos (BV) e colocados
na estufas por 37 graus por 24 horas. No dia seguinte são observados os tubos que
deram positivos ou não, sendo positivo e feito novamente outro procedimento para
confirmar outro tipos de micro-organismo.

6
Terceira etapa: prova confirmativa para termotolerantes
Nessa epata e usado o tubos com caldo (EC) com intuito de confirmar a presença
de bactérias termotolerantes da especies principalmente a Eschirichia Coli.
E transferindo para os tubos com o caldo (EC) com tubos de Dunham, os tubos que
deram positivos nos tubos (BV) com o auxilio da alca de Drigalski e com o bico de bunser
acesso para não haver contaminação no procedimento onde e flambado a alca antes de
transferir de um tubo para o outro, esse procedimento e realizado para cada tudo que
sera transferido com os tubos identificados com a mesma diluição dos tubos positivos do
caldo (BV) e realizado os procedimentos adequados, dessa forma e transferindo para
cada tubo especifico e em seguida e colocado os tubos no equipamento em banho maria
a 44 graus por 24 horas, no dia seguinte e observados os tubos positivos e negativos no
qual sera positivos os tubos que tiverem turbidez e formação de gás nos tubos de Durham

7
4.RESULTADOS E DISCUSSÃO

4.1 A técnica do NMP: Prova Presuntiva

Essa técnica requer a confirmação de coliformes totais nas amostras de água no

qual foi inoculado em tubos múltiplos com diluição de 10 ml, 1 ml, 0,1 ml com tubo de
Durham com caldo especifico para o presuntivo em cada tubo o (LST) Lauril Sulfato
Triptose, onde vai ser confinado crescimento ou não de micro-organismo, porem sera
necessário outras tipos de epatas para os tubos que derem positivos.
Os tubos que deram positivos ou não, foi confinado através de caracterizas dos
tubos, os positivos no caldo LST produziram gaz devido o micro-organismo consumir a
lactose do caldo assim produzindo o gás e a observação devido os tubos ficarem turvos
Os resultados negativos ocorre devido a não produção de gás nos Tubos de
Durham e a não turbidez no caldo LST. Mesmo dando negativo como e o teste presuntivo
pode ser que tenha microrganismo na amostra. Na tabela 1 demostra os resultados para
primeira etapa da técnica presuntiva do NMP.

8
Tabela 1 Resultados da primeira técnica do NMP para controle microbiológico da água
( primeira etapa Presuntivo )
Tubos Múltiplos de 3 Positivos Tubos Múltiplos de 3 Negativos

Amostra 01 Amostra 01

10 ml 10 ml 3

1 ml 1 ml 3

0,1 ml 0,1 ml 3

Amostra 02 Amostra 02

10 ml 3 10 ml

1 ml 3 1 ml

0,1 ml 1 0,1 ml 2

Amostra 03 Amostra 03

10 ml 3 10 ml

1 ml .3 1 ml

0,1 ml 3 0,1 ml

Amostra 04 Amostra 04

10 ml 3 10 ml

1 ml 2 1 ml 1

0,1 ml 1 0,1 ml 2

9
4.2 Técnica do NMP: Prova Confirmativa

Com os resultado da primeira etapa com os tubos positivos que foram inoculados
no caldo LST. Essa amostra e transferido para outro tubos múltiplos com a mesma
diluição de 10 ml, 1 ml e 0,1 ml com tubos de Durham em caldo Verde Brilhante Bile
( VB ), que e o meio seletivo para coliformes totais. Na tabela 2 mostra o resultado da
etapa do NMP Confirmatória para coliformes totais em tubos positivos.

Tabala 2 Resultado da Segunda técnica do NMP para controle de micro-organismo na

água ( Segunda epata do NMP Etapa Confirmativa).
Tubos Múltiplos de 3 Positivos Tubos Múltiplos de 3 Negativos

Amostra 02 Amostra 02

10 ml…3 10 ml

1 ml…..3 1 ml

0,1 ml...1 0,1 ml….2

4.3 técnica do NMP: Prova Confirmativa para Termotolerante

Com os tubos positivos da segunda epata com caldo (BV) e transferido para outros
tubos com mesma diluição 10ml, 1ml e 0,1 ml em caldo (EC) para confirmar os coliformes
termotolerantes conforme o resultado obtido de tubos positivos na tabela 3.
Tabala 3 Resultado da Terceira técnica do NMP para controle de micro-organismo na
água ( Terceira epata do NMP Etapa Confirmativa para Termotolerante ).
Tubos Múltiplos de 3 Positivos Tubos Múltiplos de 3 Negativos

Amostra 02 Amostra 02

10 ml….3 10 ml

1 ml…...3 1 ml

0,1 ml…0 0,1 ml…..3

10
4.4 Resultados da técnica do NMP

Os resultado e obtidos através das combinações dos tubos positivos nas

sequencias das diluições dos tubos múltiplos de 3, então sera determinado a estimativa
dos números mais provável que e correspondente na tabela de Hoshins

Prova presuntiva

AMOSTRAS N. TUBOS POSITIVOS NMP/g ou ml

Amostra 1 000 < 3,0

Amostra 2 331 460

Amostra 3 333 > 1 100

Amostra 4 321 150

Prova confirmativa

AMOSTRAS N. TUBOS POSITIVOS NMP/g ou ml

Amostra 2 331 460

Prova Termotolerante

AMOSTRAS N. TUBOS POSITIVOS NMP/g ou ml

Amostra 2 330 240

11
5. CONSIDERAÇÕES FINAIS

Essa técnica de numero mais provável feita no laboratório tem como finalidade
comprovar colonias de micro-organismo e diferenciar o tipo de bactérias dos grupos de
coliformes totais e bactérias termotolerantes existente princialmente em água e alimentos
que poderá contaminar o alimentos e transmite doenças, no qual vai ser observado a
quantidade estimativa dessas colonias para saber se estar no limite estabelecido em
números mais provável para a quantidade da amostra,
No entanto a técnica do (NMP) realizado no laboratório de microbiologia do
Instituto Federal de Sergipe (IFS) pelos os alunos do curso Superior de Tecnologia em
Alimentos ministrado pela professora Juliana Serio do segundo período sendo explicado
passo a passo da técnica do (NMP) em amostra de água, no qual o resultado foi positivo
para micro-organismo, para os grupos de coliformes totais e bactérias termotolerantes da
especies Escherichia Coli e através da tabela de Hoshins estabeleceu as colonias
estimativas dos números mais provável da população das bactérias em NMP/g ou ml.

12
REFERÊNCIAS

SILVA, Neusely da et al. Manual de métodos de análise microbiológica de alimentos e

água. 1. ed. São Paulo: Blucher, 2017. E-book. Disponível em:
https://plataforma.bvirtual.com.br. Acesso em: 27 dez. 2023.

13