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Alpes, um ambiente com temperaturas muito baixas, poucos nutrientes e sujeitos a altos nveis de
radiao UV. Exploraes nas profundezas do oceano tm revelado um grande nmero de
microrganismos que sobrevivem eterna escurido e sujeitos a presses to altas.
Microrganismos tambm so encontrados em riachos de montanhas originados do derretimento
de neve e em guas quase saturadas de sais, tais como o Mar Morto. Sabe-se que em cerca de
1013 clulas de um ser humano podem ser encontradas, em mdia, cerca de 10 14 clulas
bacterianas.
Os microrganismos formam uma comunidade viva e vibrante no solo. Um solo tpico tem milhes
de bactrias em cada grama. Essa populao microbiana maior nos poucos centmetros do topo
do solo e declina rapidamente com a profundidade. Nenhum nico meio nutriente ou condio de
crescimento pode encontrar todos os nutrientes e outras exigncias necessrias para todos os
microrganismos do solo. Nos ciclos biogeoqumicos, os elementos so oxidados e reduzidos por
microrganismos para fornecer suas necessidades metablicas. Sem os ciclos biogeoqumicos, a
vida na Terra no existiria.
Os microrganismos do ar podem ter origem do solo que so passados para o ar com o auxlio dos
ventos, atravs de gotas de gua que se desprendem da superfcie, atravs de depsitos de
resduos, atravs da respirao e expelio de seres vivos. Os fatores que afetam a microbiota do
ar so: a umidade, a temperatura, a radiao e a densidade populacional. Os principais tipos de
microrganismos encontrados no ar so os esporos de fungos e bactrias esporulantes.
Microrganismos autotrficos crescem em meios quimicamente definidos. Muitas bactria e fungos
crescem normalmente em meios complexos, que so compostos de nutrientes como extratos de
carnes ou de plantas ou de produtos de digesto protica dessas ou de outras fontes. A
composio qumica exata pode conter muitas variaes em diferentes culturas dos produtos. No
meio complexo o principal fornecedor de energia, carbono, nitrognio e enxofre o componente
protico. A protena uma molcula grande relativamente insolvel que a minoria dos
microrganismos pode utilizar diretamente. No entanto, por meio de uma digesto parcial dela,
utilizando produtos cidos ou enzimas, ocorre a produo de pequenas cadeias de aminocidos
denominadas peptonas. Esses fragmentos pequenos e solveis podem ser matabolizados pelos
microrganismos e possuem composio desconhecida.
Meios com caldo de cana so ricos em sacarose, o que favorece o crescimento de leveduras, j
que elas utilizam o acar para obter energia (ATP). Meios a base de batata so ricos em
carboidratos complexos que os fungos so capazes de matabolizar e que bactrias normalmente
no conseguem utilizar como nutrientes. Meios a base de caldo de carne e frango so utilizados
para o crescimento de bactrias, pois so ricos em protenas, lipdios e vitaminas que so
indispensveis para o crescimento bacteriano.
2. Objetivos
Produzir meios alternativos de cultura de menor custo; verificar a existncia de diferentes tipos de
microrganismos em diversos ambientes e superfcies; reconhecer e compreender a relao meio
de cultura e tipos de microrganismos e reconhecer a ubiqidade de microrganismos e a
interferncia do tempo de exposio no crescimento microbiano.
3. Materiais necessrios
3.1 Reagentes:
Acar (glicose)
gar Nutriente
gar Sabouraud
gua destilada
Extrato de levedura
Extrato de solo
Garapa
Infuso de batata
K2HPO4
Soluo de HCl
Soluo de NaOH
3.2 Materiais
Ala de Drigalski
Barbante
Basto de vidro
Bqueres
Caneta permanente de ponta fina
Erlenmeyer
Esptula
Estante para tubos de ensaio
Fita de autoclave
Fsforos
Micropipeta automtica
Papel Kraft
Placas de Petri
Ponteiras para pipetas
Proveta
Recipiente de plstico
Saco plstico
Swabs
Tubos de ensaio
3.3 Equipamentos
Autoclave
Balana semi-analtica
Bico de Bunsen
Capela de fluxo laminar
Estufa incubadora
Geladeira
Panela de presso
Nomes
Meios
de
cultura/
reagent
es
Constituint
es
Composi
o Qumica
Descri
o Fsicoqumica
Riscos
sade/
impacto
ambient
al
Manuse
io
Estocage
m
Refernc
ia
bibliogr
-fica
gar
Nutrien
te
(500 g)
- Digesto
Pptica de
Tecido
Animal (5
g/L)
- Cloreto de
Sdio (5 g/L)
- Extrato de
carne (1,5
g/L)
(agarose e
- Extrato de
levedura
(1,5 g/L)
- gar (15
g/L)
- gua
- polissacardeos
agaropectina
)
carboidratos
maltodextrin
a
- clcio
- fsforo
carboidratos
- ferro
Meio
- Vitamina
com
B6
caldo
de cana - Vitamina C.
- potssio
pH: 7,4
0,2
Aparncia
do p:
amarelo,
homogne
o e livre
circulante
Solidifica
o: Firme,
comparv
el com gel
de
agarose
de 1.5%
Colorao:
Cor mbar
claro.
Transpar
ncia: Gel
levemente
opalescent
e.
- pH 6
- meio
homogne
o.
- glicose
- polissacar-
- gar
deos
- Extrato de
levedura
(agarose e
agaropectina
)
maltodextrin
a
Meio
com
caldo
de
carne/
frango
- Vitaminas
- Ferro
- magnsio
- Niacina
- cido
pantotnico
- fsforo
- potssio
- zinco
- Folacina
- selnio
- cidos
Graxos
- glicose
- gar
- Mel
- polissacardeos
O
descarte
do gar
propicia
o
crescime
n-to de
microrga
-nismos
em
meios
aqutico
s
- pH 7
- meio
homogne
o.
Balana
Autoclav
e
- Bico de
Bunsen
micropipetador.
esptula
- uso de
jaleco
Se
descarta
do no
esgoto
comum,
faz com
que os
microorganismo
s se
multipliquem de
forma
excessiv
a.
Balana
Se
descarta
do no
esgoto
comum,
faz com
que os
microorganismo
s se
multipliquem de
Balana
Autoclav
e
Deve ser
armazenad
o no frasco
com tampa
rosquevel,
a
temperatur
a ambiente
(abaixo de
30 C) e
aps a
preparao
do meio, de
2-8 C.
Possui
validade de
5 anos
(meio no
preparado)
-SPLabor.
Disponve
l em:
http://ww
w.splabor.
com.br/m
eios-decultura/m
eios-naoseletivos/
agarnutrientemodelom001.ht
ml
Manter
refrigerad
o
Ver
referncia
s
bibliogrficas
(Item
5.1.4)
Manter
refrigerad
o
Ver
referncia
s
bibliogrficas
(Item
5.1.4)
- Bico de
Bunsen
micropipetador.
esptula
- uso de
jaleco
Autoclav
e
- Bico de
Bunsen
micropipetador.
- gua
(agarose e
forma
excessiv
a.
agaropectina
)
- gar
Meio - gua
base de destilada
batata
- Infuso de
batata
- glicose
- protenas
carboidratos
(amido)
- pH 5
- meio
homogne
o
- fibras
alimentares
- glicose
- polissacardeos
(agarose e
agaropectina
)
- Solo neutro
Extrato
de solo
destilada
- Micro e
macro
nutrientes
vari-ados
- gar
- K2HPO4
- glicose
- fibras
- gua
- pH entre
5e7
- meio
homogne
o.
- celulose
- polissacardeos
(agarose e
agaropectina
)
gar
Sabour
aud
- Peptona
- glicose
- dextrose
- polissacar-
- gar
deos
- Extrato de
(agarose e
levedura
agaropectina
)
maltodextrin
a
- P fino e
higroscpi
co
- meio
homogne
o
- pH baixo
(5,6)
Se
descarta
do no
esgoto
comum,
faz com
que os
microorganismo
s se
multipliquem de
forma
excessiv
a.
Se
descarta
do no
esgoto
comum,
faz com
que os
microorganismo
s
cresam
de forma
excessiv
a.
O
descarte
do gar
propicia
o
crescime
n-to de
microrga
-nismos
em
meios
aqutico
s ou em
esgoto
comum
esptula
- uso de
jaleco
Balana
Autoclav
e
Manter
refrigerad
o
Ver
referncia
s
bibliogrficas
(Item
5.1.4)
Manter
refrigerad
o
Ver
referncia
s
bibliogrficas
(Item
5.1.4)
Deve ser
armazenad
o no frasco
com tampa
rosquevel,
a
temperatur
a ambiente
(abaixo de
30 C) e
aps a
preparao
do meio, de
2-8 C.
http://w
ww.hexa
systens.
com.br/v
er.asp?
Dep=47
97&Seca
o=79584
&Cat=60
68&Prod
uto=100
378
- Bico de
Bunsen
micropipetador.
esptula
- uso de
jaleco
Balana
Autoclav
e
- Bico de
Bunsen
micropipetador.
esptula
- jaleco
Balana
Autoclav
e
- Bico de
Bunsen
micropipetador.
esptula
- uso de
jaleco
Quantid
ade/
Grupo
(em mL)
Quantid
ade/
Subturma
(em mL)
Total
por
turma
(em
mL)
Volume
final de
reagent
e
prepara
do por T
200 mL
de meio:
2 g de
glicose; 4
g de gar
Volume
final de
reagen
te
usado
por T
80 mL
de
meio:
0,8 g
de
glicose;
1,6 g de
gar
80 mL
de
meio:
0,8 g de
mel;
1,6 g de
gar.
20 mL de
meio: 0,2
g de
glicose;
0,4 g de
gar.
200 mL
de meio:
2 g de
glicose;
4 g de
gar.
600 mL
de meio:
6 g de
glicose;
12 g de
gar.
Meio
com
caldo
de
carne
20 mL de
meio: 0,2
g de mel;
0,4 g de
gar
200 mL
de meio:
0,4 g de
mel;
0,8 g de
gar
600 mL
de meio:
1,2 g de
mel;
2,4 g de
gar
200 mL
de meio:
0,4 g de
mel;
0,8 g de
gar
Meio
com
caldo
de
frango
20 mL de
meio: 0,2
g de mel;
0,4 g de
gar
100 mL
de meio:
1 g de
mel; 2 g
de gar.
300 mL
de meio:
3 g de
mel; 6 g
de gar
100 mL
de meio:
1 g de
mel; 2 g
de gar.
80 mL
de
meio:
0,8 g de
mel; 1,6
g de
gar
Meio
com
caldo
de cana
20 mL de
meio:
1 mL de
garapa,
0,1 g de
extrato
de
levedura;
0,2 g de
gar
200 mL
de meio:
50 mL de
garapa;
10 g de
extrato
de
levedura;
2 g de
gar.
600 mL
de meio:
150 mL
de
garapa;
15 g de
extrato
de
levedura
;
6 g de
gar
200 mL
de meio:
50 mL de
garapa;
10 g de
extrato
de
levedura;
2 g de
gar.
80 mL
de
meio:
4 mL de
garapa;
0,4 g de
extrato
de
levedur
a; 0,8 g
de gar.
Custo de
reagente
s
forneced
ores
R$ 2,59/Kg
de batata;
R$ 119,00/
500 g de
gar; R$
1,35/ g de
glicose
R$ 3,50/
200 g de
carne; R$
119,00/
500 g de
gar;
R$ 0,50/4
g de mel
R$ 2,50/
500 g de
frango;
R$ 119,00/
500 g de
gar;
R$ 0,50/4
g de mel
R$ 2,50/
500 mL de
garapa;
R$ 119,00/
500 g de
gar;
R$ 0,13/g
de extrato
de
levedura
Custo
da
prtic
a/
subturma
R$
2,75
R$
1,48
R$
1,48
R$
0,46
500 g _____ D
1,6 g ____X
D = R$ 1,29
X = R$ 0,38
E = R$ 1,00
Z = R$ 0,10
5 mL ___________ F
0,4 g _____________ W
F = R$ 0,03
W = R$ 0,05
Abrir as placas ao ar livre. Ao final de 5 minutos, fechar uma de cada. Ao final de 15 minutos,
fechar as restantes
Incubar as placar de gar sabouraud 37C e as de gar nutriente temperatura ambiente.
Vestirio masculino
Placa/Condio
Meio base de
batata
N de colnias com
aspecto filamentoso e
descrio
2 colnias
Uma de colorao
marrom e outra
esbranquiada. Ambas
opacas, com centro negro
e bordas claras.
Incontvel
5 morfologias diferentes:
Colnias de tamanhos e cores
variados: rseas, alaranjadas,
esbranquiadas, centro negro
e bordas claras.
Um tipo especfico, incolor,
cresceu sob forma de tapete
sobre a placa. Todas as
colnias apresentaram
aspecto brilhoso.
Nenhuma colnia
1 colnia
Esbranquiada,
apresentando
crescimento na falha do
meio de cultura
No houve crescimento
Incontvel
- 9 morfologias diferentes:
Uma colnia grande, com
centro claro e bordas mais
escuras, sobre outras
colnias; uma grande,
enrugada, com aspecto de
crebro; diversas colnias
translcidas, esbranquiadas,
disformes, com borda
irregular; duas colnias
rseas, com borda irregular,
sobre outras colnias,
apresentando falhas; um tipo
branco, pequeno; outro
alaranjado, pequeno, com
colnias espalhadas por toda
a placa; trs colnias
brancas, irregulares e
cncavas; um tipo rosa claro,
pequeno; outro grande,
branco e translcido.
Formao de um tapete sobre
a placa com colnias
esbranquiadas e pequenas
Incontvel
- 4 morfologias diferentes:
Colnias rosa claro,
pequenas; colnias
esbranquiadas, pequenas,
sobre toda a placa; trs
Maaneta da porta
da sala 406
Bebedouro do
corredor do 4 andar
Meio base de
batata
No houve crescimento
15 colnias
Duas colnias de colorao
amarela, brilhante e
arredonda.
Doze colnias de colorao
branca, brilhante e arredonda.
Uma colnia transparente,
brilhante com borda irregular.
No houve crescimento
No houve crescimento
No houve crescimento
No houve crescimento
No houve crescimento
Meio base de
batata
Meio com caldo de
carne
Mouse do
computador do
laboratrio de
Informtica
3 colnias
Meio base de
batata
Incontvel
- 5 morfologias diferentes: Formao de um tapete de
micro-organismos de cor acinzentada.
Incontvel
- 3 morfologias diferentes: Formao de um tapete de
micro-organismos de cor acinzentada e aspecto estriado
e algumas colnias com aspecto mucoso e brilhantes.
No houve crescimento
Incontvel
Houve crescimento abundante de micro-organismos de
morfologias de variados aspectos, que cobriram
completamente a placa.
1 colnia
- borda branca e o centro
verde, bem rugoso
(aspecto semelhante a
um algodo). Tamanho
mdio.
No houve crescimento
4 colnias
Duas colnias brancas com
aspecto brilhante, uma
colnia amarelo claro com
aspecto brilhante e uma
colnia branca com forma
distorcida
No houve crescimento
1 colnia
Colnia com colorao
branca e com um
tamanho relativamente
grande em relao s
demais colnias
No houve crescimento
7 colnias
As colnias apresentavam
uma colorao branca e
amarela. Eram brilhantes e
apresentavam um tamanho
pequeno.
Tabela 04. Isolamento de bactrias do solo meio de cultura alternativo: Extrato de solo
Amostra
N de colnias e descrio
No houve crescimento
Solo do bosque
No houve crescimento
8 colnias - 1 morfologia com aspecto brilhante,
incolor e pequenas
Solo do bosque
Rampa do
Meio de
cultura
Tempo de
exposio
(min)
N de colnias e descrio
Com aspecto filamentoso
gar nutriente
No houve crescimento
3 andar
gar
Sabouraud
Bosque
gar nutriente
gar
Sabouraud
gar nutriente
15
No houve crescimento
8 colnias
- 5 morfologias diferentes
15
No houve crescimento
No houve crescimento
15
No houve crescimento
67 colnias
- 7 morfologias diferentes
45 colnias
- 17 morfologias diferentes
No houve crescimento
15
Incontvel
- 25 morfologias diferentes
No houve crescimento
No houve crescimento
15
No houve crescimento
15
Cantina
gar nutriente
24 colnias
- colnias arredondadas,
transparentes em seu
centro e brancas nas
bordas
29 colnias
- Diferentes formas e cores,
colnias sobrepostas.
No houve crescimento
15
No houve crescimento
gar
Sabouraud
11 colnias
6 morfologias diferentes
Incontvel
15 morfologias diferentes,
tpicas de leveduras
23 colnias
- 6 morfologias diferentes
Hall
gar
sabouraud
Incontvel
Todas as colnias de
mesma morfologia
4 colnias
Trs morfologias: uma
rosa, com bordas brancas;
outra cinza com a borda
cinza claro; a outra
laranja.
15 colnias
- arredondadas, transparentes em seu centro e brancas
nas bordas.
24 colnias
- arredondadas, com bordas
mais escuras que o centro
1 colnia
- pequena e arredondada
No houve crescimento
3 colnias
Colnias brancas, leitosas e
brilhantes.
15 colnias
Duas morfologias: uma com o
mesmo aspecto das
apresentadas na placa
exposta por cinco minutos e a
outra amarela e brilhante.
4 colnias
Duas morfologias: uma
branca e brilhante e a outra
bege claro e brilhante.
15
6 colnias
Cinco morfologias: uma
rosa, com bordas brancas;
outra cinza com a borda
cinza claro; outra cinza
com a borda bege; outra
laranja claro com a borda
laranja mais claro; e a
ltima toda branca.
6 colnias
Trs morfologias: uma bege
claro e brilhante; outra
cinza e leitosa; e a ltima
branca e brilhante