Manual Pratico de Analise de Agua

Fundao Nacional de Sade
Manual Prtico de Anlise de gua

4 edio
Braslia, 2013
Copyright 2004 Fundao Nacional de Sade. Todos os direitos reservados. permitida a reproduo parcial ou total desta obra, desde que citada a fonte e que no seja para venda ou qualquer fim comercial. A responsabilidade pelos direitos autorais de textos e imagens desta obra da rea tcnica. A coleo institucional do Ministrio da Sade pode ser acessada, na ntegra, na Biblioteca Virtual em Sade do Ministrio da Sade: http://www.saude.gov.br/bvs O contedo desta e de outras obras da Editora do Ministrio da Sade pode ser acessado na pgina: http://www.saude.gov.br/editora Tiragem: 4 edio 2013 .000 exemplares Elaborao, distribuio e informaes: MINISTRIO DA SADE Fundao Nacional de Sade Departamento de Sade Ambiental Coordenao de Controle da Qualidade da gua Setor de Autarquias Sul, Quadra 4, Bloco N, 9 andar, Ala Sul CEP: 70070-040, Braslia DF Tel.: (61) 3314-6670 / 6396 Home page: http://www.funasa.gov.br Editor: Coordenao de Comunicao Social Diviso de Editorao e Mdias de Rede Setor de Autarquias Sul, Quadra 4, Bloco N, 2 andar, Ala Norte CEP: 70070-040, Braslia DF Home page: http://www.funasa.gov.br Impresso no Brasil / Printed in Brazil Ficha Catalogrfica Brasil. Fundao Nacional de Sade. Manual prtico de anlise de gua / Fundao Nacional de Sade 4. ed. Braslia : Funasa, 2013. 150 p. ISBN 1. Anlise da gua. 2. Controle da qualidade da gua. 3. Consumo de gua (Sade ambiental). I. Ttulo. II. Srie. CDU 628 Ttulos para indexao: Em ingls: Practical manual on water analysis Em espanhol: Manual prctico de anlisis de agua
Sumrio
Apresentao..................................................................5 Exame bacteriolgico da gua.........................................7 Introduo.................................................................9 Bactrias do grupo coliforme..................................11 Material utilizado em bacteriologia.........................13 Preparo do material de vidro...................................14 Preparao dos meios de cultura.............................15 Modo de usar a gua de diluio quando for determinar o NMP de coliformes.............................17 Coleta de amostras de gua para exames bacteriolgicos........................................................18 Procedimentos para o exame..................................21 -- Coliformes totais TM.........................................21 -- Coliformes termotolerantes TM.........................26 -- Contagem de bactrias heterotrficas...................28 -- Coliformes totais MF.........................................29 -- Coliformes termotolerantes MF..........................32 -- Coliformes totais e Escherichia coli......................36 Esterilizao............................................................38 Anlises fsico-qumicas da gua ..................................41 Anlises Titulomtricas............................................43 -- Alcalinidade total.................................................43 -- Gs carbnico livre..............................................46 -- Cloretos...............................................................48 -- pH.......................................................................54 Anlises colorimtricas...........................................56 -- Cloro residual livre...............................................56 -- Cor.......................................................................57
-- Alumnio..............................................................59 -- Turbidez...............................................................63 -- Temperatura.........................................................67 -- Fluoretos..............................................................68 -- Coleta e preservao de amostras para anlise fsico-qumicas.....................................................73 -- Ensaio de coagulao (Jar-test).............................74 -- Determinao do teor de cloro ativo....................80 Preparao dos reagentes utilizados nas anlises constantes nesse manual...............................................83 Reagentes para alcalinidade....................................85 Reagentes para CO2................................................87 Reagentes para anlise de cloretos..........................89 Reagentes para anlise de dureza............................91 Reagentes para anlise de alumnio........................94 Reagentes para anlise de fluoretos.........................96 Regras gerais para corrigir as solues tituladas......99 Limpeza de material de vidro no laboratrio.........100 Relao de materiais de laboratrio de anlise de gua.................................................................102 Biossegurana em laboratrio...............................107 Apndice A Coleta e preservao de amostras para contagem de clulas de cianobactrias e cianotoxinas................................................................ 111 Apndice B Determinao de Giardia sp e Cryptosporidium sp em gua.......................................119 Bibliografia..................................................................143 Elaborao..................................................................147
Apresentao
Esse manual, elaborado de forma e linguagem simples, tem como objetivo auxiliar pessoas que trabalham nos laboratrios de controle da qualidade da gua de estaes de tratamento de pequeno e mdio portes no desenvolvimento de suas atividades dirias. A ideia surgiu da necessidade de se ter no laboratrio um instrumento de consulta que pudesse acompanhar os passos do tcnico a todo instante e em qualquer lugar. Nele esto descritos os procedimentos mais comuns realizados rotineiramente no laboratrio de uma Estao de Tratamento de gua (ETA). Todas as tcnicas adotadas nesse manual atendem ao Artigo 22 da Portaria n 2.914/2011 do Ministrio da Sade, estando de acordo com as normas nacionais e internacionais mais recentes, tais como: I) Standard Methods for the Examination of Water and Wastewater de autoria das instituies American Public Health Association (APHA), American Water Works Association (AWWA) e Water Environment Federation (WEF); II) United States Environmental Protection Agency (USEPA); III) Normas publicadas pela International Standartization Organization (ISO); e Metodologias propostas pela Organizao Mundial da Sade (OMS). Para qualquer procedimento abordado aqui que necessite de um conhecimento mais profundo, deve-se consultar os grandes compndios que tratam do assunto. A primeira parte do manual aborda os exames bacteriolgicos envolvendo a pesquisa de coliformes totais e termotolerantes, inclusive Escherichia coli, e a contagem padro de bactrias heterotrficas, desde a preparao do material a ser utilizado, passando pela realizao dos ensaios, at a emisso de resultados. Na segunda parte, esto descritas as tcnicas das anlises fsico-qumicas e testes de rotina de
uma ETA e, finalmente, a preparao de todos os reagentes utilizados. Foram includos, tambm, alguns procedimentos de biossegurana em laboratrio, bem como uma relao de equipamentos e materiais de laboratrio. No Apndice I, so apresentadas as tcnicas de coleta e preservao de amostras para contagem de clulas de cianobactrias e cianotoxinas. No Apndice II, a tcnica de determinao de Giardia sp e Cryptosporidium sp em gua pela tcnica de filtrao, separao imunomagntica e microscopia de imunofluorescncia. Acredita-se que os parmetros aqui descritos so suficientes para monitorar o controle da qualidade da gua distribuda para consumo humano. O exame da gua destinada ao consumo humano de fundamental importncia, uma vez que permite aferir a ausncia ou no de micro-organismos ou substncias qumicas nela presentes, que podem ser prejudiciais sade das pessoas.
Exame bacteriolgico da gua

Coliformes totais Coliformes termotolerantes Bactrias heterotrficas
A deteco e quantificao de todos os micro-organismos patognicos potencialmente presentes na gua trabalhosa, demanda tempo, os custos so elevados e nem sempre se obtm resultados positivos ou que confirmem a presena dos micro-organismos. O objetivo do exame microbiolgico da gua fornecer subsdio a respeito da sua potabilidade, isto , ausncia de risco de ingesto de micro-organismos causadores de doenas, geralmente provenientes da contaminao pelas fezes humanas e outros animais de sangue quente. Vale ressaltar que os micro-organismos presentes nas guas naturais so, em sua maioria, inofensivos sade humana. Porm, na contaminao por esgoto sanitrio esto presentes micro-organismos que podero ser prejudiciais sade humana. Os micro-organismos patognicos incluem vrus, bactrias, protozorios e helmintos. Na tabela esto relacionadas algumas doenas veiculadas pela gua e seus agentes.
Doenas Origem bacteriana entes Febre tifoide e paratifoide Disenteria bacilar Clera Gastroenterites agudas e Diarreias Agentes patognicos Salmonella typhi Salmonella parathyphi A e B Shigella sp Vibrio cholerae Escherichia coli enterotxica Campylobacter Yersnia enterocoltica Salmonella sp Shigella sp Vrus da hepatite A e E Vrus da poliomielite Vrus Norwalk Rotavirus Enterovirus Adenovirus
Introduo
Origem viral Hepatite A e E Poliomielite Gastroenterites agudas e crnicas
Origem parasitria Disenteria amebiana Gastroenterites
Entamoeba histolytica Girdia lmblia Cryptosporidium
Fonte: OPAS, 1999 Manual Prtico de Anlise de gua
A gua potvel no deve conter micro-organismos patognicos e deve estar livre de bactrias indicadoras de contaminao fecal. Como indicadores de contaminao fecal, so eleitas como bactrias de referncia as do grupo coliforme. O principal representante desse grupo de bactrias chama-se Escherichia coli. A razo da escolha desse grupo de bactrias como indicador de contaminao da gua deve-se aos seguintes fatores: a. So encontradas nas fezes de animais de sangue quente, inclusive dos seres humanos. b. So facilmente detectveis e quantificveis por tcnicas simples e economicamente viveis, em qualquer tipo de gua. c. Sua concentrao na gua contaminada possui uma relao direta com o grau de contaminao fecal desta. d. Tem maior tempo de sobrevivncia na gua que as bactrias patognicas intestinais, por serem menos exigentes em termos nutricionais, alm de serem incapazes de se multiplicarem no ambiente aqutico ou se multiplicarem menos que as bactrias entricas. e. So mais resistentes aos agentes tensoativos e agentes desinfetantes do que bactrias patognicas. A Portaria n 2.914/2011 do Ministrio da Sade (Portaria de Potabilidade) estabelece que seja verificada, na gua para consumo humano para garantir sua potabilidade, a ausncia de coliformes totais e Escherichia coli e determinada a contagem de bactrias heterotrficas.
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A mesma portaria determina que a contagem de bactrias heterotrficas deva ser realizada como um dos parmetros para avaliar a integridade do sistema de distribuio (reservatrio e rede), devendo ser feita em 20% das amostras mensais de coliformes totais nos sistemas de distribuio, recomendando que no deva exceder a 500 Unidades Formadoras de Colnias por 1 mililitro de amostra (500 UFC/mL). Para a conformidade do padro microbiolgico de potabilidade obrigatrio a ausncia de coliformes totais em 100 mL de amostra na sada do tratamento. No entanto, conforme Anexo I da Portaria MS n 2.914/2011, admite-se a presena de coliformes totais em apenas 1 amostra mensal para sistemas ou solues coletivas que abastecem menos de 20.000 habitantes e em 5% das amostras mensais em sistemas ou solues coletivas que abastecem mais de 20.000 habitantes. Ressalta-se que em ambas as situaes no permitida a presena de Escherichia coli na gua para consumo humano.
Bactrias do grupo coliforme

Conceitos:
Coliformes totais (bactrias do grupo coliforme) - bacilos gram-negativos, aerbios ou anaerbios facultativos, no formadores de esporos, oxidase-negativos, capazes de desenvolver na presena de sais biliares ou agentes tensoativos que fermentam a lactose com produo de cido, gs e aldedo a 35,0 0,5oC em 24-48 horas, e que podem apresentar atividade da enzima - galactosidase. A maioria das bactrias do grupo coliforme pertence aos gneros Escherichia, Citrobacter, Klebsiella e Enterobacter, embora vrios outros gneros e espcies pertenam ao grupo.
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Coliformes termotolerantes - subgrupo das bactrias do grupo coliforme que fermentam a lactose a 44,5 0,2oC em 24 horas; tendo como principal representante a Escherichia coli, de origem exclusivamente fecal. Escherichia coli - bactria do grupo coliforme que fermenta a lactose e manitol, com produo de cido e gs a 44,5 0,2oC em 24 horas, produz indol a partir do triptofano, oxidase negativa, no hidroliza a ureia e apresenta atividade das enzimas galactosidase e glucoronidase, sendo considerado o mais especfico indicador de contaminao fecal recente e de eventual presena de organismos patognicos. A origem fecal da E. coli inquestionvel e sua natureza ubqua pouco provvel, o que valida seu papel mais preciso de organismo indicador de contaminao tanto em guas naturais quanto tratadas. A Contagem Padro de Bactrias muito importante durante o processo de tratamento da gua, visto que permite avaliar a eficincia das vrias etapas do tratamento. importante, tambm, conhecer a densidade de bactrias, tendo em vista que um aumento considervel da populao bacteriana pode comprometer a deteco de organismos coliformes. Embora a maioria dessas bactrias no seja patognica, pode representar riscos sade, como tambm deteriorar a qualidade da gua, provocando odores e sabores desagradveis.
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Material utilizado em bacteriologia

a) autoclave; b) estufa bacteriolgica; c) estufa de esterilizao e secagem; d) balana; e) destilador; f) banho-maria; g) contador de colnias; h) ala de platina com cabo; i) tubo de Durhan; j) tubo de ensaio; k) algodo em rama; l) meios de cultura; m) frascos de coleta; n) pipetas graduadas; o) pipetador; p) papel-alumnio; q) lamparina a lcool ou bico de Bunsen; r) placas de Petri; s) pina de ao inox; t) membranas filtrantes; u) porta-filtro de vidro ou ao inox; v) lmpada ultravioleta.
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Preparo do material de vidro

Tubos de ensaio
a) colocar o tubo de Durhan na posio invertida dentro do tubo de ensaio; b) tampar o tubo de ensaio com um chumao de algodo em rama.
Frascos de coleta
a) colocar duas gotas (0,1 mL) de Tiossulfato de Sdio a 10% dentro do frasco; b) colocar uma tira de papel-alumnio entre a boca e a tampa do frasco; c) envolver a boca e tampa do frasco em papel-alumnio.
Pipetas
a) colocar um pequeno chumao de algodo no bocal da pipeta; b) envolv-la em papel-alumnio ou papel-madeira(Kraft).
Placas de petri de vidro

a) envolv-las em papel-alumnio ou papel-madeira.
Nota: Frascos de coleta, pipetas e placas de Petri devem ser esterilizados e antes de serem preparados devem estar limpos e secos (ver esterilizao pg. 38).
Meios de cultura
a) caldo lactosado; b) caldo lactosado verde brilhante Bile a 2%;
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c) caldo EC; d) Plate Count Agar.
Preparao dos meios de cultura

Caldo lactosado de concentrao dupla
a) pesar 26 gramas do meio de cultura e dissolver em 1.000 mL de gua destilada; b) distribuir em tubos de ensaio (10 mL em cada tubo), tampar os tubos; c) esterilizar a 121oC (1 Kg/cm2 de presso) em autoclave durante 15 minutos; d) deixar esfriar; e) guardar no refrigerador (vlido por uma semana).
Caldo lactosado de concentrao simples

a) pesar 13 gramas do meio de cultura desidratado e dissolver em 1.000 mL de gua destilada; b) distribuir em tubos de ensaio (10 mL em cada tubo), tampar os tubos; c) esterilizar a 121oC (1 Kg/cm2 de presso) em autoclave durante 15 minutos; d) deixar esfriar; e) guardar no refrigerador (vlido por uma semana).
Caldo lactosado verde brilhante bile a 2%

a) pesar 40 gramas do meio de cultura desidratado e dissolver em 1.000 mL de gua destilada;
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b) distribuir em tubos de ensaio (10 mL em cada tubo), tampar os tubos; c) esterilizar a 121oC (1 Kg/cm2 de presso) em autoclave durante 15 minutos; d) deixar esfriar; e) guardar no refrigerador (vlido por uma semana).
Meio EC
a) pesar 37,0 gramas do meio desidratado e dissolver em 1000 mL de gua destilada; b distribuir em tubos de ensaio contendo o tubo Durhan invertido, 10 mL em cada tubo, tampar os tubos; c) esterilizar a 121oC (1Kg/cm2 de presso) em autoclave durante 15 minutos; d) guardar no refrigerador (vlido por 96 horas).
Plate Count Agar

a) pesar 20,5 gramas do meio de cultura desidratado e dissolver em 1000 mL de gua destilada fria; b) deixar em repouso durante 5 minutos; c) aquecer, agitando frequentemente com basto de vidro, at completa dissoluo do meio (durante o aquecimento no deixar entrar em ebulio); d) se necessrio, ajustar o pH para 7,0 com Hidrxido de Sdio soluo normal (NaOH 1N); e) distribuir em tubos de ensaio com tampa roscvel (12 mL em cada tubo); f) esterilizar a 121oC (1 Kg/cm2 de presso) em autoclave durante 15 minutos.
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Notas: 1. Esse meio, depois de frio, se solidifica. Fundir em banho-maria antes de us-lo. 2. Devido variedade de meios de culturas existentes no mercado, seguir sempre as instrues do fabricante, que vm estampadas no rtulo do frasco.
gua de diluio
Soluo 1 - pesar 34 gramas de fosfato de potssio monobsico (KH2PO4) e dissolver em 500 mL de gua destilada, ajustar o pH para 7,2 com soluo hidrxidos de sdio, soluo 1N e diluir a 1 litro com gua destilada. Normalmente so necessrios 175 mL de NaOH 1N para elevar o pH. Soluo 2 - pesar 81,1 gramas de cloreto de magnsio hexahidratado (MgCl2.6H2O) e dissolver em 1 litro de gua destilada. Soluo 3 - adicionar 1,25 mL da soluo 1 e 5 mL da soluo 2 a 1 litro de gua destilada. Distribuir em tubos de ensaio em quantidade que, aps autoclavao, assegurem um volume de 9 0,2 mL. - esterilizar em autoclave a 121oC (1Kg/cm2 de presso) durante 15 minutos.
Modo de usar a gua de diluio quando for determinar o NMP de coliformes

a) tomar 1 tubo de ensaio contendo 9 0,2 mL de gua de diluio esterilizada; b) adicionar 1 mL da amostra de gua a ser examinada; c) misturar bem. Est pronta a diluio 1:10;
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d) tirar da diluio acima, com pipeta esterilizada, 1 mL e inocular no tubo contendo caldo lactosado de concentrao simples. (diluio 1:100).
Coleta de amostras de gua para exames bacteriolgicos

A coleta de amostra um dos passos mais importante para a avaliao da qualidade da gua. Portanto, essencial que a amostragem seja realizada com precauo e tcnica para evitar todas as fontes de possvel contaminao. As amostras devem ser coletadas em frascos de vidro branco, boca larga, com tampa de vidro esmerilhada, bem ajustada, capacidade de 125 mL, previamente esterilizados ou saco plstico estril, descartvel, contendo pastilha de tiossulfato de sdio. Os frascos para a coleta de guas cloradas devem receber, antes de serem esterilizados, 0,1 mL (2 gotas) de tiossulfato de sdio a 10%.
Procedimentos para coleta em residncias

a) lavar as mos com gua e sabo; b) limpar a torneira do usurio com um pedao de algodo embebido em lcool, 70% e/ou hipoclorito de sdio 100mg/L; c) abrir a torneira e deixar escorrer a gua durante 1 ou 2 minutos; d) coletar a amostra de gua; e) encher com pelo menos 3/4 de seu volume;
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f) tampar o frasco, identific-lo, anotando endereo, hora, e nome do coletor, etc; g) marcar o frasco com o nmero da amostra, correspondente ao ponto de coleta; h) preencher a ficha de identificao da amostra de gua; i) colocar o frasco da amostra na caixa de isopor com gelo; j) lacrar, identificar e enviar a caixa para o laboratrio. O tempo de coleta e a realizao do exame no devem exceder 24 horas.
Nota: Alm de residncias as amostras podem ser coletadas em hospitais, escolas, torneiras pblicas e pontos considerados vulnerveis. No caso de utilizao do hipoclorito de sdio para desinfeco da torneira, deve-se remov-lo completamente antes da coleta.
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Fases do procedimento
Fonte: OMS, 1998 (adaptado)
Outros locais de coleta

Nas estaes de tratamento, as amostras podem ser coletadas na captao, chegada da gua bruta antes do canal da Parshall, nos decantadores, na sada dos filtros e nos reservatrios de gua tratada.
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Procedimentos para o exame

Coliformes totais
Mtodo dos tubos mltiplos (TM) Material necessrio a) tubo de ensaio; b) estante para tubo de ensaio; c) tubo de Durhan; d) pipeta graduada de 10 mL; e) pipeta graduada de 1 mL; f) bico de Bunsen ou lamparina a lcool; g) caldo Lactosado de concentrao dupla; h) caldo Lactosado de concentrao simples; i) caldo Lactosado Verde Brilhante Bile a 2%; j) gua de diluio; k) ala de platina com cabo de Kolle; l) estufa bacteriolgica.
Execuo do teste
Teste presuntivo a) tomar uma bateria contendo 15 tubos de ensaio distribudos de 5 em 5; b) nos primeiros 5 tubos, (os que contm caldo lactosado de concentrao dupla) inocular, com pipeta esteriliManual Prtico de Anlise de gua
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zada, 10 mL da amostra de gua a ser examinada, em cada tubo. (Diluio 1:1); c) nos 10 tubos restantes (os que contm caldo lactosado de concentrao simples), inocular nos 5 primeiros 1 mL da amostra (Diluio 1:10) e nos 5 ltimos tubos, inocular 0,1 mL da amostra, em cada tubo. (Diluio 1:100). Ver pgina 15; d) misturar; e) incubar a 35 0,5oC durante 24/48 horas; f) se no final de 24/48 horas, houver a formao de gs dentro do tubo de Durhan, significa que o teste presuntivo foi Positivo. Neste caso, fazer o teste confirmativo. Se no houver a formao de gs durante o perodo de incubao, o exame termina nessa fase e o resultado do teste considerado negativo. Observao: No lugar do caldo lactosado pode ser usado o caldo Lauril Triptose. Teste confirmativo a) tomar o nmero de tubos do teste presuntivo que deram Positivos (formao de gs) nas 3 diluies 1:1; 1:10 e 1:100; b) tomar igual nmero de tubos contendo o meio de cultura verde brilhante Bile a 2%; c) com a ala de platina, previamente flambada e fria, retirar de cada tubo positivo uma poro de amostra e inocular no tubo correspondente contendo o meio verde brilhante. Esse procedimento chama-se repicagem; d) identificar os tubos;
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e) incubar durante 24/48 horas a 35 0,5oC; f) se no final do perodo de 24/48 horas houver a formao de gs dentro do tubo de Durhan o teste considerado positivo. Caso no haja formao de gs, o teste considerado negativo.
Fases de teste
Inocular em CL ou CLT e inocular por 24 2 hs a 35 0,50C (A) Formao de gs ou crescimento forte. Confirmar em VB a 35 0,50C durante 24/48 horas (B) Ausncia de gs ou produo duvidosa. Incubar por + 24 horas
1) No produz gs. Ausncia do grupo coliforme
2) Produz gs. Grupo coliforme confirmado.
1) Produo de gs ou produo duvidosa e crescimento forte. Confirmar como em (A)
2) Ausncia de gs. teste negativo para o grupo coliforme
Nota: CL = caldo lactosado CLT = caldo lauril triptose VB = verde brilhante bile a 2%
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Expresso dos resultados

a) os resultados so expressos em NMP (Nmero Mais Provvel) /100 mL de amostra. b) para se determinar o NMP, verifica-se a combinao formada pelo nmero de tubos positivos que apresentaram as diluies 1:1; 1:10 e 1:100 no Teste Confirmativo.
Exemplo:
a) nos 5 tubos da diluio 1:1, obtiveram-se 3 tubos positivos; b) nos 5 tubos da diluio 1:10, obtiveram-se 2 tubos positivos; c) nos 5 tubos da diluio 1:100, obteve-se 1 tubo positivo; d) formou-se, portanto, a combinao 3-2-1; e) determina-se o NMP consultando a Tabela 1. Se no quiser trabalhar com 15 tubos para determinar o NMP. fazer apenas 5 tubos na diluio 1:1 (10 mL do meio de cultura + 10 mL da amostra) e calcular o NMP. consultando a tabela 2.
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Tabela 1 NMP. com limite de confiana de 95% para vrias combinaes de resultados positivos quando 5 tubos so usados para cada diluio (10 mL, 1,0 mL e 0,1 mL)
Combinao de positivos 0-0-0 0-0-1 0-1-0 0-2-0 1-0-0 1-0-1 1-1-0 1-1-1 1-2-0 2-0-0 2-0-1 2-1-0 2-1-1 2-2-0 2-3-0 3-0-0 3-0-1 3-1-0 3-1-1 3-2-0 3-2-1 4-0-0 4-0-1 4-1-0 4-1-1 4-1-2 4-2-0 4-2-1 4-3-0 4-3-1 4-4-0 5-0-0 5-0-1 5-0-2 5-1-0 5-1-1 5-1-2 5-2-0 5-2-1 5-2-2 5-3-0 5-3-1 5-3-2 5-3-3 5-4-0 5-4-1 5-4-2 5-4-3 5-4-4 NMP./100 mL <2 2 2 4 2 4 4 6 6 4 7 7 9 9 12 8 11 11 14 14 17 13 17 17 21 22 26 26 27 33 34 23 30 40 30 50 60 50 70 90 80 110 140 170 130 170 220 280 350 Limites Inferior 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 1.0 2.0 2.0 1.0 2.0 2.0 3.0 3.0 5.0 3.0 4.0 4.0 6.0 6.0 7.0 5.0 7.0 7.0 9.0 12 9.0 12 12 15 16 9 10 20 10 20 30 20 30 40 30 40 60 80 50 70 100 120 160 Superior 10 10 13 11 15 15 18 18 17 20 21 24 25 29 24 29 29 35 35 40 38 45 46 55 63 56 65 67 77 80 86 110 140 120 150 180 170 210 250 250 300 360 410 390 480 560 690 820
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Continuao da tabela 1
Combinao de positivos 5-5-0 5-5-1 5-5-2 5-5-3 5-5-4 5-5-5 Fonte: APHA, 1985 NMP./100 mL 240 300 500 900 1600 1600 Limites Inferior 100 100 200 300 600 Superior 940 1300 2000 2900 5300 -
Tabela 2 NMP. com limite de confiana de 95% para os resultados positivos quando 5 pores de 10 mL so examinadas
Combinao de positivos 0 1 2 3 4 5 Fonte: APHA, 1985 NMP./100 mL < 2,2 2,2 5,1 9,2 16,0 >16,0 Limites Inferior 0 0,1 0,5 1,6 3,3 8,0 Superior 6,0 12,6 19,2 29,4 52,9 Infinito
Coliformes termotolerantes
Mtodo dos tubos mltiplos (TM) Material necessrio a) tubos de ensaio com Meio EC; b) bico de Bunsen ou lamparina a lcool; c) ala de platina; d) banho-maria.
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Execuo do ensaio a) tomar todos os tubos do Teste Presuntivo que deram Positivos (Formao de gs) e todos os tubos negativos em que houve crescimento aps 48 horas, nas 3 diluies (1:1; 1:10 e 1:100); b) transferir, com ala de platina flambada e fria, uma poro para os tubos de ensaio contendo o meio EC; c) misturar e deixar todos os tubos em banho de gua durante 30 minutos; d) incubar em banho-maria a 44,5 0,2oC durante 24 2 horas; e) se no final de 24 horas ou menos houver a formao de gs, est indicada a presena de coliformes termotolerantes; f) calcular o NMP consultando a tabela 1.
Nota: Esse ensaio deve ser realizado simultaneamente ao Teste Confirmativo para Coliformes Totais. Observao: Fazer esse exame toda vez que forem realizados testes confirmativos para coliformes totais.
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Contagem de bactrias heterotrficas

Material necessrio a) placa de Petri; b) pipeta graduada; c) bico de Bunsen ou lamparina a lcool; d) plate Count Agar; e) estufa bacteriolgica; f) contador de colnias. Execuo do ensaio a) transferir, com pipeta estril, 1 mL da amostra para uma placa de Petri previamente esterilizada; b) entreabrir a placa e adicionar o meio de cultura, previamente fundido e estabilizado em banho-maria a 44-46oC, contido no tubo de ensaio; c) homogeneizar o contedo da placa em movimentos circulares moderados em forma de (), em torno de 10 vezes consecutivas; d) quando o meio de cultura se solidificar, incubar a placa em posio invertida a 35 0,5oC durante 48 3 horas; e) no final do perodo de incubao, fazer a contagem das colnias com o auxlio de um contador de colnias. Expresso dos resultados Os resultados so expressos como nmero de colnias de bactrias/mL ou Unidades Formadoras de Colnias (UFC)/mL.
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Notas:
a) antes de iniciar os exames, desinfetar a bancada do laboratrio usando uma soluo de lcool etlico a 70% ou outro desinfetante que no deixe resduo; b) todas as amostras a serem examinadas devem ser homogeneizadas pelo menos 25 vezes; c) no esquecer de flambar a boca dos tubos de ensaio contendo meios de cultura, antes de us-los; d) o tiossulfato de sdio a 10% colocado nos frascos de coleta para neutralizar a ao do cloro; e) as placas de Petri devem ser colocadas na posio invertida para evitar a condensao de gua na superfcie do gar; f) fazer a contagem padro de bactrias heterotrficas, sempre em duplicata.
Coliformes totais
Mtodo da membrana filtrante (MF) Material necessrio a) equipamento de filtrao com porta-filtro; b) placa de Petri esterilizada de 47 mm; c) filtros de membrana de 47 mm e porosidade de 0,45m, com carto absorvente; d) meio de cultura (m Endo Broth MF); e) gua de diluio estril; f) pina de ao inox;
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g) copo de ao inox; h) bico de Bunsen ou lamparina a lcool; i) bomba de vcuo (seringa); j) estufa bacteriolgica. Execuo do ensaio a) com a pina, colocar cuidadosamente na placa de Petri um carto absorvente; b) com pipeta esterilizada colocar 1,8 mL do meio de cultura no carto absorvente e tampar a placa; c) colocar a membrana filtrante no porta-filtro, com a pina previamente flambada e fria; d) agitar o frasco contendo a amostra, pelo menos 25 vezes; e) destampar e flambar a boca do frasco; f) verter, cuidadosamente, 100 mL de amostra no porta-filtro, evitando que a gua respingue sobre as bordas superiores; g) ligar a bomba de vcuo (seringa) e fazer a suco; h) depois de filtrada a amostra, lavar 3 vezes as paredes do funil com gua de diluio estril com pores de 20 mL aplicando vcuo; i) aps a lavagem e filtrao, aliviar o vcuo e remover o funil do suporte; j) com a pina flambada e fria, remover o filtro do suporte e coloc-lo na placa de Petri, antes preparada, com o lado quadriculado para cima;
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k) tampar a placa de Petri e incub-la invertida a 35oC durante 24 2 horas; l) aps o perodo de incubao, examinar o filtro fazendo a contagem das colnias. Leitura dos resultados As colnias indicativas de coliformes totais tpicas tm uma cor rosa a vermelho escuro, com brilho metlico. O brilho pode aparecer no centro ou na periferia da colnia. As no coliformes aparecem com colorao vermelho-clara ou escura sem o brilho metlico caracterstico.
Observao: s vezes, quando o disco est muito mido e a fonte de luz muito intensa, as colnias de no coliformes podem aparecer com um brilho falso, causando erros. Isso poder ser contornado usando-se fonte de luz mais difusa ou secando o filtro antes de ser examinado.
Preparo do meio de cultura Material necessrio a) meio de cultura desidratado (m Endo Broth MF); b) gua destilada; c) lcool etlico a 95%; d) frasco Erlenmeyer de 125 mL; e) vidro de relgio; f) bico de Bunsen ou lamparina a lcool.
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Tcnica a) pesar 4,8 gramas do meio desidratado; b) transferir para o Erlenmeyer; c) adicionar aos poucos 100 mL de gua destilada contendo 2 ml de lcool etlico a 95%; d) aquecer em banho-maria ou no bico de Bunsen at o incio da fervura (no deixar ferver); e) deixar esfriar; f) distribuir 1,8 mL em cada placa.
Observaes: 1. Preparar somente a quantidade necessria para uso. Esse meio pode ser adquirido em ampolas de 2 mL, porm o custo muito elevado. mais econmico prepar-lo no laboratrio. 2. Em substituio ao meio m Endo Broth MF pode r ser utilizado o meio slido (LES Endo agar).
Coliformes termotolerantes
Mtodo da membrana filtrante (MF) Material necessrio a) equipamento de filtrao com porta-filtro; b) placa esterilizada de 47 mm; c) filtros de membrana de 47 mm e porosidade de 0,45m, com carto absorvente; d) meio de cultura (m FC Broth Base); e) gua de diluio estril; f) pina de ao inox; g) copo de ao inox;
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h) bico de Bunsen ou lamparina a lcool; i) bomba de vcuo (seringa); j) estufa bacteriolgica ou banho-maria. Preparo do meio de cultura Material necessrio a) meio de cultura desidratado (m FC Broth Base); b) gua destilada; c) cido roslico a 1% em NaOH 0,2 N; d) frasco Erlenmeyer de 125 mL; e) vidro de relgio; f) bico de Bunsen ou lamparina a lcool. Tcnica a) pesar 3,7 gramas do meio desidratado; b) transferir para o Erlenmeyer; c) dissolver o meio pesado, em 100 mL de gua destilada; d) adicionar 1 mL da soluo de cido roslico a 1%; e) aquecer at a ebulio; f) deixar esfriar; g) distribuir 2,0 ml em cada placa.
Observaes: 1. Preparar somente a quantidade necessria para uso; 2. Esse meio pode ser adquirido em ampolas de 2 mL, porm o custo muito elevado. mais econmico prepar-lo no laboratrio.
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3. Para preparar o cido roslico a 1% dissolver 1 grama do cido em 100 mL de NaOH 0,2 N. 4. Para preparar o NaOH 0,2 N diluir 20 mL da soluo 1N para 100 mL de gua destilada. 5. O cido roslico dura 2 semanas ou menos, quando guardado na geladeira (2 a 10oC). Descarte-o quando a colorao mudar de vermelho-escuro para marrom. 6. Esse meio pode ser solidificado adicionando 1,2 a 1,5% de agar antes da ebulio.
Execuo do ensaio a) com a pina, colocar cuidadosamente na placa de Petri um carto absorvente; b) com pipeta esterilizada colocar 2,0 mL do meio de cultura no carto absorvente e tampar a placa; c) colocar a membrana filtrante no porta-filtro, com a pina previamente flambada e fria; d) agitar o frasco contendo a amostra, pelo menos 25 vezes; e) destampar e flambar a boca do frasco; f) verter, cuidadosamente, 100 mL de amostra no porta-filtro, evitando que a gua respingue sobre as bordas superiores; g) ligar a bomba de vcuo (seringa) e fazer a suco; h) depois de filtrada a amostra, lavar 3 vezes as paredes do funil com gua de diluio estril com pores de 20 mL aplicando vcuo; i) aps a lavagem e filtrao, aliviar o vcuo e remover o funil do suporte;
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j) com a pina flambada e fria, remover o filtro do suporte e coloc-lo dentro da placa de Petri, com o lado quadriculado para cima; k) tampar a placa de Petri e incub-la invertida a 44,5 0,2oC durante 24 2 horas; l) encerrado o perodo de incubao, examinar o filtro fazendo a contagem das colnias; m) as colnias indicativas de coliformes termotolerantes aparecem de cor azul. As no coliformes aparecem com colorao clara ou rsea.
Esterilizao do conjunto de filtrao no campo

a) umedecer cuidadosamente o anel de asbesto situado na base do suporte, com meia tampa de lcool metlico (tampa do frasco de lcool); b) atear fogo; c) colocar a cuba de ao por cima do funil quase o tampando; d) aps aquecer a cuba at o suportvel pela mo, tampar o suporte; e) esperar 15 minutos, aproximadamente e ento remover a cuba e lavar o funil com gua de diluio estril a fim de remover qualquer resduo txico.
Observaes: 1. A combusto incompleta do metanol provoca a formao de aldedo frmico que o agente esterilizante. 2. O suporte do filtro deve estar estril no incio de cada srie de filtrao e essa srie no deve ultrapassar mais de 30 amostras. A cada srie de filtrao efetuar o exame de 100 mL da gua de diluio para controle da esterilidade do porta-filtro.
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3. Os meios de cultura preparados para uso com membrana filtrante valem por 96 horas quando guardados em refrigerador com temperatura entre 2 a 10oC; 4. O conjunto de filtrao tambm pode ser esterilizado em autoclave.
Coliformes totais e Escherichia coli Teste de presena/ausncia

Mtodo do substrato cromognico A opo da metodologia para a realizao dos exames bacteriolgicos da gua recai naquele procedimento que melhor se adequar s condies do laboratrio, devendo-se, no entanto, adotar como padro as metodologias, frequncias e interpretao de resultados estabelecidas e recomendadas pela legislao em vigor. Os mtodos de Tubos Mltiplos (TM) e Membrana Filtrante (MF) ainda so largamente utilizados, entretanto a opo pelo mtodo de Substrato Cromognico-Fluorognico Definido comumente adotado pela facilidade de manuseio, bem como por ter relativo custo/benefcio j comprovado. O mtodo baseado nas atividades enzimticas especficas dos coliformes ( galactosidade) e E. coli ( glucoronidase). Os meios de cultura contm nutrientes indicadores (substrato cromognico) que, hidrolisados pelas enzimas especficas dos coliformes e/ou E. coli, provocam uma mudana de cor no meio. Aps o perodo de incubao, se a cor amarela observada, coliformes totais esto presentes. Se a fluorescncia azul observada sob luz ultravioleta (UV) 365 nm, E. coli est presente.
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Alm da maior preciso, esse mtodo tem como vantagem o tempo de resposta, j que a determinao simultnea de coliformes (totais) e E. coli efetuada aps incubao das amostras a 35oC por 24 horas, no havendo necessidade de ensaios confirmativos. Material necessrio a) recipiente de coleta de vidro ou de plstico; b) substrato cromognico (ONPG)/fluorognico (MUG); c) estufa bacteriolgica; d) lmpada ultravioleta de 365 nm. Execuo do ensaio a) coletar a amostra (100mL) em um frasco estril ou saco de coleta contendo tiossulfato de sdio a 10% para gua tratada; b) no prprio frasco ou saco adicionar o contedo de 1 (um) frasconete contendo o substrato cromognico; c) fechar o frasco ou o saco e agitar levemente, no precisa dissolver totalmente, essa dissoluo ocorrer de forma natural; d) incubar a 35,0 0,5oC durante 24 horas.
Interpretao e expresso dos resultados

Decorridas 24 horas de incubao, retirar da estufa o material e observar visualmente o frasco ou saco. Se apresentar colorao amarelada, o resultado presena de Coliformes Totais na amostra.
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Com o auxlio de uma lmpada ultravioleta 365 nm, observar se existe fluorescncia azul nas amostras que desenvolveram colorao amarelada aproximando a lmpada ao frasco. Se a amostra apresentar colorao amarelada e fluorescncia com a luz UV-365 nm significa que h presena de Escherichia coli na amostra examinada. Caso a amostra permanea transparente, o resultado negativo, tanto para Coliformes Totais como para E. coli. Expressar o resultado como: Presena ou Ausncia de Coliformes Totais ou Escherichia coli.
Nota: A fluorescncia azul ocorre somente na presena da luz ultravioleta, ao tirar o frasco da frente da luz ele volta a ficar amarelo.
Esterilizao
Os seguintes materiais devem ser esterilizados: frascos de coleta de amostra, pipetas, placas de Petri de vidro, frascos e tubos com gua de diluio e meios de cultura.
Procedimentos para a esterilizao

a) preparar todo o material; b) verificar se o nvel da gua dentro da autoclave est acima das resistncias. Completar se necessrio; c) colocar todo o material dentro do depsito metlico e tampar a autoclave; d) apertar as travas da tampa duas a duas para no permitir sada de vapor pela borda do aparelho. Ligar o aparelho na tomada; e) ligar a chave seletora de temperatura na posio Mximo;
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f) abrir imediatamente a vlvula de escape de vapor; g) quando comear a sair vapor por essa vlvula, esperar trs minutos e fech-la; h) nesse instante, o ponteiro do manmetro comear a subir; i) quando o ponteiro atingir a marca de 1Kg/cm de presso, a temperatura dever estar em 121oC. Deixar nesta posio durante 20 minutos; j) se a presso continuar subindo, coloque a chave seletora de temperatura da autoclave, na posio mdia e fique observando; k) depois de 20 minutos, o material j estar esterilizado;
Observao: Normalmente as autoclaves possuem uma chave seletora de temperatura que indica trs posies Mnima, Mdia e Mxima, justamente para manter a presso e temperatura dentro da faixa utilizada. Serve, tambm, para ligar e desligar o aparelho. Atualmente existem autoclaves microprocessadas que realizam as etapas, ou seja, o ciclo de esterilizao e descontaminao automaticamente, aps programao do usurio.
l) desligar o aparelho e esperar que o ponteiro do manmetro atinja a posio 0. Esse procedimento poder ser acelerado abrindo-se lentamente a vlvula de escape de vapor; Ateno: No abrir essa vlvula de uma vez! m) quando o ponteiro do manmetro atingir a posio 0 e no estiver mais saindo vapor pela vlvula, abrir a tampa do aparelho e retirar o material.
Nota: Existem vrios modelos de autoclaves no mercado. importante seguir sempre as instrues do fabricante.
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Anlises fsico-qumicas da gua

Titulomtricas Colorimtricas
Anlises Titulomtricas Alcalinidade total

A alcalinidade total de uma gua dada pelo somatrio das diferentes formas de alcalinidade existentes, ou seja, a concentrao de hidrxidos, carbonatos e bicarbonatos, expressa em termos de carbonato de clcio. Pode-se dizer que a alcalinidade mede a capacidade da gua em neutralizar os cidos. A medida da alcalinidade de fundamental importncia durante o processo de tratamento de gua, pois em funo do seu teor que se estabelece a dosagem dos produtos qumicos utilizados. Normalmente, as guas superficiais possuem alcalinidade natural em concentrao suficiente para reagir com o sulfato de alumnio nos processos de tratamento. Quando a alcalinidade muito baixa ou inexistente h a necessidade de se provocar uma alcalinidade artificial com aplicao de substncias alcalinas, tal como cal hidratada ou barrilha (carbonato de sdio) para que o objetivo seja alcanado. Quando a alcalinidade muito elevada, procede-se ao contrrio, acidificando-se a gua at que se obtenha um teor de alcalinidade suficiente para reagir com o sulfato de alumnio ou outro produto utilizado no tratamento da gua.
Mtodo de determinao
Titulao com cido Sulfrico
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Material necessrio a) pipeta volumtrica de 50 mL; b) frasco Erlenmeyer de 250 mL; c) bureta de 50 mL; d) fenolftalena; e) indicador metilorange; f) mistura Indicadora de verde de bromocresol/vermelho de metila; g) soluo de cido sulfrico 0,02 N; h) soluo de tiossulfato de sdio 0,1 N. Tcnica a) tomar 50 mL da amostra e colocar no Erlenmeyer; b) adicionar 3 gotas da soluo indicadora de verde de bromocresol/vermelho de metila; c) titular com a soluo de cido sulfrico 0,02 N at a mudana da cor azul-esverdeada para rseo; d) anotar o volume total de H2SO4 gasto (V) em mL. Clculo:
Alcalinidade total em mg/L de CaCO3 = V x 20 Notas: 1. Usar 0,05 mL (1 gota) da soluo de tiossulfato de sdio 0,1 N, caso a amostra apresente cloro residual livre. 2. Utilizar essa tcnica na ausncia de alcalinidade fenolftaleina. 3. Caso haja alcalinidade fenolftaleina, adicionar, antes da mistura indicadora de verde de bromocresol/vermelho
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de metila 3 gotas de fenolftaleina e titule com H2SO4 0,02N at desaparecer a cor rsea formada. Em seguida, continuar no passo b) da tcnica. 4. A alcalinidade fenolftalena s poder ocorrer se o pH da amostra for maior que 8,2. 5. Na impossibilidade de conseguir a mistura indicadora de verde de bromocresol/vermelho de metila, usar o indicador de metilorange. Nesse caso o ponto de viragem no passo 3 da tcnica ser de amarelo para alaranjado. 6. O ponto de viragem quando se usa o indicador verde de bromocresol/vermelho de metila mais ntido do que quando se usa metilorange. 7. A frmula acima para ser utilizada quando se usa uma amostra de 50 mL. Quando for usado 100 mL de amostra, o volume (V) passar a ser multiplicado por 10. 8. Fc Fator de correo da soluo titulante.
Fluxograma da anlise
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Gs carbnico livre
O gs carbnico livre existente em guas superficiais normalmente est em concentrao menor do que 10 mg/L, enquanto que em guas subterrneas pode existir em maior concentrao. O gs carbnico contido na gua pode contribuir significativamente para a corroso das estruturas metlicas e de materiais base de cimento (tubos de fibro-cimento) de um sistema de abastecimento de gua e por essa razo o seu teor deve ser conhecido e controlado.
Mtodo de determinao
Titulao com Hidrxido de Sdio Material necessrio a) bureta de 50 mL; b) frasco Erlenmeyer de 250 mL; c) pipeta volumtrica de 100 mL; d) rolha de borracha; e) hidrxido de sdio 0,02N; f) fenolftalena. Tcnica a) tomar 100 mL de amostra (sem agitar) em um Erlenmeyer; b) adicionar 10 gotas de fenolftalena, se colorir, no contm CO2, se no colorir, prosseguir;
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c) titular com a soluo de hidrxido de sdio (NaOH) 0,02 N gota a gota at o aparecimento de leve colorao rsea persistente por pelo menos 30 segundos; d) anotar o volume (mL) de NaOH gasto ( V ). Clculo V x 10 x Fc = mg/L de CO2 livre Onde: Fc = fator de correo. Para calcular o CO2 total aplicar a seguinte frmula: mg/l CO2 total = A + 0,44(2B + C) Onde: A = mg/L CO2 livre B = Alcalinidade devido a bicarbonato C = Alcalinidade devido a carbonato
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Fluxograma da anlise de CO2
Cloretos
Geralmente, os cloretos esto presentes em guas brutas e tratadas em concentraes que podem variar de pequenos traos at centenas de mg/L. Esto presentes na forma de cloretos de sdio, clcio e magnsio. A gua do mar possui concentrao elevada de cloretos que est em torno de 26.000 mg/L. Concentraes altas de cloretos podem restringir o uso da gua em razo do sabor que eles conferem e pelo efeito laxativo que eles podem provocar. A Portaria n 2.914/2011 do Ministrio da Sade estabelece o teor de 250 mg/L como o valor mximo permitido para gua potvel. Os mtodos convencionais de tratamento de gua no removem cloretos. A sua remoo pode ser feita por dessalizao (osmose reversa) ou eletrodilise (troca inica).
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Mtodo de determinao
Titulao com Nitrato de Prata Material necessrio a) bureta de 50 mL; b) becker de 250 mL; c) frasco Erlenmeyer de 250 mL; d) medidor de pH; e) proveta de 100 mL; f) soluo-padro de nitrato de prata 0,0141N; g) soluo indicadora de cromato de potssio K2CrO4; h) hidrxido de sdio 1N; i) cido sulfrico 1N; j) cloreto de sdio 0,0141 N. Tcnica a) colocar 100 mL de amostra no Erlenmeyer; b) ajustar o pH entre 7 e 10, se necessrio, com NaOH ou H2SO4; c) adicionar 1 mL da soluo indicadora de K2CrO4; d) titular com a soluo-padro de nitrato de prata 0,0141 N at a viragem para amarelo avermelhado que o ponto final da titulao; e) fazer um branco da mesma maneira que a amostra.
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Clculo:
(A B) x N x 35.45 mL da amostra
mg/L Cl =
Onde: A = mL do titulante gasto na amostra. B = mL do titulante gasto no branco. N = normalidade do titulante.
Fluxograma da anlise de cloretos
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Dureza total
A dureza total calculada como sendo a soma das concentraes de ons clcio e magnsio na gua, expressos como carbonato de clcio. A dureza de uma gua pode ser temporria ou permanente. A dureza temporria, tambm chamada de dureza de carbonatos, causada pela presena de bicarbonatos de clcio e magnsio. Esse tipo de dureza resiste ao dos sabes e provoca incrustaes. denominada de temporria porque os bicarbonatos, pela ao do calor, se decompem em gs carbnico, gua e carbonatos insolveis que se precipitam. A dureza permanente, tambm chamada de dureza de no carbonatos, devida presena de sulfatos, cloretos e nitratos de clcio e magnsio, resiste tambm ao dos sabes, mas no produz incrustaes por serem seus sais muito solveis na gua. No se decompe pela ao do calor. A Portaria MS n 2.914/2011 estabelece para dureza total o teor de 500 mg/L em termos de CaCO3 como o valor mximo permitido para gua potvel.
Mtodo de determinao
Titulao com EDTA Material necessrio a) bureta de 50 mL; b) pipeta volumtrica de 25 mL; c) balo volumtrico de 50 mL; d) becker de 100 mL;
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e) frasco Erlenmeyer de 250 mL; f) soluo-padro de EDTA 0,01 M; g) soluo tampo; h) indicador eriochrome black T; i) inibidor I - cianeto de sdio P.A em p; j) inibidor II - sulfeto de sdio. Tcnica a) tomar 25 mL da amostra e diluir para 50 mL com gua destilada em balo volumtrico; b) transferir para um becker de 100 mL e adicionar 1 a 2 mL da soluo tampo para elevar o pH a 10 0,1; c) transferir para um frasco Erlenmeyer de 250 mL e adicionar aproximadamente 0,05 gramas do Indicador negro de eriocromo T; d) titular com EDTA 0,01M agitando continuamente at o desaparecimento da cor prpura avermelhada e o aparecimento da cor azul (final da titulao); e) anotar o volume de EDTA gasto (mL); f) fazer um branco com gua destilada; g) subtrair o volume de EDTA gasto na titulao do branco do volume de EDTA gasto na titulao da amostra. A diferena o volume que ser aplicado no clculo.
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Clculo
Dureza Total em mg/l CaCO3 = ml de EDTA x 1000 x Fc ml de amostra
Notas: 1. A ausncia de um ponto de viragem definido, geralmente, indica a necessidade de adio de um inibidor ou que o indicador est deteriorado. 2. No leve mais do que 5 minutos para a titulao, medido aps a adio da soluo tampo. 3. Caso a dureza da gua seja muito baixa, use amostra maior, 50 a 250 mL adicionando proporcionalmente maior quantidade de soluo tampo, do inibidor e indicador. 4. Se precisar usar o inibidor adicionar 20 gotas do inibidor II. 5. Fc = Fator de correo do EDTA quando houver e for diferente de 1.
Fluxograma da anlise
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pH
O termo pH representa a concentrao de ons hidrognio em uma soluo. Na gua, esse fator de excepcional importncia, principalmente nos processos de tratamento. Na rotina dos laboratrios das estaes de tratamento ele medido e ajustado sempre que necessrio para melhorar o processo de coagulao/floculao da gua e tambm o controle da desinfeco. O valor do pH varia de 0 a 14. Abaixo de 7 a gua considerada cida e acima de 7, alcalina. gua com pH 7 neutra. A Portaria n 2.914/2011 do Ministrio da Sade recomenda que o pH da gua seja mantido na faixa de 6,0 a 9,5 no sistema de distribuio. Existem no mercado vrios aparelhos para determinao do pH. So denominados de potencimetros ou colormetros. Neste manual, descreve-se o funcionamento bsico de um potencimetro, embora as instrues dos fabricantes devam ser seguidas. Material necessrio a) potencimetro; b) cubetas; c) frasco lavador; d) papel absorvente; e) solues tampo de pH conhecido; Tcnica a) ligar o aparelho e esperar a sua estabilizao; b) lavar os eletrodos com gua destilada e enxug-los com papel absorvente;
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c) calibrar o aparelho com as solues padro (pH 4 7 ou 10); d) lavar novamente os eletrodos com gua destilada e enxug-los; e) introduzir os eletrodos na amostra a ser examinada e fazer a leitura; f) lavar novamente e deix-los imersos em gua destilada; g) desligar o aparelho.
Fluxograma do teste
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Anlises colorimtricas Cloro residual livre

O cloro um produto qumico utilizado na desinfeco da gua. Sua medida importante e serve para controlar a dosagem que est sendo aplicada e tambm para acompanhar sua evoluo durante o tratamento. A Portaria n 2.914/2011 do Ministrio da Sade determina a obrigatoriedade de se manter, no mnimo, 0,2 mg/L de cloro residual livre ou 2 mg/L de cloro residual combinado em toda a extenso do sistema de distribuio (reservatrio e rede). Tambm recomenda que o teor mximo de cloro residual livre em qualquer ponto do sistema de abastecimento seja de 2 mg/L. Os principais produtos utilizados so: hipoclorito de clcio, cal clorada, hipoclorito de sdio e cloro gasoso.
Mtodo de determinao
Comparao visual Material necessrio a) comparador colorimtrico; b) cubetas de vidro ou de acrlico; c) DPD para cloro livre em cpsula.
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Tcnica a) encher a cubeta com gua da amostra at a marca de 5,0 mL; b) coloc-la na abertura do lado esquerdo do aparelho; c) encher outra cubeta at a marca de 5,0 mL com a amostra a ser testada; d) adicionar uma cpsula do reagente DPD na segunda amostra e misturar; e) colocar a cubeta com a amostra no compartimento do lado direito do aparelho; f) antes de 1 minuto fazer a leitura do teor de cloro.
Nota: Quando fizer a leitura posicionar o comparador (equipamento) contra uma fonte de luz como, por exemplo, uma janela, o cu ou uma lmpada. Rotacione o disco at que se obtenha a mesma tonalidade nos dois tubos.
Resultado O resultado expresso em mg/L de Cloro Residual Livre.

Observao: Existem no mercado vrios tipos de comparadores colorimtricos para medir o cloro residual, tanto com o uso de ortotolidina quanto o DPD. Em caso de dvida consultar, sempre, as instrues do fabricante. O uso da ortotolidina est sendo evitado por tratar-se de substncia cancergena e no mais recomendado pelo Standard Methods.
Cor
A cor da gua proveniente da matria orgnica como, por exemplo, substncias hmicas, taninos e tambm por metais como ferro e mangans e resduos industriais fortemente coloridos. A cor, em sistemas pblicos de abastecimento de gua,
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esteticamente indesejvel. A sua medida de fundamental importncia, visto que, gua de cor elevada provoca a sua rejeio por parte do consumidor e o leva a procurar outras fontes de suprimento muitas vezes inseguras. A Portaria MS n 2.914/2011 estabelece para cor aparente o Valor Mximo Permitido de 15 (quinze) uH como padro organolptico para consumo humano.
Mtodo de determinao
Mtodo de Comparao visual Material necessrio a) tubos de Nessler forma alta de 50 mL; b) suporte de madeira; c) soluo-padro de Cloroplatinato de Potssio (500 Unidades de Cor). Tcnica a) preparar padres de cor na faixa de 5 a 50 unidades de cor, medindo 0,5; 1,0; 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5; 4,0; 4,5; 5,0; 6,0 e 7,0 mL da soluo-padro (500 unidades de cor) e colocar em tubos de Nessler de 50 mL; b) diluir com gua destilada at a marca de 50 mL; c) medir 50 mL da amostra em outro tubo de Nessler e comparar com os padres. Resultado O resultado expresso em unidades de cor ou unidade Hazen (uH).
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Notas: 1. A comparao dever ser feita olhando os tubos verticalmente contra um fundo branco. 2. Proteger os padres contra evaporao e poeira. 3. Quando a cor da amostra for maior do que 70 unidades, fazer diluio at que se obtenha resultado dentro da faixa coberta pelos padres. Neste caso, o resultado deve ser multiplicado pelo fator de diluio. 4. uH a unidade de escala de Hazen (platina-cobalto,mgPt-Co/L).
Alumnio
O teste de alumnio indicado para estaes de tratamento onde o sulfato de alumnio usado como coagulante. A dosagem incorreta desse coagulante denotada pela quantidade significativa de alumnio que persiste na gua tratada. O hidrxido de alumnio Al(OH)3 - formado na reao anftero. Sua ionizao se processa em pH cido ou bsico, segundo as equaes: Em pH cido: Al(OH)3 [ H+] Al3 + nH2O
+
Em pH bsico: Al(OH)3 [OH-] AlO33 + nH2O

-
Nas duas formas ele pode se solubilizar e atravessar os decantadores e filtros. A solubilizao acontece com a correo do pH. Quando o pH timo de floculao no est correto, o teor de alumnio da gua tratada aumenta.
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A Portaria n 2.914/2011 do Ministrio da Sade estabelece que o padro organolptico para consumo humano de 0,2 mg/L.
Mtodo de determinao
A determinao do alumnio pode ser feita atravs dos mtodos de Absoro Atmica, Eriocromo Cianina R utilizando um fotmetro de filtro ou espectrofotmetro e tambm pelo mtodo de Comparao Visual, utilizando-se tubos de Nessler. Neste manual, descreve-se o mtodo de Comparao Visual, considerando que a maioria dos laboratrios dos servios de abastecimento de gua nem sempre possui equipamentos como Espectrofotmetro de Absoro Atmica ou outro.
Mtodo de Comparao Visual

Material necessrio a) tubo de Nessler forma alta, de 50 mL; b) pipeta graduada de 1 mL; c) pipeta graduada de 5 mL; d) pipeta graduada de 10 mL; e) suporte para tubos de Nessler. Reagentes a) cido sulfrico 0,02N; b) reagente tampo de acetato de sdio; c) eriocromo cianina-R - (corante); d) soluo de trabalho do corante.
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Tcnica a) medir 25 mL de amostra ou uma poro diluda para 25 mL em um frasco Erlenmeyer de 125 mL; b) adicionar 3 gotas de metilorange e titular com cido sulfrico (H2SO4) 0,02N at ligeira colorao rosa plido; c) anotar o volume gasto de cido e descartar a amostra; d) medir novamente 25 mL de amostra ou uma alquota diluda a 25 mL e transferir para um tubo de Nessler de 50 mL; e) adicionar amostra o mesmo volume de cido sulfrico gasto no passo 2, acrescentando 1 mL em excesso; f) adicionar 1,0 mL de cido ascrbico e misturar; g) adicionar 10,0 mL do reagente tampo e misturar; h) adicionar 5,0 mL da soluo de trabalho do corante e misturar; i) imediatamente, diluir at a marca de 50 mL, com gua destilada; j) misturar e deixar em repouso por 5 a 10 minutos e comparar a cor desenvolvida pela amostra com os padres preparados da mesma maneira e na mesma hora. Resultado O resultado expresso em mg/L de alumnio.
Observao: Nesse mtodo no necessrio preparar o branco da amostra e ele tambm no recomendado para amostras que contm cor e turbidez porque pode levar a erros considerveis.
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Preparo dos Padres

Material necessrio a) tubo de Nessler forma alta, de 50 mL; b) pipeta graduada de 1 mL; c) pipeta graduada de 5 mL; d) pipeta graduada de 10 mL; e) suporte para tubos de Nessler. Reagentes a) cido sulfrico 0,02N; b) reagente tampo de acetato de sdio; c) eriocromo cianina-R - (corante); d) soluo de trabalho do corante; e) soluo-padro de alumnio (1 mL = 5 g Al). Tcnica Preparar os padres na faixa de 0 a 0,5 mg/L, pipetando: 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 e 2,5 mL da soluo-padro (1 mL = 5 g) e diluindo para 25 mL com gua destilada em tubos de Nessler (ver quadro a seguir). Tratar esses padres do seguinte modo: a) b) c) d) adicionar 1,0 mL de cido sulfrico 0,02N e misturar; adicionar 1,0 ml de cido ascrbico e misturar; adicionar 10 mL do reagente tampo e misturar; adicionar 5 mL da soluo de trabalho do corante e misturar;
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e) levar o volume para 50 mL com gua destilada e misturar; f) deixar em repouso por 5 a 10 minutos.
mL da soluo-padro 0,0 0,5 1,0 1,5 2,0 2,5 g Al/mL 0,0 2,5 5,0 7,5 10,0 12,5 Volume de amostra 25 25 25 25 25 25 mg/L Al 0,0 0,1 0,2 0,3 0,4 0,5
Notas: 1. Para o padro 0,0 mg/L, tomar 25 mL de gua destilada e proceder igual aos outros. 2. Preparar os padres toda vez que for examinar a amostra. 3.Caso o laboratrio possua espectrofotmetro, fazer a leitura dos padres a 535 nm e traar a curva de calibrao em papel semilogaritmo (% de transmitncia x concentrao). Nesse caso, no necessria a preparao de todos os padres quando examinar a amostra. Fazer apenas um ou dois para checar a curva de calibrao do aparelho.
Turbidez
A turbidez da gua devido presena de materiais slidos em suspenso, que reduzem a sua transparncia. Pode ser provocada tambm pela presena de algas, plncton, matria orgnica e muitas outras substncias como o zinco, ferro, mangans e areia, resultantes do processo natural de eroso ou de despejos domsticos e industriais. A turbidez tem sua importncia no processo de tratamento da gua. gua com turbidez elevada, e dependendo de sua natureza, forma flocos pesados que decantam mais rapidamente do que gua com baixa turbidez. Tambm tem suas
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desvantagens como no caso da desinfeco que pode ser dificultada pela proteo que pode dar aos micro-organismos no contato direto com os desinfetantes. um indicador sanitrio e padro organolptico da gua de consumo humano. No Brasil, a recentemente revisada norma de potabilidade da gua, Portaria MS n 2.914/2011, incorpora as preocupaes internacionais relacionadas transmisso de protozorios via abastecimento de gua. O padro de turbidez da gua resultante de filtrao rpida (tratamento completo ou filtrao direta) foi reduzido para 0,5 UT e para gua resultante de filtrao lenta reduzido para 1,0 UT. Entretanto, o atendimento ao valor mximo permitido de 0,5 e 1,0 UT dever ser cumprido em metas progressivas ao longo de quatro anos: em 25% das amostras analisadas mensalmente no primeiro ano, at em 95% no quarto ano (sempre com VMP de 1 UT no restante das amostras mensais). A Portaria n 2.914/2011 do Ministrio da Sade estabelece ainda o Valor Mximo Permitido de 1,0 UT para gua subterrnea ps-filtrao ou pr-desinfeco. E em qualquer ponto da rede de distribuio 5,0 UT como padro organolptico de potabilidade. Existem equipamentos especficos para determinao da turbidez na gua. Neste manual, apresenta-se a tcnica de determinao da turbidez utilizando a metodologia nefelomtrica.
Mtodo Nefelomtrico
Material necessrio a) turbidmetro com nefelmetro; b) clulas de amostras de vidro incolor (quartzo),
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c) balo volumtrico de 100 mL; d) pipeta volumtrica de 5 mL; e) conjunto de filtrao; f) filtros de membrana de 0,2 m. Reagentes gua isenta de turbidez: a) passar gua destilada atravs de um filtro de membrana de 0,02 m de porosidade. Enxaguar o frasco de coleta pelo menos duas vezes com gua filtrada e desprezar os primeiros 200 mL. Suspenso estoque de turbidez padro primrio: Soluo I - Dissolver 1,0 g de sulfato de hidrazina (NH2). H2SO4 em gua destilada e diluir a 100 mL em balo volumtrico.
Advertncia: sulfato de hidrazina carcinognico. Evitar inalao, ingesto e contato com a pele.
Soluo II - dissolver 10,0g de hexametilenotetramina (CH2)6N4 em gua destilada e diluir a 100 mL em balo volumtrico; - misturar 5,0 mL da soluo I e 5,0 mL da soluo II. Deixar em repouso por 24 horas a 25 3oC. A turbidez dessa suspenso de 4000 UT.
- transferir a soluo-estoque para um frasco de cor mbar ou outro frasco protegido da luz ultravioleta, para armazenagem. Fazer diluio dessa suspenso-estoque. A suspenso-estoque estvel por um ano quando corretamente armazenada.
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Suspenso-padro de turbidez: a) diluir 1,0 mL da soluo-estoque para 100 mL com gua isenta de turbidez. A turbidez desta suspenso de 40 UT. Preparar diariamente. Padres de turbidez diludos: a) diluir pores da suspenso-padro de turbidez com gua livre de turbidez de acordo com a faixa de interesse. Preparar diariamente. Procedimento: a) calibrar o turbidmetro de acordo com as instrues do fabricante; b) medida de turbidez menor que 40 UT: agitar a amostra suavemente e esperar at que as bolhas de ar desapaream e coloc-la na clula de amostra do turbidmetro; fazer a leitura da turbidez diretamente na escala do instrumento ou na curva de calibrao apropriada. c) medida de turbidez acima de 40 UT: diluir a amostra com um ou mais volumes de gua isenta de turbidez at que a turbidez da amostra diluda fique entre 30 e 40 UT. Fazer a leitura e multiplicar o resultado pelo fator de diluio. Clculo: uT = A x (B + C) C
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Onde: UT = UTN = Unidade de Turbidez Nefelomtrica. A = Turbidez da amostra diluda. B = Volume da diluio (mL). C = Volume da amostra tomado para a diluio.
Exemplo: Uma poro de 10 mL da amostra foi diluda para 50 mL com gua isenta de turbidez. Feita a leitura dessa amostra diluda obteve-se 20.
UT =
20 x (40 + 10) 10
UT = 100
Temperatura
A temperatura est relacionada com o aumento do consumo de gua, com a fluoretao, com a solubilidade e ionizao das substncias coagulantes, com a mudana do pH, com a desinfeco, etc.
Procedimento para determinao na gua

Material necessrio a) termmetro; b) becker de 250 mL. Tcnica a) coletar um pouco de gua em um becker de 250 mL; b) mergulhar o termmetro na gua; c) esperar at que o material dilatante (mercrio) se estabilize;
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d) fazer a leitura com o bulbo do termmetro ainda dentro da gua.
Fluoretos
A aplicao de flor na gua para consumo humano tem a finalidade de prevenir a crie dental. Hoje, esse procedimento considerado um processo normal de tratamento de gua e o teor timo de flor parte essencial de sua qualidade. Em razo disso e outros fatores, que o seu controle se faz necessrio na estao de tratamento de gua (ETA). Existem vrios mtodos para determinao de flor na gua. Os trs mais conhecidos so: o mtodo Spadns, o Scott-Sanchis e o mtodo do eletrodo especfico para ons fluoretos. Neste manual, descreve-se apenas o mtodo Scott-Sanchis, que embora no seja o que d maior grau de exatido, atende s expectativas e o de custo mais barato. um mtodo de comparao visual de cor feito em tubos de Nessler.
Procedimentos para anlise de fluoretos

Mtodo Scott-Sanchis Material necessrio a) tubo de Nessler de 100 mL; b) suporte para tubo de Nessler; c) termmetro; d) pipeta volumtrica de 5 mL; e) pipeta graduada de 10 mL. Reagentes a) soluo-padro de fluoretos (1mL = 10 gF );
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Fundao Nacional de Sade -
b) reagente Scott-Sanchis; c) arsenito de sdio (0,5%). Preparo dos padres e da amostra: a) tomar 7 tubos de Nessler de 100 mL; b) encher o 1 tubo com gua destilada (branco); c) pipetar no 2 tubo 2 mL da soluo-padro; d) pipetar no 3 tubo 4 mL da soluo-padro; e) pipetar no 4 tubo 6 mL da soluo-padro; f) pipetar no 5 tubo 8 mL da soluo-padro; g) pipetar no 6 tubo 10 mL da soluo-padro; h) encher o 7 tubo com 100 mL de amostra ou uma alquota diluda a 100 mL. Caso haja cloro na amostra, remov-lo pela adio de 0,1mL (2 gotas) da soluo de arsenito de sdio para cada mg/L de cloro; i) diluir os padres de 2 a 6 a 100 mL com gua destilada; j) ajustar a temperatura dos padres e da amostra; k) adicionar a cada tubo, inclusive no branco (1o tubo) 5 mL do reagente Scott-Sanchis; l) misturar e deixar em repouso por uma hora; m) decorrido uma hora da adio do reagente Scott-Sanchis, comparar a amostra com os padres e expressar o resultado em mg F /L.
Exemplo: Se a colorao desenvolvida pela amostra for semelhante ao padro do tubo n 5 essa amostra ter 0,8 mg/L de on fluoreto. Caso a amostra desenvolva uma colorao que se situe entre dois padres poder ser feita a interpolao dos resultados. Ex.: leitura entre 0,6 e 0,8 expressar como 0,7 mg/L.
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Fluxograma do teste
Notas: 1. A concentrao dos padres preparados (tubos de 2 a 6) correspondem a 0,2 0,4 0,6 0,8 1,0 mg/L de on fluoreto, respectivamente. 2. Podero ser analisadas vrias amostras simultaneamente com os padres. 3. Caso haja interferentes nas amostras em concentraes que possam alterar os resultados, essas amostras devero ser destiladas.
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Tabela de interferentes
Substncias interferentes Alcalinidade (CaCO3) Alumnio (AL3+) Cloreto (Cl-) Ferro (Fe3+) Hexametafosfato (NaPO3)6 Fosfato (PO4-3) Sulfato (SO4-2)
Fonte: Adaptado de Mayer, 1971
Mtodo Scott-anchis 400 mg/L 0,25 mg/L 2000 mg/L 2,0 mg/L 1,0 mg/L 5,0 mg/L 300 mg/L
Tipo de erro -+ + + +
Equipamentos para destilao:
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Fazer primeiro uma destilao preliminar para remover qualquer contaminao de fluoreto e ajustar a reao cido/ gua para as destilaes subsequentes, do seguinte modo: a) colocar 400 mL de gua destilada no balo de destilao; b) adicionar lentamente e com agitao 200 mL de cido sulfrico concentrado (H2SO4); c) adicionar algumas prolas de vidro; d) conectar o balo ao condensador e comear a destilao; e) quando a temperatura atingir 180oC, parar a destilao e eliminar o destilado. O conjunto est pronto para a destilao da amostra. Destilao da amostra Adicionar mistura de cido que sobrou da destilao preliminar 300 ml de amostra, misturar cuidadosamente e destilar como anteriormente, at que a temperatura atinja 180oC. Nesse momento o destilado ser igual a 300 ml.
Notas: 1. No deixar que a temperatura ultrapasse 180oC, assim se evita que haja arraste de sulfato para o destilado. 2. Quando amostras de alto contedo de cloretos so analisadas, adicionar ao balo de destilao 5 mg de sulfato de prata para cada mg de cloreto presente na amostra. 3. Usar a soluo de cido sulfrico vrias vezes at que os contaminantes das amostras de gua acumulados no frasco de destilao comecem a interferir no destilado. Quando isso acontecer, o melhor desprezar o cido e comear tudo novamente. Importante: A dosagem de flor na gua para consumo humano estabelecida em funo da mdia das temperaturas mximas dirias da localidade observadas durante um determinado perodo.
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Coleta e preservao de amostras para anlise fsicoqumicas

Parmetros Alcalinidade CO2 Dureza Cloretos Alumnio Fluoretos Temperatura Turbidez Cloro Residual pH Cor Recipientes Vidro ou polietileno Polietileno Vidro ou Polietileno Vidro ou polietileno Volume mnimo (mL) 200 100 100 100 300 200 500 200 500 Preservao Refrigerar Anlise imediata HNO3 pH < 2 No requer HNO3 pH < 2 No requer Anlise imediata Proteger da luz Anlise imediata Anlise imediata Refrigerar Tempo mximo 24h/14d 6 meses 7 dias 6 meses 28 dias 24h 30min/2h 24h
Fonte: Adaptado de APHA, 1985
Notas: 1. Os volumes aqui descritos so estimados. Na prtica, deve-se coletar o volume necessrio para realizao das anlises, at porque existem repeties de anlises muitas vezes necessrias. 2. Quando preservar com cido ntrico, usar 2 mL do cido para cada litro de amostra. 3. Normalmente, nas Estaes de Tratamento de gua ETAs, as anlises devem ser efetuadas imediatamente aps a coleta. No de boa prtica deixar as amostras por muito tempo para serem analisadas.
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Ensaio de coagulao (Jar-test)

O ensaio de coagulao um procedimento de rotina em estaes de tratamento de gua para determinar a dosagem dos produtos qumicos utilizados no tratamento. Podemos dizer que uma simulao do que ocorre na ETA. Para realizar esse ensaio necessrio que se conhea previamente as seguintes caractersticas da gua bruta: cor, turbidez, alcalinidade, pH e temperatura; alm de parmetros hidrulicos da estao de tratamento, tais como: vazo, tempo de deteno no floculador, velocidade de sedimentao no decantador, etc. O ensaio de coagulao no uma operao muito simples, pois devem ser consideradas algumas variveis do processo, como a cor e turbidez da gua bruta; se a alcalinidade natural da gua suficiente, se o pH est dentro da faixa tima de floculao, o tipo de coagulante empregado, etc. Nesse exemplo prtico, consideram-se apenas os parmetros: cor, turbidez, pH e alcalinidade total, j que o objetivo principal do teste a remoo da cor e turbidez da gua, aplicando-se uma menor quantidade de coagulante. O produto qumico utilizado o sulfato de alumnio, sendo o mais comum.
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Etapas do teste de coagulao que devem ser observadas

a) fazer anlise da amostra bruta cor, pH, turbidez e alcalinidade total, temperatura; b) descobrir o pH timo de floculao; c) verificar a menor dosagem do coagulante no pH timo; d) observar a velocidade de sedimentao dos flocos; e) analisar o sobrenadante, verificando, principalmente, a remoo de cor e turbidez. Material necessrio a) aparelho de Jar-test conforme o da figura; b) becker forma baixa de 1000 mL; c) soluo de sulfato de alumnio a 1%; d) soluo de cal a 0,5%; e) pipetas graduadas de 5 e 10 mL.
Fonte: Adaptado de Cetesb, 1973
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Procedimento 1 (Considerando que a gua bruta tenha

alcalinidade natural suficiente e tenha, tambm, um pH timo de floculao).
a) colocar 6 beckers de 1 litro na plataforma do aparelho de Jar-Test; b) ench-los com gua bruta at a marca de 1000 mL; c) ligar o aparelho na velocidade mxima 100 r.p.m; d) adicionar simultaneamente nos beckers a quantidade de coagulante (sulfato de alumnio) que foi calculada para cada becker; e) deixar agitar nessa velocidade por 2 a 3 minutos (tempo de deteno na cmara de mistura rpida); f) reduzir a velocidade de agitao para 50 r.p.m durante 10 a 30 minutos (tempo de deteno nos floculadores); g) deixar as amostras decantar por algum tempo (esse tempo seria o correspondente velocidade de sedimentao no decantador 10 a 30 minutos); h) coletar o sobrenadante de todos os beckers e analisar os parmetros necessrios para verificar qual deles apresentou melhor resultado; i) normalmente o melhor resultado aquele que apresentou maior reduo de cor e turbidez e essa dosagem dever ser a escolhida.
Procedimento 2 (Quando a gua no tem alcalinidade natural suficiente e desconhece-se o pH timo de floculao.) a) colocar 6 beckers de 1 litro na plataforma do aparelho de Jar-Test; b) ench-los com gua bruta at a marca de 1000 mL;
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c) ligar o aparelho na velocidade mxima 100 r.p.m; d) estabelecer diferentes pH nos beckers usando lcali (cal hidratada); e) aplicar uma quantidade fixa de sulfato de alumnio em todos os beckers e proceder de acordo com os passos e) a i) do procedimento 1; f) medir o pH do frasco que apresentou melhor resultado; g) executar novo ensaio, fixando em todos os beckers o pH timo encontrado no item anterior; h) adicionar sulfato de alumnio em cada becker, variando a concentrao em valores prximos (menor e maior) da dosagem utilizada na letra e); i) proceder de acordo com os passos de e) a i) do procedimento 1.
Notas: 1. Dependendo das alteraes que a gua bruta possa sofrer, consequncia de enchentes, estiagens, alteraes climticas, etc., recomendado sempre fazer novos testes para ajustar as dosagens dos coagulantes. 2. Quando a gua bruta no tiver alcalinidade natural suficiente para reagir com o sulfato de alumnio, usar cal hidratada ou outro lcali para promover uma alcalinidade artificial. 3. Quando a gua bruta no tiver um pH timo de floculao, criar essa condio, utilizando cidos ou bases (lcalis). 4. O lcali mais usado a cal hidratada. 5. Normalmente se usa sulfato de alumnio a 1% e cal a 0,5% para fazer os ensaios, pois facilita a medio de volumes utilizados no processo. 6. Para dosagens de sulfato de alumnio de 10 15 20 25 30 e 35 mg/L de uma soluo a 1% so necessrios os seguintes volumes: 1,0 mL, 1,5 mL, 2,0 mL, 2,5 mL, 3,0 mL e 3,5 mL, respectivamente. Para dosagem de cal, usa-se metade desses volumes em mL.
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7. As velocidades de agitao, os tempos de agitao e o tempo de decantao dependem das dimenes das unidades de tratamento e da vazo de operao. 8. Consultar a tabela abaixo para estabelecer a quantidade de cal necessria em funo do consumo de sulfato de alumnio.
Consumo de Sulfato de Alumnio mg/L Al2(SO4)3
Alcalinidade teoricamente necessria mg/L (CaCO3)
Alcalinidade natural desejada (CaCO3)
Quantidade terica de cal mg/L *
Quantidade de cal desejvel mg/L *
10 15 20 25 30 40 50
5 7 9 12 14 18 25
7 10 14 17 20 27 34
3 4 5 7 8 10 13
4 6 8 10 12 15 19
Fonte: Tcnicas de Abastecimento e Tratamento de gua - vol. II/Cetesb SP * se no houver alcalinidade natural.
Teoricamente, cada mg/L de sulfato de alumnio requer: 0,45 mg/L de alcalinidade natural; 0,25 mg/L de cal (CaO); 0,33 mg/L de cal como Ca(OH)2; 0,48 mg/L de carbonato de sdio Na2CO3 (barrilha).
Correo do pH da gua tratada

A correo do pH da gua tratada um procedimento utilizado nas ETAs com a finalidade de prevenir o processo de corroso das estruturas metlicas do sistema de distribuio que provocado pela acidez da gua, consequncia da presena de gs carbnico dissolvido.
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As guas superficiais possuem gs carbnico dissolvido. Esse gs carbnico pode ser proveniente da atmosfera, da respirao dos seres aquticos e at da reao do sulfato de alumnio quando esse reage com a alcalinidade natural da gua. A correo do pH significa elevar o pH da gua tratada at o pH de saturao que o ponto onde no acontece mais o processo de corroso. Esse pH no igual para todas as guas e sua determinao pode ser feita no laboratrio.
Mtodo de determinao
Ensaio do mrmore Material necessrio a) balo volumtrico de 1000 mL; b) medidor de pH; c) balana. Reagente Carbonato de clcio Tcnica a) colocar 750 mL de gua filtrada em um balo volumtrico de 1000 mL; b) determinar o pH e a alcalinidade (I) dessa gua; c) adicionar 10 gramas de carbonato de clcio ao balo; d) agitar por 1/2 hora e deixar decantar e filtrar; e) determinar o pH;
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f) agitar novamente o balo por mais 1/2 hora; g) deixar decantar e filtrar; h) determinar novamente o pH. Repetir os procedimentos "e","f" e "g" at pH constante. O pH de saturao ser o pH constante encontrado. Determinar na ltima operao a alcalinidade (II).
Concluso Se a alcalinidade II > alcalinidade I => gua corrosiva. Se a alcalinidade II = alcalinidade I => gua no corrosiva. Se a alcalinidade II < alcalinidade I => gua incrustante.
Determinao do teor de cloro ativo em uma soluo de cloro (hipoclorito de sdio e hipoclorito de clcio)
Material necessrio a) frasco Erlenmeyer de 250 ou 500 mL; b) bureta de 50 mL; c) pipeta volumtrica de 1; 5 e 10 mL; d) balana de preciso.
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Reagentes a) tiossulfato de sdio 0,1N (Na2S2O3. 5H2O); b) iodeto de potssio (KI); c) cido actico P.A; d) indicador de amido. Tcnica a) medir 1,0 mL da soluo; b) dissolver em 50 mL de gua destilada; c) adicionar 5,0 mL de cido actico concentrado (glacial); d) adicionar 1,0 g de iodeto de potssio; e) titular com a soluo de tiossulfato de sdio 0,1 N; f) anotar os mL de tiossulfato gastos. Clculo % de cloro =
onde: A = mL de tiossulfato gasto na titulao da amostra B = mL de tiossulfato gasto no branco N = Normalidade do tiossulfato P = Peso ou volume do produto Observao: Dependendo da concentrao da soluo a ser analisada usar um peso ou volume que no gaste mais do que a capacidade da bureta utilizada, de tiossulfato de sdio 0,1 N.Fazer um branco com gua destilada.
(A-B) x N x 35,45 P x 10
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Preparao dos reagentes utilizados nas anlises constantes nesse manual
Reagentes para alcalinidade

Soluo de cido sulfrico 0,02 N
Para preparar essa soluo, faz-se primeiro uma soluo 0,1N do seguinte modo: a) transferir, com pipeta, lentamente, 2,8 mL de cido sulfrico concentrado (96% d=1,84) para um balo volumtrico de 1000 mL contendo cerca de 500 mL de gua destilada; b) completar o volume, at a marca, com gua destilada e agitar; b) desta soluo, medir, com pipeta volumtrica, 200 mL e transferir para um balo volumtrico de 1000 mL e completar o volume com gua destilada. Essa soluo aproximadamente 0,02 N.
Soluo de carbonato de sdio 0,02 N

Para preparar a soluo de carbonato de sdio 0,02 N secar 1,5 a 2,0 gramas de Na2CO3 grau padro primrio, a 250 C por quatro horas. Esfriar em dessecador. Em seguida, pesar 1,060 gramas e dissolver em 250 mL de gua destilada e completar o volume para 1000 mL com gua destilada em balo volumtrico.
0
Padronizao da soluo
Colocar 50 mL de uma soluo de carbonato de sdio 0,02 N em um frasco Erlenmeyer de 250 mL e adicionar 4 gotas do indicador metilorange. Titular com H2SO4 0,02N at a viragem do indicador para leve colorao avermelhada. Anotar o volume do cido gasto.
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Para calcular a normalidade correta, use a seguinte frmula: N= N X V V
onde: N = normalidade do H2SO4 desejada V = volume do cido gasto na titulao N = normalidade do carbonato de sdio V = volume do carbonato de sdio usado 1 ml de H2SO4 0,02 N = 1,0 mg de CaCO3
Soluo de tiossulfato de sdio 0,1 N

Pesar exatamente 25,0 gramas de Na2S2O3.5H2O e dissolver em um pouco de gua destilada e completar o volume para 1000 mL em balo volumtrico.
Indicador metilorange
Pesar 0,100 gramas de metilorange e dissolver em 200 mL de gua destilada.
Fenolftalena
a) dissolver 1 grama de fenolftalena em um pouco de gua destilada e diluir a 200 mL. b) adicionar gotas de NaOH 0,02 N at o aparecimento de leve colorao cor-de-rosa.
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Mistura indicadora de verde de bromocresol/ vermelho de metila

Pesar 20 mg de vermelho de metila e 100 mg de verde de bromocresol e dissolver em 100 mL de gua destilada ou lcool etlico a 95%.
Reagentes para CO2

Hidrxido de sdio 0,02 N Para preparar essa soluo, faz-se primeiro uma soluo 0,1N do seguinte modo: a) pesar rapidamente 4,2 gramas de hidrxido de sdio em lentilhas e transferir para um becker de 500 mL e dissolver em gua destilada isenta de gs carbnico; b) transferir essa soluo para um balo volumtrico de 1 litro e completar o volume at a marca. Essa soluo aproximadamente 0,1 Normal. Padronizar com uma soluo de cido Sulfrico 0,1 normal do seguinte modo: a) tomar 100 mL de gua destilada em um frasco Erlenmeyer de 250 mL; b) medir, com pipeta volumtrica ou bureta 10 mL da Soluo de NaOH 0,1 Normal e transferir para o Erlenmeyer acima; c) juntar 3 a 4 gotas do Indicador de metilorange; d) titular com a soluo de cido sulfrico 0,1 Normal; e) anotar os mL de H2SO4 gastos que devem ser 10 ou prximo de 10.
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Se o volume de H2SO4 0,1 N gasto na titulao for maior ou menor que 10 mL, calcular o Fator de correo (Fc) da soluo de NaOH utilizando a seguinte frmula: Fc (NaOH) = ml H2SO4 x Fc (H2SO4) mL de NaOH
Anotar o Fc no rtulo do frasco. Preparao da soluo de hidrxido de sdio N/50: a) transferir 200 mL da soluo-estoque de NaOH 0,1 N para um balo volumtrico de 1 litro e completar com gua destilada. Essa nova soluo aproximadamente N/50 (0,02 N). Padronizao da soluo de NaOH 0,02 N: a) tomar 100 mL de gua destilada em um frasco Erlenmeyer de 250 mL; b) medir, com pipeta volumtrica ou bureta 10 mL da soluo de NaOH 0,02 N, e transferir para o Erlenmeyer acima; c) juntar 3 a 4 gotas do Indicador de metilorange; d) titular com a soluo de cido sulfrico 0,02 N at a viragem do indicador; e) anotar o volume de H2SO4 gastos que devem ser em torno de 10 mL. Clculo do fator de correo do NaOH
Fc (NaOH) 0,02N = mL de H2SO4 de 0,02 N x Fc (H2SO4) mL de NaOH
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Notas: 1. A viragem do indicador no muito fcil de visualizar. Fazer um branco com 100 mL de gua destilada para a comparao de cor no momento da viragem do indicador. 2. Ao adicionar o indicador, a soluo fica amarelada e no final da titulao a soluo fica levemente avermelhada. 3. gua isenta de CO2 pode ser obtida pela fervura da gua destilada durante 15 minutos e resfriada rapidamente at a temperatura ambiente.
Fenolftalena
a) dissolver 1 grama de fenolftalena em um pouco de gua destilada e diluir a 200 mL; b) adicionar gotas de NaOH 0,02N at o aparecimento de leve colorao cor-de-rosa.
Reagentes para anlise de cloretos

Soluo-Padro de Nitrato de Prata 0,0141 N a) pesar 2,395 gramas de AgNO3 e dissolver em um pouco de gua destilada. Completar para 1 litro em balo volumtrico; b) padronizar contra uma soluo de cloreto de sdio 0,0141N; 1,00 mL = 500 g Cl-; c) guardar a soluo em frasco escuro. Cloreto de sdio 0,0141 N
a) dissolver 824,1 mg de cloreto de sdio seco a 140oC
em gua livre de cloretos e diluir para 1000 mL. 1,00 mL = 500 g Cl-.
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Padronizao da soluo de nitrato de prata 0,0141 N a) usar 100 mL de amostra (NaCl 0,0141 N) ou uma poro diluda a 100 mL; b) ajustar o pH entre 7 e 10 com NaOH ou H2SO4 1 N; c) adicionar 1 mL de K2CrO4 (cromato de potssio); d) titular com a soluo de nitrato de prata 0,0141 N at o aparecimento da cor amarelo avermelhado; e) anotar o volume de nitrato de prata gasto na titulao; f) calcular o fator de correo do AgNO3 0,0141 N usando a seguinte frmula: Fc = 100 Vp
onde: Fc = Fator de correo Vp = Volume de AgNO3 gasto na titulao Soluo indicadora de cromato de potssio (K2CrO4) a) pesar 50 gramas de K2CrO4 e dissolver em um pouco de gua destilada; b) adicionar soluo de AgNO3 0,0141 N at formar um precipitado vermelho; c) deixar em repouso por 12 horas; d) filtrar e completar o volume para 1000 mL com gua destilada.
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Hidrxido de sdio (NaOH) 1N a) pesar 40 gramas de hidrxido de sdio e dissolver em um pouco de gua destilada e diluir a 1 litro; b) guardar em frasco de polietileno ou vidro-pirex. cido sulfrico (H2SO4) 1N a) em um becker de 1000 mL colocar cerca de 500 ml de gua destilada; b) em seguida medir 28 mL de cido sulfrico concentrado e adicionar lentamente no becker acima, com agitao constante; c) deixar esfriar; d) transferir para um balo volumtrico de 1000 mL e completar o volume com gua destilada, homogeneizando a seguir; e) armazenar em frasco de polietileno ou vidro pirex.
Notas: 1. Agitar com basto de vidro. 2. Nunca adicionar gua no cido, e sim cido na gua.
Reagentes para anlise de dureza

Soluo-padro de EDTA 0,01 M a) pesar 3,723 gramas de EDTA (sal di-sdio do cido etilenodiamino tetraactico), dissolver em gua destilada e diluir a 1000 mL; b) padronizar contra uma soluo-padro de carbonato de clcio; c) guardar essa soluo em frasco de polietileno.
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Soluo-padro de clcio a) pesar 1,0 grama de carbonato de clcio anidro (CaCO3) padro primrio e colocar em um frasco Erlenmeyer de 250 mL; b) adicionar aos poucos, com auxlio de um funil, HCl 1:1 at dissolver todo CaCO3; c) adicionar 200 mL de gua destilada e ferver por alguns minutos para eliminar o CO2; d) esfriar e adicionar algumas gotas de vermelho de metila e ajustar para a cor laranja intermediria por adio de NH4OH 3N ou HCl 1:1; e) transferir toda a mistura para um balo volumtrico de 1000 mL e completar o volume com gua destilada (1 mL desta soluo = 1,0 mg de CaCO3). Padronizao da soluo de EDTA 0,01 M a) medir 25 mL da soluo-padro de clcio e diluir para 50 mL com gua destilada em frasco Erlenmeyer de 125 mL; b) adicionar 1 a 2 mL da soluo tampo para obter o pH em torno de 10 0,1; c) adicionar 0,05 gramas do indicador eriochrome black T; d) titular com EDTA 0,01 M gota a gota at desaparecer a ltima colorao violcea e aparecer a cor azul indicadora do ponto final da titulao. Clculo: Fc =
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25 Vp
onde: Fc = Fator de Correo Vp = Volume de EDTA gasto na titulao Soluo tampo para dureza a) pesar 16,9 gramas de cloreto de amnia (NH4Cl) e dissolver em 143 mL de hidrxido de amnia concentrado (NH4OH); b) adicionar 1,25 gramas do sal de magnsio do EDTA e diluir a 250 mL com gua destilada.
Observao: Caso no disponha do sal de magnsio do EDTA, dissolver 1,179 gramas do sal sdico do EDTA e 780 mg do MgSO4.7H2O ou 644 mg do MgCl2.6H2O em 50 mL de gua destilada e juntar soluo do item 1, completando o volume para 250 mL com gua destilada.
Indicador negro Eriocromo T a) pesar 0,5 gramas de negro eriocromo T em um vidro de relgio; b) pesar 100 gramas de cloreto de sdio P. A. em um Becker; c) transferir os dois reagentes para um almofariz e triturar a mistura at se transformar em p; d) armazenar em frasco de boca larga, bem fechado. Inibidor I cianeto de sdio P.A. Usar 250 mg na soluo a ser titulada.
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Inibidor II sulfeto de sdio a) pesar 5 gramas de sulfeto de sdio ( Na2S.9H2O) ou 3,7 gramas de Na2S.5H2O; b) dissolver em 100 mL de gua destilada; c) guardar em frasco de vidro bem fechado a fim de evitar sua deteriorao por contato com o ar. Soluo padro de cor a) pesar 1,246 gramas de cloroplatinato de potssio (K2PtCl6) e 1,0 grama de cloreto cobaltoso cristalizado (CoCl2.6H2O); b) dissolver em gua destilada; c) acrescentar 100 mL de cido clordrico concentrado e diluir para 1000 mL com gua destilada. (Essa soluo equivale a 500 Unidades de Cor).
Reagentes para anlise de alumnio

cido sulfrico (H2SO4) 0,02N a) preparar igual ao utilizado para alcalinidade total. cido ascrbico a) pesar 0,1g de cido ascrbico e dissolver em um pouco de gua destilada e completar o volume para 100 mL. Essa soluo dever ser preparada diariamente. Reagente tampo a) pesar 136 g de acetato de sdio (NaC2H3O2.3H2O ) e dissolver em gua destilada. Adicionar 40 mL de soluo de cido actico 1N e diluir para 1000 mL com gua destilada.
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Soluo de cido actico 1N a) medir 58 mL de cido actico concentrado e diluir para 1000 mL com gua destilada. Soluo de eriocromo cianina-R (estoque) a) pesar e dissolver 150 mg do corante em cerca de 50 mL de gua destilada. Ajustar o pH para 2,9 com cido actico 1:1 (so requeridos aproximadamente 2 ml de cido). Diluir para 100 mL com gua destilada. Soluo de trabalho (eriocromo cianina-R) a) medir 10 mL da soluo-estoque e diluir para 100 mL com gua destilada. Essa soluo estvel por 6 meses. Soluo indicadora de metilorange. a) pesar e dissolver 100 mg de metilorange em 200 mL de gua destilada. Soluo Estoque de Alumnio (1mL = 500 g Al)
a) pesar 8,791 g de sulfato duplo de alumnio e potssio
(AlK(SO4)2.12H2O) e dissolver em um pouco de gua destilada. Completar o volume para 1000 mL em balo volumtrico. Soluo-Padro de Alumnio (1mL = 5 g) a) diluir 10 mL da soluo-estoque de alumnio para 1000 mL com gua destilada, em balo volumtrico. Preparar diariamente.
Observao: 1) Todos os reagentes devem ser preparados com gua destilada isenta de alumnio. 2) Todos os procedimentos que determinam diluir ou completar para x mL, fazer em balo volumtrico.
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Soluo de EDTA 0,01M a) pesar e dissolver 3,7 gramas de EDTA em 1000 mL de gua destilada.
Reagentes para anlise de fluoretos

Soluo-padro de fluoretos a) preparar uma soluo-estoque, dissolvendo 221,0 mg de fluoreto de sdio anidro (NaF) em gua destilada e diluir a 1000 mL (1 mL desta soluo equivale a 100 gF ); b) diluir 100 mL da soluo-estoque acima, para 1000 mL com gua destilada (1 mL = 10 gF ). Reagente zircnio-alizarina a) pesar e dissolver 300 mg de oxicloreto de zircnio (ZrOCl2.8H2O), em 50 mL de gua destilada e transferir para um frasco volumtrico de 1000 mL com tampa; b) pesar e dissolver 70 mg de monosulfato de alizarina em 50 mL de gua destilada; c) colocar a soluo 2 na soluo 1, lentamente e com agitao; d) a soluo resultante dever ficar em repouso por alguns minutos. Mistura cida a) medir 101 mL de cido clordrico concentrado (HCl) e diluir para aproximadamente 400 mL com gua destilada;
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b) adicionar cuidadosamente 33,3 mL de cido sulfrico concentrado (H2SO4) em aproximadamente 400 mL de gua destilada; c) aps esfriar, misturar as duas solues cidas. Reagentes Scott-Sanchis a) adicionar a mistura cida soluo reagente Zirconil-alizarina; b) completar o volume para 1000 mL com gua destilada e misturar; c) guardar em frasco mbar e em lugar protegido da incidncia de luz direta. Esse reagente estvel por 6 meses. Arsenito de sdio a) pesar 5 g de arsenito de sdio (NaAsO3) e dissolver em um pouco de gua, diluir para 1 litro com gua destilada (usar 1 gota para cada 0,1mg de cloro existente na amostra).
Observao: essa soluo txica evitar ingesto e contato com a pele.
Reagentes para anlise do teor de cloro ativo

Tiossulfato de sdio 0,1 N Dissolver 25 gramas de tiossulfato de sdio Na2S2O3.5H2O em 1 litro de gua destilada fervida recentemente. Armazenar durante duas semanas e padronizar com dicromato de potssio K2Cr2O7 0,1 N.
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Notas: 1. Usar gua destilada fervida na preparao do tiossulfato. 2. Adicionar alguns mililitros de clorofrmio ( 5 mL) para minimizar a decomposio bacteriana da soluo de tiossulfato.
Dicromato de potssio 0,1 N Pesar 4,904 gramas de dicromato de potssio (K2Cr2O7), dissolver em um pouco de gua destilada e em seguida diluir para 1 litro. Armazenar em frasco de vidro com tampa de vidro. Soluo indicadora de amido Pesar 5,0 gramas de amido. Adicionar um pouco de gua destilada at formar uma pasta. Em seguida dissolver essa pasta em um litro de gua destilada fervente. Deixar em repouso durante uma noite. Usar o lquido sobrenadante preservando-o pela adio de 1,25 gramas de cido saliclico.
Padronizao da soluo de tiossulfato de sdio 0,1N.

Material necessrio a) bureta de 50 mL; b) frasco Erlenmeyer de 250 mL; c) pipeta graduada de 1 mL; d) pipeta volumtrica de 10 mL. Procedimento: a) colocar 80 mL de gua destilada no Erlenmeyer; b) adicionar, com agitao constante, 1 mL de H2SO4 concentrado e 10 mL de dicromato de potssio 0,1 N; c) adicionar 1,0 grama de Iodeto de potssio; d) deixar a mistura reagir durante 6 minutos no escuro;
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e) titular com a soluo de tiossulfato de sdio at o e aparecimento da colorao amarela claro; f) adicione 1,0 mL da soluo de amido e continue a titulao at o desaparecimento da cor azul formada. Clculo 1 ml de tiossulfato consumido
Normalidade =
Regras gerais para corrigir as solues tituladas

A correo das solues tituladas um procedimento muito utilizado em laboratrio. Serve para aferir o grau de exatido das solues padronizadas. Periodicamente, o tcnico deve verificar a exatido dessas solues para que os resultados das anlises sejam os mais corretos possveis.
Regra 1
Quando o volume consumido de soluo a titular for igual ao volume da soluo-padro tomado para a titulao, significa que aquela est exata.
Exemplo: 10 mL de HCl 0,1N foram consumidos para titular 10 mL de Na2CO3 0,1N.
Regra 2
Quando o volume consumido da soluo a titular for menor que o volume do padro tomado, significa que a soluo a titular encontra-se mais concentrada. Nesse caso, faz-se a correo do seguinte modo:
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Exemplo: Foram gastos na titulao de 10 mL de Na2CO3 0,1N; 8,3 mL de HCl 0,1 N. Aplicando-se a seguinte equao, temos: 8,3 : 10 :: x : 1000.
Efetuando-se os clculos, tem-se: 10x = 8,3 x 1000 x = 8300/10 x = 830 mL Logo, mede-se 830 mL da soluo a titular e completa-se a 1000 mL com gua destilada. Fazer nova titulao para verificar o rigor da dosagem, que no deve ficar abaixo de 9,9 e acima de 10,1 mL.
Regra 3
No caso em que o volume da soluo a titular for maior do que o da soluo-padro, significa que a soluo a titular encontra-se mais diluda. Nesse caso, calcula-se o fator de correo da seguinte forma:
Exemplo: 10,5 mL de uma soluo de HCl 0,1N foram consumidos para titular 10 mL de uma soluo-padro de Carbonato de Sdio. Aplicando-se a seguinte equao, temos: 10,5 : 10 :: 1 : x Efetuando-se os clculos temos: 10 = 10,5x x = 10/10,5 x = 0,9524 Logo o Fator de correo da soluo 0,9524.
Limpeza de material de vidro no laboratrio

A preciso e exatido das anlises esto, alm de outros fatores, tambm, ligadas ao uso do material de vidro no laboratrio. Faz-se, portanto, necessrio que toda a vidraria esteja perfeitamente limpa, livre de impurezas, tais como sabes,
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detergentes e outros produtos que podem ficar aderidos s paredes dos recipientes. A vidraria em geral pode ser lavada simplesmente com gua, gua e sabo neutro ou por meio de solues especiais, como a soluo sulfo-crmica, por exemplo.
Procedimento de lavagem
Para vidraria nova:
a) a maioria dos materiais de vidros novos levemente
alcalina, portanto esses materiais devem ser colocados de molho por algumas horas em soluo de cido clordrico ou ntrico a 1% antes de serem lavadas. Para vidraria usada: a) os materiais de vidro j utilizados com meio de cultura (placas de Petri, tubos de cultura), devem ser esterilizados antes de serem lavados. Depois devem ser colocados em um recipiente grande, com gua contendo 1 a 2 % de sabo ou detergente, deixando ferver por 30 minutos. Em seguida devem ser enxaguados com gua corrente, esfregados com detergentes neutros e enxaguados novamente; b) em determinadas situaes em que os materiais de vidro no puderem ser limpos com os detergentes comuns ou outros produtos de limpeza, faz-se necessrio o uso de uma mistura constituda de cido sulfrico e soluo saturada de dicromato de sdio, preparada do seguinte modo: misturar 1 litro de cido sulfrico concentrado com 35 mL da soluo saturada de dicromato de sdio. Essa soluo no deve ser usada para lavagem de vidrarias utilizadas para anlise de cromo.
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Notas: 1. a soluo acima cida e ataca a pele; 2. no permitir contato da mo com a soluo; 3. a soluo ataca os tecidos. Evitar contato com a roupa; 4. no lavar com essa soluo vidros colados como cubetas utilizadas em espectrofotmetros, cubetas de turbidez, etc.; 5. depois de passar essa soluo na vidraria, enxagu-la com bastante gua e em seguida com gua destilada.
Relao de materiais de laboratrio de anlise de gua

Equipamentos
a) autoclave vertical, capacidade para 18, 24, 48 ou 72 litros, 110/220 volts; b) estufa para cultura bacteriolgica, com termostato regulvel na faixa de 30 a 65oC, tamanho 45x45x40 cm de largura, profundidade e altura, respectivamente, equipada com bandeja regulvel para trs posies; c) balana analtica, eltrica, capacidade para 160 g, sensibilidade de 1/100 mg, cinco casas decimais, 110/220 volts; d) balana de preciso, com dupla escala, pesagem mxima 200 gramas, sensibilidade de 0,1 g; e) destilador de gua, capacidade para 2 litros/hora, 110/220 volts; f) banho-maria capacidade para 50 tubos de ensaio, com termostato regulvel na faixa de 35 a 65oC, 110/220 volts; g) banho de vapor, para 6 provas simultneas, construdo em chapa metlica, com termostato regulvel em at 6 posies, 110/220 volts;
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h) capela para exausto forada de gases, com motor eltrico de 1/3 de HP, 110/220 volts; i) chapa aquecedora com termostato regulvel, tamanho x, 110/220 volts; j) estufa para esterilizao e secagem, tamanho 50x40x50 cm de largura, profundidade e altura, respectivamente, com termostato regulvel at 300oC, e bandeja regulvel para 3 posies, 110/220 volts; k) aparelho de Jar-Test para 6 provas simultneas, com regulador de velocidade de 0 a 100 rpm, com base de vidro ou acrlico iluminada, 110/220 volts; l) medidor de cloro residual, porttil, com disco de cor, escala de 0 a 3,5 mg/L, para uso com reagente DPD; m) termmetro bacteriolgico, com escala de 0 a 60oC, com divises de 1oC; o n) termmetro qumico com escala de 0 a 300 C, com diviso de 1oC; o) turbidmetro, completo; p) medidor de pH digital, de bancada, faixa de medio de 0 a 14, com eletrodo, 110/220 volts; q) medidor de pH, digital, porttil, faixa de medio de 0 a 14, com eletrodo, funcionamento bateria de 9 volts; r) lanterna para identificao de E. Coli, com lmpada fluorescente ultravioleta, 6 watts, 365 nm, recarregvel, porttil, 110 volts; s) bico de Bunsen; t) deionizador capacidade para 50 litros/hora 110/220 volts.
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Vidraria
a) tubo para cultura, sem borda, tamanho 150 x 16 mm; b) tubo para cultura, sem borda, tamanho 180 x 18 mm; c) tubo para cultura, sem borda, tamanho 125 x 15 mm; d) tubo de Nessler, forma alta, capacidade de 50 e 100 mL; e) tubo de Durhan, tamanho 40 x 5 mm; f) balo volumtrico, fundo chato, com tampa de teflon ou vidro esmerilhado, classe "A" capacidade de 50, 100, 250, 500 e 1000 mL; g) becker forma baixa, graduado, capacidade de 50, 100, 250, 500 e 1000 mL; h) bureta com torneira de vidro ou teflon, gravao permanente, classe "A" capacidade de 10, 25, e 50 mL; i) pipeta sorolgica, codificada por cores, com bocal para algodo, gravao permanente, capacidade de 1, 2, 5 e 10 mL; j) pipeta de MOHR, codificada por cores, bocal e bico temperados, gravao permanente, capacidade de 1, 2, 5 e 10 mL; k) pipeta volumtrica, codificada por cores, bocal e bicos temperados, gravao permanente, classe A, capacidade de 10, 25, 50 e 100 mL; l) frasco de vidro para reagentes, boca larga, cor branca, com rolha de vidro esmerilhada intercambivel, capacidade de 125 mL; m) proveta graduada a conter, com base hexagonal de vidro, gravao permanente, classe "A", capacidade de 10, 25, 50, 100, 250, 500 e 1000 mL; n) frasco Erlenmeyer, boca larga reforada, graduado, capacidade de 125, 250 e 500 mL;
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o) funil analtico, ngulo de 60o, liso, haste curta, com dimetro de 50, 75 e 100 mm; p) funil analtico, ngulo de 60o, raiado, haste longa, com dimetro de 50, 75 e 100 mm; q) funil analtico, ngulo de 60o, raiado, haste curta, com dimetro de 50, 75 e 100 mm; r) Placa de Petri de vidro, transparente, tamanho 100 x 15 mm; s) conjunto de destilao para fluoretos, constitudo de balo de fundo chato de 1000 mL com sada lateral para condensador Grahan, com juntas esmerilhadas; t) basto de vidro de 30 cm de comprimento x 5 mm de dimetro.
Materiais diversos
a) ala de platina calibrada com 3 mm de dimetro; b) cabo de Kolle para ala de platina; c) algodo em rama para bacteriologia; d) lpis dermogrfico; e) caldo lactosado, desidratado, embalagem de 100 ou 500 gramas; f) caldo lactosado, verde brilhante bile a 2%, desidratado, embalagem de 100 ou 500 gramas; g) meio ENDO MF, para coli total, embalagem de 100 ou 500 gramas; h) meio EC MF, para coli fecal, embalagem de 100 ou 500 gramas; i) prpura de bromocresol, embalagem de 5 gramas;
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j) estante para tubo de ensaio, com capacidade para 15 tubos de 180 x 18 mm, de madeira ou plstico resistente; k) estante para tubo de ensaio com capacidade para 40 tubos de 180 x 18 mm, em arame resistente autoclavao; l) caldo lauril triptose, desidratado, embalagem de 100 ou 500 gramas; m) meio EC, desidratado, embalagem de 100 ou 500 gramas; n) Plate count agar, desidratado, embalagem de 100 ou 500 gramas; o) substrato cromognico para determinao enzimtica qualitativa de coliformes totais e E. Coli em amostras de100 ml de gua, caixa com 20 ampolas; p) cesto de arame com capacidade para 50 tubos de ensaio de 180 x 18 mm, resistente autoclavao; q) suporte para tubo de Nessler de 50 e 100 mL, em madeira ou alumnio, capacidade para 8 tubos; r) papel de alumnio, medindo 7,5 m de comprimento x 30 cm de largura; s) algodo hidrfilo, pacote de 500 gramas; t) Placa de Petri, de plstico, esterilizada, de 47 mm de dimetro; u) filtros estries de 47 mm de dimetro, 0,45m de porosidade, com carto absorvente, embalagem com 100 unidades; v) conjunto porta-filtro de membrana, construdo em ao inoxidvel, com dispositivo para esterilizao no campo; w) pina de ao inoxidvel, de 10 cm de comprimento.
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Biossegurana em laboratrio
Neste manual, constam apenas os principais procedimentos relacionados biossegurana em laboratrio que devero ser observados pelos tcnicos que atuam na rea.
Procedimentos de ordem pessoal:

a) no pipetar nenhum tipo de lquido com a boca; b) usar culos de proteo nos ambientes do laboratrio onde o uso obrigatrio; c) no levar as mos boca ou aos olhos quando estiver manuseando produtos qumicos; d) no guardar alimentos na geladeira do laboratrio; e) no fazer refeies dentro do laboratrio; f) no fumar no interior do laboratrio; g) usar avental/jaleco de manga comprida com elstico no punho, sempre. E retir-lo ao sair do laboratrio; h) lavar cuidadosamente as mos com bastante gua e sabo, antes de fazer qualquer refeio; i) no manipular produtos txicos sem antes se certificar de sua toxicidade.
Procedimentos relacionados ao laboratrio

a) manter as bancadas do laboratrio sempre limpas e livres de materiais estranhos ao trabalho; b) retirar da bancada os materiais, amostras e reagentes empregados no trabalho, logo aps utiliz-los; c) limpar imediatamente qualquer derramamento de produtos e reagentes com os cuidados necessrios;
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d) ao esvaziar um frasco de reagente, fazer a limpeza prvia com gua, antes de coloc-lo para lavagem; e) rotular imediatamente qualquer reagente ou soluo preparada e as amostras coletadas; f) no jogar produtos corrosivos concentrados na pia; descart-los somente aps serem diludos; g) na preparao de solues cidas nunca adicionar gua no cido e sim cido na gua; h) no jogar na pia lquidos inflamveis e/ou volteis; estoc-los em recipientes adequados; i) dispor os cilindros com gases em ambiente externo ao laboratrio, devidamente acondicionados; j) usar cmara de fluxo laminar (cabine de segurana biolgica) para manipulao de meios de cultura e pesquisa microbiolgica; k) usar cmara de exausto (cabine de segurana qumica) com lavador de gases quando manusear lquidos inflamveis e/ou volteis.
Procedimentos para o uso de vidrarias

a) no utilizar materiais de vidro trincados; b) usar luvas de amianto para manusear peas de vidro que estejam quentes; c) no deixar frascos quentes sem proteo sobre as bancadas do laboratrio, coloc-los sobre placas de amianto; d) no aquecer recipiente de vidro em chama direta, usar tela de amianto; e) no pressurizar recipientes de vidro;
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f) no esquecer vidraria em aquecimento usar despertador, sempre; g) no usar frascos para amostras que no estejam perfeitamente limpos e sem certificar-se de sua adequao aos servios a serem executados; h) usar luvas de pelica e culos de segurana, sempre que atravessar ou remover rolhas de borracha ou cortia, de tubos de vidro ou termmetros; i) remover tampas de vidro emperradas; j) remover cacos de vidro usar p de lixo e escova; k) usar protetor facial e luvas de pelica quando agitar solventes volteis em frascos fechados.
Procedimento para uso de equipamentos em geral

a) antes de utilizar qualquer equipamento ler as instrues de operao fornecidas pelo fabricante; b) nunca ligar equipamentos eltricos sem antes verificar a voltagem; c) no instalar nem operar equipamentos eltricos sobre superfcies midas; d) no deixar equipamentos eltricos ligados no laboratrio fora do expediente, exceto os de energia constante como geladeiras, estufas, etc.; e) combater fogo em equipamentos eltricos somente com extintor de CO2; f) manter os equipamentos de segurana em locais de fcil acesso e ao alcance de todos os funcionrios do laboratrio, tais como: extintor de incndio;
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chuveiro de emergncia; lavador de olhos; cobertor de segurana; mscara contra gases; mscaras e culos de segurana, etc.
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Coleta e preservao de amostras para contagem de clulas de cianobactrias e cianotoxinas
Apndice A
Indroduo
No final da elaborao deste manual, j revisado e adaptado para a atual legislao sobre qualidade de gua para consumo humano, foram includos os procedimentos bsicos de coleta de amostras de gua para a identificao e contagem de cianobactrias em mananciais de abastecimento. Tal iniciativa deve-se crescente eutrofizao dos ambientes aquticos que tem sido produzida principalmente por atividades humanas, causando um enriquecimento artificial desses ecossistemas. As principais fontes desse enriquecimento tm sido identificadas como as descargas de esgotos domsticos e industriais dos centros urbanos e a poluio difusa originada nas regies agricultveis. Essa eutrofizao artificial produz mudanas na qualidade da gua, incluindo: a reduo de oxignio dissolvido, a perda das qualidades cnicas, ou seja, das caractersticas estticas do ambiente e seu potencial para lazer, a morte extensiva de peixes e o aumento da incidncia de floraes de microalgas e cianobactrias, com conse quncias negativas sobre a eficincia e custo de tratamento da gua, quando se trata de manancial de abastecimento pblico. Essas floraes ou blooms se caracterizam pelo intenso crescimento desses micro-organismos na superfcie da gua, formando uma densa camada de clulas com vrios centmetros de profundidade, com consequncias relacionadas sade pblica.
Coleta e preservao de amostras para contagem de clulas de cianobactrias

Material necessrio
a) frasco de polietileno ou vidro mbar, com capacidade para 1000 mL;
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b) garrafa de Van Dorn ou similar; c) soluo de lugol; d) soluo de Formaldeido a 40%; e) equipamentos de proteo individual (luvas, botas e mscara).
Definio do ponto de coleta da amostra

a) quando houver florao de Cianobactrias, a amostra dever ser coletada no ponto de maior concentrao da mesma; b) quando no houver florao de Cianobactrias, a amostra dever ser coletada no ponto de captao da ETA, no manancial. Identificao das amostras a) todas as amostras devero ser identificadas por uma numerao no prprio frasco de coleta, referente s fichas de coleta; b) as fichas de coleta acompanharo as amostras e devero conter os seguintes dados: nome e endereo do interessado, nome do manancial, tipo de manancial, data e hora da coleta, descrio do local de coleta GPS, nome do coletor, ocorrncia de fenmenos.
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Procedimento de coleta - amostra de superfcie

a) fazer ambiente no frasco de coleta por pelo menos trs vezes; b) encher o vasilhame com a amostra coletada, deixando um volume de ar na parte superior do frasco; c) coletar no mnimo 1000 mL da amostra para gua bruta; d) coletar 4.000 mL da amostra para gua tratada.
Observao: Coletar somente em frasco mbar.
Preservao, acondicionamento e transporte da amostra

a) ambientes oligotrficos: preservar as amostras em soluo Lugol (adicionar 1mL/L); b) ambientes eutrofizados: preservar as amostras em soluo Formaldedo 40%: (adicionar 2mL/L); c) refrigerar a amostra a 4C; d) acondicionar em caixas trmicas e encaminhar ao laboratrio em no mximo 08 horas.
Coleta e preservao de amostras para determinao de cianotoxinas

Material utilizado
a) frasco de polietileno ou vidro mbar, com capacidade para 1000 mL; b) equipamentos de proteo individual (luvas, botas e mscara).
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Definio do ponto de coleta da amostra

a) quando houver florao de Cianobactrias, a amostra dever ser coletada no ponto de maior concentrao da mesma; b) quando houver florao de Cianobactrias e a contagem de clulas ultrapassar a 20.000 clulas/ mL, devero ser coletadas amostras no manancial e na sada da ETA, segundo determinao da Portaria MS n 2.914/2011; c) quando no houver florao de Cianobactrias, a amostra dever ser coletada no ponto de captao da ETA, no manancial.
Identificao das amostras

a) todas as amostras devero ser identificadas por uma numerao no prprio frasco de coleta, referente s fichas de coleta; b) as fichas de coleta acompanharo as amostras e devero conter os seguintes dados: nome e endereo do interessado, nome do manancial, tipo de manancial, data e hora da coleta, descrio do local de coleta GPS, nome do coletor e ocorrncia de fenmenos.
Procedimentos de coleta Frao Particulada

Material necessrio a) fazer ambiente no frasco de coleta por pelo menos trs vezes;
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b) encher o vasilhame com a amostra coletada, deixando um volume de ar na parte superior do frasco; c) coletar no mnimo 1000 mL da amostra de gua bruta; d) coletar 4000 mL da amostra de gua tratada;
Preservao, acondicionamento e transporte da amostra

a) refrigerar a amostra a 4oC; b) acondicionar em caixas trmicas e encaminhar ao laboratrio em no mximo 08 horas.
Observao: Caso a amostra no possa ser enviada ao Laboratrio no mesmo dia da coleta, a mesma dever ser congelada e enviada ao laboratrio no prazo mximo de 15 dias.
Lavagem dos frascos

Sugere-se para lavar os frascos de coleta e acondicionamento de amostras para anlise de cianotoxinas o seguinte procedimento: deix-los previamente imersos em sabo neutro por 12 horas, depois lavar exaustivamente com gua e colocar em soluo de HCl a 5% durante 12 horas, lavar novamente e exaustivamente com gua destilada e secar. Caso o frasco j tenha sido utilizado anteriormente para coleta de amostras contendo cianobactrias, deix-lo em uma soluo de gua sanitria por 30 minutos antes de passar pelo sabo neutro.
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Garrafa de van Dorn

A garrafa de van Dorn (fig.) consiste de um tubo de PVC com volume de 2; 5 e 7 litros ou mais. O funcionamento consiste em mergulhar a garrafa aberta em ambas as extremidades e aps atingir o ponto desejado, deixa-se cair o mensageiro que fecha hermeticamente as duas extremidades. A amostra retirada pela mangueira que fica na parte lateral da garrafa desconectando a parte superior.
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Determinao de Giardia sp e Cryptosporidium sp em gua pela tcnica de filtrao, separao imunomagntica e microscopia de imunofluorescncia
Apndice B
Introduo
A transmisso de protozoonoses via abastecimento de gua, em particular giardiose e criptosporidiose, um tema que tem despertado crescente preocupao no que tange questo de sade pblica. Protozorios so micro-organismos eucariticos, unicelulares, sem paredes celulares que se alimentam de bactrias e outros organismos. A maior parte dos protozorios de vida livre e so frequentemente encontrados em guas superficiais, no entanto vrias espcies so parasitas. Os efeitos sobre a sade em decorrncia da exposio a protozorios presentes na gua de consumo so variados. A manifestao mais comum so distrbios gastrointestinais, normalmente, de curta durao. No entanto, em indivduos sensveis, tais como crianas, idosos e imunocomprometidos, os efeitos podem ser mais graves, crnicos ou at mesmo fatais. Giardia e Cryptosporidium so micro-organismos de ampla distribuio, e relevante patogenicidade, que se multiplicam apenas no trato gastrointestinal de seres humanos e outros animais. Apesar de no poderem se reproduzir no ambiente, podem sobreviver por longos perodos de tempo em meio aqutico. Cistos de Giardia e, principalmente, oocistos de Cryptosporidium, so reconhecidamente resistentes aos agentes desinfetantes utilizados no tratamento de gua para consumo humano, particularmente quando o cloro o agente utilizado. Ante esse cenrio, a Portaria MS n 2.914/2011 impe o monitoramento de Giardia e Cryptosporidium no ponto de captao de gua quando a mdia geomtrica anual de E. coli nesse ponto for maior ou igual a 1.000 org/100mL. Adicionalmente, quando a mdia aritmtica da concentrao de oocistos de Cryptosporidium spp. for maior ou igual a 3,0
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oocistos/L no(s) pontos(s) de captao de gua, a portaria recomenda que a turbidez do efluente filtrado (filtrao rpida) seja menor ou igual a 0,3 UT, ou que, alternativamente, se empregue processo de desinfeco que comprovadamente alcance a mesma eficincia de remoo de oocistos de Cryptosporidium spp. As metodologias utilizadas para deteco de (oo)cistos baseiam-se na concentrao das amostras e na deteco. Em todos os mtodos utilizados no monitoramento de oocistos, as etapas de concentrao, purificao (que incorporada para separar (oo)cistos dos resduos remanescentes) e deteco so consideradas muito importantes. No entanto, destaca-se que essas metodologias foram delineadas e padronizadas em pases como EUA, Austrlia e Canad, cujos programas e legislaes de controle da poluio e da degradao dos mananciais so priorizados. As diferentes metodologias empregadas para a pesquisa de protozorios patognicos em gua esto sujeitas a vrias limitaes, dentre elas, custos elevados, necessidade de importao de insumos e exigncia de recursos humanos especializados. Tambm grande a variabilidade dos resultados e baixa a taxa de recuperao dos mtodos analticos, mesmo quando empregado o mtodo de referncia Mtodo 1623/ USEPA. H ainda de se considerar que essas metodologias no permitem a identificao da espcie de protozorio (que pode ser til indicador da fonte da contaminao) tampouco fornecem informaes sobre a infectividade dos organismos. A seguir descrito uma metodologia de determinao de Giardia sp e Cryptosporidium sp em amostras de gua.
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Determinao de Giardia sp e Cryptosporidium sp em gua pela tcnica de filtrao, separao imunomagntica e microscopia de imunofluorescncia Mtodo 1623 da USEPA: Determinao de Giardia sp. e Cryptosporidium sp. em gua pela tcnica de filtrao, separao imunomagntica e microscopia de imunofluorescncia (USEPA, 2005).
1. Princpio do mtodo
A tcnica de deteco de Cryptosporidium e Giardia descrita nesse procedimento baseada nas etapas: concentrao da amostra por filtrao e centrifugao, purificao por separao imunomagntica (IMS), colorao e leitura de lminas (microscopia de imunofluorescncia - FA). Cryptosporidium e Giardia so identificados por meio do corante DAPI (do ingls 4-6-Diamidino-2-phenylindole) e microscopia de Contraste por Interferncia Diferencial. Esse mtodo identifica os gneros, Cryptosporidium ou Giardia, mas no em nvel de espcie. Sua aplicao exige o emprego de pessoal capacitado com treinamento e experincia na determinao de Cryptosporidium e Giardia por filtrao, IMS, e FA.
2. Interferentes
Influncia virtude Turbidez da nas etapas de de
concentrao e separao, em concentrao material particulado e da anlise da amostra em microscpio, dificultando a identificao de oocistos de Cryptosporidium e cistos de Giardia.
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continuao
Organismos ou detritos com autofluorescncia ou imunofluorescncia Interferncia positivos Solventes, de reagentes, e material quaisquer laboratrio na identificao de (oo)cistos, originando falsos
hardwares de processamento de amostras podem ser responsveis por introduzir interferentes e originar erros de interpretao dos Contaminao exames microscpicos devem de oocistos e cistos. Todos os materiais utilizados ter constatada a ausncia de interferentes sob as condies de anlise por meio da execuo de branco (controle negativo). Material descartvel deve ser usado sempre que possvel. A identificao de (oo)cistos em microscpio exige capacidade do laboratorista para identificar Inexperincia do laboratorista ambos os gneros em meio a amostra ambiental (composta por componentes diversos) e treinamento nas diversas etapas dos mtodos e manuseio dos equipamentos.
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3. Segurana
O perigo de contaminao biolgica associada e o risco de infeco por cistos e oocistos so elevados nesse mtodo, uma vez que envolve a manipulao de amostras concentradas de organismos patognicos vivos (ativos), portanto, devem ser manuseadas com luvas. O laboratrio deve estabelecer medidas de segurana e prticas de sade apropriadas, observando os procedimentos de segurana tpicos de laboratrios de microbiologia que lidam com organismos patognicos, durante a preparao, uso e descarte da amostra concentradas, reagentes e materiais, na operao e esterilizao de equipamentos. O conhecimento sobre toxicidade ou carcinogenicidade dos compostos ou reagentes utilizados no so bem consolidados, assim, cada composto deve ser tratado como potencial perigo sade, devendo, a exposio, ser reduzida ao nvel mais baixo possvel. O transporte de amostras, contendo agentes infecciosos, deve ser realizado de forma criteriosa, procedendo-se, preferencialmente, a inativao dos agentes. No entanto, devem ser observadas normas e legislaes pertinentes ao transporte de agentes biolgicos inativados ou no.
4. Equipamentos e materiais
Nota: Marcas ou fornecedores citados so apenas para referenciais. Desempenho equivalente pode ser conseguido utilizando marcas alternativas, entretanto, deve-se observar a adequabilidade dos insumos utilizados.
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4.1 Gales ou recipientes plsticos (polietileno) para coleta de amostras com volume entre 10 e 50 litros. O material de coleta deve ser, preferencialmente, descartvel (reciclvel).
Nota: Opcionalmente, pode-se optar pela esterilizao dos gales de coleta pela lavagem com 200 mL de soluo de hipoclorito de clcio 12,5% (agitar bastante para espalhar a soluo), aguardar de 8 a 12h (overnight), descartar a soluo de hipoclorito de clcio e lavar, primeiramente, com 200 mL de soluo de tiossufalto de sdio (52%) e em seguida enxaguar com gua destilada (gua reagente).
4.2 A gitador de tubos (tipo Vortex). 4.3 A gitador magntico. 4.4 B arras magnticas. 4.5 A gitador rotatrio com capacidade de 18 rpm/min. 4.6 Bomba de vcuo/presso ou linha de presso com capacidade mnima de 5 bar. 4.7 Centrfuga capaz de proporcionar fora de 1500g equipada com rotores swinging-bucket que acomodem tubos cnicos de 250 mL e 50 mL. 4.8 Concentrador de partculas magnticas para tubos de 10 mL (MPC1 ou MPC6). 4.9 Concentrador de partculas magnticas para tubos de microcentrfuga (MPC-M ou MPC-S). 4.10 Homogeneizador (tipo Stomacher) com capacidade de 300-350 golpes/minuto. 4.11 Sacos plsticos compatveis com o homogeneizador.
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4.12 Micropipetadores com volume varivel de 100-1000 L e 10-100 ou 20-200 L. 4.13 Microscpio ptico equipado com contraste interferencial diferencial (DIC) e epifluorescncia com capacidade de fornecer aumentos de 200x, 400x e 1000x. 4.14 P orta filtro de espuma. 4.15 B queres de 1000 ou 2000 mL. 4.16 F iltros de espuma (Filta-Max). 4.17 E stao de lavagem e concentrao (Filta-Max). 4.18 Membrana de policarbonato de 25 mm de dimetro e reteno de 1m. 4.19 L minas para microscopia de fluorescncia. 4.20 L amnulas (mnimo 24x32 mm). 4.21 P ipetas Pasteur. 4.22 P ipetas sorolgicas de 5 e 10 mL. 4.23 Ponteiras de polipropileno com capacidade para 200300 L e 1000 L. 4.24 P roveta de 500 mL. 4.25 T ubos de polipropileno de 1,5 mL (tipo eppendorf). 4.26 Tubos cnicos de centrfuga com capacidade de 250 mL e 50 mL.
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4.27 T ubos de Leighton (lado plano).
5. Reagentes
5.1 H idrxido de sdio. 5.2 cido clordrico. 5.3 Acetona. 5.4 Glicerol. 5.5 Etanol. 5.6 Metanol. 5.7 gua reagente (gua ultrapura). 5.8 T ween 20 (Sigma Chemical). 5.8.1 Tampo fosfato salino - PBS pH 7.4 (Sigma Chemical): 8 g NaCl; 0.2 g KCl; 1.15 g Na2HPO4 anidro; 0.2 g KH2PO4; 1,0 L gua reagente. 5.8.2 DAPI - 4',6-diamidino-2-phenylindole (Sigma Chemical). 5.9 S olues para eluio dos filtros. 5.9.1 Tampo fosfato salino/ Tween 20 (PBST): Adicionar 0,10mL (100L) de Tween 20 a 1,0 L a soluo Tampo fosfato salino (PBS). 5.9.2 Soluo estoque: dissolver 2 mg DAPI em 1,0 mL de metanol absoluto.
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Nota: Preparar volumes mnimos para o uso e colocar em frasco ou tubo estril protegido da luz com tampa rosqueada. Armazenar entre 1oC e 10oC. No permitir congelamento. Descartar a soluo aps 2 semanas ou quando o controle positivo der negativo.
5.9.3 DAPI (soluo de uso - seguir instrues do fabricante do kit de anticorpos): adicionar 0,01 mL de DAPI (soluo-estoque) a 50 mL de PBS.
Nota: Preparar volumes mnimos para o uso e colocar em frasco ou tubo estril protegido da luz com tampa rosqueada. Armazenar entre 1oC e 10oC. Preparar a soluo diariamente.
5.10 S olues para montagem das lminas. 5.10.1 Glicerol/PBS: Misturar 60 mL de Glicerol e 40 mL de PBS.
Nota: Preparar no momento do uso.
5.10.2 Meio de montagem DABCO/Glicerol: pesar 2,0g de DABCO (Sigma Chemical) e colocar em um balo volumtrico. Acrescentar 95 mL de soluo de glicerol/PBS morna (aquecida) e misturar at a completa dissoluo do reagente. Completar o volume para 100 mL e colocar em frasco estril com tampa rosqueada de capacidade de 100 mL. Manter refrigerado de 2 a 8oC (validade: 3 meses).
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6. Coleta de amostra
6.1 Encher completamente o vasilhame, assegurando a coleta de 10 L (A verso do mtodo utilizando filtro de espuma Filta Max foi validada para um volume de 50 L, no entanto volumes de amostra alternativos podem ser usados). 6.2 As amostras devero ser coletadas em volume nico e mantidas refrigeradas entre 1oC e 10oC, sem congelamento, at o processamento.
7. Identificao da amostra
7.1 I dentificar adequadamente a amostra. 7.1.1 Registrar informaes da procedncia da amostra, data e hora da coleta. 7.1.2 Registrar dados da anlise: data do incio da anlise, volume analisado e volume do centrifugado. 7.1.3 R egistrar lotes dos reagentes e solues utilizados
8. Filtrao
8.1 C olocar o filtro de espuma no porta-filtro. 8.2 Conectar com auxlio de mangueiras de silicone o porta-filtro ao recipiente contendo a amostra e bomba ou linha de presso. 8.3 O efluente ao processo de filtrao deve ser armazenado em recipiente graduado para medio do volume.
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8.4 Aps o trmino da filtrao da amostra, desligar a presso. Desconectar o porta-filtro da mangueira e tampar o porta-filtro com uma rolha de borracha nos pontos de entrada e sada. 8.5 Se a eluio no for ser feita imediatamente, armazenar o porta-filtro com a espuma sob refrigerao (1 a 10oC). A eluio pode ser iniciada em 96 horas aps a coleta da amostra ou sua filtrao em campo.
9. Eluio
Nota: O processo de eluio, aqui descrito, utiliza estao de lavagem Filta-Max. Devem ser consultadas as instrues do fabricante para domnio da montagem e operao do aparelho. Opcionalmente pode-se utilizar um Stomacher.
9.1 P rocedimento de eluio na estao Filta-Max. 9.1.1 P rimeira lavagem. 9.1.1.1 Colocar a membrana filtrante plana na base do concentrador, com a parte rugosa para cima. 9.1.1.2 Usar as travas da estao de lavagem para parafusar o tubo concentrador (criando uma vedao na membrana). 9.1.1.3 Retirar o tubo concentrador da estao de lavagem. 9.1.1.4 R emover o filtro de espuma do porta-filtro. 9.1.1.5 C onectar o filtro de espuma estao de lavagem.
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9.1.1.6 Verter o excesso de lquido recuperado a partir do mdulo de filtrao para o tubo concentrador, em seguida, lav-lo com PBST e verter o lquido no tubo concentrador. 9.1.1.7 Adicionar 600 mL de PBST para o tubo concentrador e conect-lo na base abaixo do tubo de eluio.
Nota: Se mais do que 50 mL de lquido foi recuperado a partir do mdulo de filtrao, reduzir o volume de PBST em conformidade.
9.1.1.8 Lavar o filtro de espuma, movendo o mbolo para cima e para baixo 20 vezes. Movimentos suaves do mbolo so recomendados para evitar a produo excessiva de espuma. 9.1.1.9 Separe o concentrador e purgar o lquido restante no tubo de eluio, movendo o mbolo para cima e para baixo 5 vezes, em seguida, para evitar que escorra, colocar o tampo fornecido na extremidade do tubo de ao. 9.1.1.10 Concentrar a soluo eluda da primeira lavagem utilizando o aparelho Filta-Max. Colocar o tubo concentrador sobre uma placa de agitao magntica e colocar a tampa, com barra agitadora magntica. 9.1.1.11 Conecte o aparelho de drenagem vlvula na base do concentrador. Ligue o agitador e abra a vlvula. 9.1.1.12 L igue a bomba a vcuo. 9.1.1.13 Permitir que o lquido escoe at a uma altura aproximadamente igual ao meio da barra agitadora, em seguida, fechar a vlvula.
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9.1.1.14 Remover o agitador magntico, e lav-lo com PBST ou gua reagente para recuperar todos os oocistos. 9.1.1.15 Transferir o concentrado para um tubo de 50 mL, em seguida, lavar os lados do tubo de concentrao e transferir o produto do enxgue para o tubo de 50 mL. 9.1.2 S egunda lavagem 9.1.2.1 Adicionar um volume adicional de 600 mL de PBST para o mdulo concentrador. 9.1.2.2 Repetir a lavagem dos filtros de espuma, movendo o mbolo para cima e para baixo 10 vezes. Movimentos suaves do mbolo so recomendados para evitar a produo excessiva de espuma. 9.1.2.3 Adicionar o concentrado da primeira lavagem, armazenado no tubo de 50 mL, para o eluato (mistura de eluente e soluto) da segunda lavagem e repetir o processo de concentrao da amostra com aparato Filta-Max .
Nota: No caso de obstruo dos poros da membrana e interrupo do escoamento antes de finalizar a concentrao, pode-se substituir a membrana filtrante. Desmonte o tubo concentrador e armazene o eluato remanescente em um recipiente. Retire a membrana com auxlio de uma pina, colocando-a no saco fornecido. Coloque uma nova membrana e remonte o tubo concentrador. Retorne o eluato armazenado ao tubo concentrador, lave o recipiente com gua reagente e adicione o lquido ao eluato, prossiga a concentrao. A membrana pode ser substituda quantas vezes forem necessrias. Pode-se tambm realizar a concentrao por centrifugao a 1500G por 15 minutos.
9.1.2.4 R emover o agitador magntico.

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9.1.2.5 A amostra final pode ser vertida para dentro do mesmo tubo de 50 mL. Lavar os lados do tubo concentrador com PBST e verter a soluo para o tubo de 50 mL. 9.1.2.6 Inserir o tubo concentrador vazio na estao de lavagem. 9.1.2.7 Retirar a membrana e transferi-la para o saco fornecido com o auxlio de uma pina. 9.1.2.8 L avar a membrana: 9.1.2.8.1 Manualmente - Adicionar 5 mL de PBST para o saco contendo a membrana. Esfregar a superfcie da membrana atravs do saco at que a membrana parea limpa. Usando uma pipeta, transferir o produto de eluio a um tubo de 50 mL. Repita a lavagem da membrana com mais 5 mL de PBST e transferir o produto de eluio para o tubo de 50 mL. 9.1.2.8.2 Lavagem com Stomacher - Adicionar 5 mL de PBST para o saco contendo a membrana. Coloque o saco contendo a membrana em um Stomacher e agitar durante 3 minutos. Usando uma pipeta transfira o eluato para um tubo de 50 mL. Repita a lavagem duas vezes utilizando o Stomacher e 5 mL de alquotas de PBST.
10. Centrifugao
10.1 Centrifugar o tubo de 50 mL a 1500g durante 15 minutos. 10.2 Com o auxlio de uma pipeta de Pasteur, aspirar cuidadosamente o sobrenadante at 5 mL acima do sedimento.
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10.3 R egistrar o volume do sedimento.

Nota: O volume do sedimento no deve ser superior a 0,5 mL, quantidade mxima recomendada de material particulado para purificao pelo mtodo.
11. Separao imunomagntica

11.1 Agitar vigorosamente o tubo em vrtex para ressuspenso do sedimento: 11.1.1 Se o volume de sedimento for inferior a 0,5 mL, agite o tubo vigorosamente em vrtex at o sedimento ser completamente ressuspendido. Girar o tubo de centrfuga suavemente para reduzir a espuma formada aps homogeneizao. 11.1.2 Se o volume de sedimento for superior a 0,5 mL, o concentrado deve ser separado em vrias subamostras (uma subamostra no deve ter volume de sedimento superior a 0,5 mL). 11.1.2.1 Estimar o volume total requerido usando o volume do sedimento pela frmula:
Volume total requerido (mL) = Volume de sedimento (mL) 0,5 mL x 5,0 mL
Por exemplo, se o volume do precipitado for 1,2 mL, o volume total necessrio 12 mL. Adicionar gua purificada ao tubo de centrfuga para completar o volume para 12 mL. 11.1.3 Se todo o volume obtido for submetido ao IMS, dividi-lo por 5 mL e calcular o nmero de subamostras a serem analisadas (arredondando para o nmero inteiro
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superior mais prximo). No exemplo citado, 12/5 mL = 2,4, arredondando portanto 3 subamostras. 11.1.4 Se o volume a ser analisado for parcial, agitar vigorosamente o volume total em vrtex para ressuspender completamente o precipitado. 11.2 Preparar, para cada concentrado, 1,5mL de uma diluio 1X do tampo SL-A 10X. Para cada 1,0 mL requerido da soluo diluda, misture 100L (0,1mL) e 900L (0,9mL) de gua reagente. 11.3 Transferir, com o auxlio de uma pipeta de 10mL, 5mL da amostra concentrada (ou subamostra) para o tubo de Leighton (lado plano) contendo 1,0 mL de cada tampo, SL-A 10X e SL-B 10X (Dynabeads GC-Combo). 11.4 Enxaguar, duas vezes com gua reagente, o tubo contendo o concentrado (ou subamostra), de modo que o volume final no tubo de Leighton seja de 12 mL. 11.5 Adicionar a cada tubo de Leighton (contendo amostra e tampes), 100 mL de DynabeadsCrypto-Combo e 100mL de DynabeadsGiardia-Combo, previamente homogeneizados no vrtex por 10 segundos. Colocar os tubos no agitador rotatrio por no mnimo 1 hora, a 18rpm. 11.6 Transferir o tubo de Leighton para o concentrador magntico de partculas (MPC1 ou MPC6), homogeneizar, manual e suavemente, em um ngulo de aproximadamente 90o por 2 minutos. 11.7 Descartar o sobrenadante, sem retirar o tubo do concentrador magntico de partculas e sem agitar o material.
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11.8 Se a amostra estiver turva, descartar o sobrenadante e ressuspender o sedimento em 10 mL de PBS e repetir o procedimento no concentrador magntico de partculas. 11.9 Remover o concentrador magntico de partculas e ressuspender a amostra em 500L (0,50mL) de tampo SL-A 1X utilizando pipeta Pasteur e transferir para um tubo eppendorf. Adicionar mais 500L de tampo SL-A 1X ao tubo de Leighton, lavar bem e transferir para o tubo eppendorf. Colocar o eppendorf no concentrador magntico, MPC-M ou MPC-S, e homogeneizar manualmente em um ngulo de 180oC durante 1 minuto. 11.10 Para transferir, quantitativamente, todo o volume aguardar, aps a segunda transferncia, cerca de um minuto e recolher qualquer volume residual que tenha escorrido para a parte inferior do tubo. 11.11 Descartar o sobrenadante, sem retirar concentrador magntico. 11.12 Dissociao do complexo beads/(oo)cisto. 11.13 Remover o concentrador magntico. 11.14 Adicionar 50L da soluo de HCl 0,1N ento agite no vrtice a alta velocidade por cerca de 50 segundos. 11.15 Colocar o tubo no concentrador magntico (MPC-M ou MPC-S) sem a tira magntica no lugar e deixar repousar numa posio vertical, por pelo menos 10 minutos, a temperatura ambiente. 11.16 Agite no Vrtex durante aproximadamente 30 segundos.
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11.17 Assegurar que toda a amostra est na base do tubo. Colocar o tubo de microcentrfuga (eppendorf) no concentrador magntico (MPC-M ou MPC-S). 11.18 Coloque a tira magntica no concentrador magntico (MPC-M ou MPC-S) e deixar em repouso durante um mnimo de 10 segundos. 11.19 Preparar uma lmina e identific-la, adicionar 5 L de NaOH 1,0 N ao poo da lmina. 11.20 O procedimento envolve duas dissociaes cidas, no entanto pode-se optar por montar duas lminas, cada uma com o volume de cada dissociao, ou uma nica lmina. Caso opte-se por montar uma nica lmina, adiciona-se 10 L de NaOH 1,0 N ao poo da lmina. Deve ser medido o volume do concentrado adicionado lmina. 11.21 O volume obtido da dissociao pode ser armazenado em outro eppendorf contendo 10 L de NaOH 1,0 N. Desse modo, pode-se realizar a leitura de uma menor alquota do concentrado, deve-se portanto registrar o volume concentrado e o volume da alquota. 11.22 Sem remover o eppendorf do concentrador magntico (MPC-M ou MPC-S) transferir toda a amostra para o poo da lmina com o NaOH. Evitar tocar as partculas presas a parede do tubo. Assegurar que todo o fluido seja transferido. 11.23 Remover o eppendorf do concentrador magntico e repetir o procedimento de lavagem com cido.
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11.24 O volume da segunda dissociao cida pode ser adicionado lmina contendo o volume da primeira dissociao ou pode ser montada uma segunda lmina.
Nota 1: O s poos da lmina podem ser pequenos para acomodar os volumes de ambas as dissociaes. Nota 2: As estapas de eluio, concentrao e purificao (separao imonomagntica) devem ser concludas no mesmo dia de trabalho.
12. Colorao
12.1 Deixar as lminas secarem a temperatura ambiente pernoite (ou at que a lmina seque completamente). Seguir as instrues do fabricante para efetuar a colorao imunofluorescente.
Nota: A colorao deve ser iniciada em at 72 horas aps o preparo da lmina.
12.2 Colocar a lmina numa cmara mida, no escuro e temperatura ambiente durante aproximadamente 30 minutos. (A cmara mida consiste de um recipiente de plstico contendo toalhas de papel midas sobre as quais as lminas so colocadas). 12.3 Lavar os poos, adicionando PBS em quantidade suficiente (aproximadamente 100L). Aspirar cuidadosamente o lquido, sem tocar a rea contendo o material. 12.4 Adicionar 50L de DAPI e deixar em repouso durante 5 minutos na cmara mida (A cmara mida consiste de um recipiente de plstico contendo toalhas de papel midas no topo do qual as lminas so colocadas). 12.5 Lavar os poos, adicionando PBS em quantidade suficiente (aproximadamente 100L). Aspirar cuidadosamente o lquido, sem tocar a rea contendo o material.
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12.6 Colocar uma gota do meio de montagem DABCO/glicerol e cobrir com uma lamnula, evitando a formao de bolhas entre a lmina e a lamnula. 12.7 Cuidadosamente, selar as bordas da lamnula com esmalte transparente. 12.8 Preparar lminas de controles positivo e negativo, de acordo com as especificaes do fabricante.
Nota: O exame microscpico deve ser iniciado to logo a colorao tenha sido finalizada, mas se os corantes no perderem a fluorescncia, pode ser realizado em at 168 horas (7 dias) com as lminas armazenadas ao abrigo da luz.
13. Leitura microscpica

13.1 Examinar cada poo de maneira sistemtica, estabelecendo um padro de leitura, de cima para baixo ou de um lado para outro, garantindo que toda a rea seja avaliada. 13.2 Examinar usando imunofluorescncia (FA), DAPI e microscopia de Contraste por Interferencia Diferencial (DIC).
14. Controles positivo e negativo

14.1 Iniciar o exame pelos controles positivo e negativo, identificando no controle positivo pelo menos trs oocistos de Cryptosporidium e trs cistos de Giardia. Examinar o controle negativo, confirmando a ausncia de cistos e oocistos. 14.2 Registrar os resultados e iniciar a leitura das amostras somente se os controles positivo e negativo apresentarem resultados satisfatrios.
140
14.3 O ocistos de Cryptosporidium 14.3.1 Examinar em FITC em aumento de 200X. So oocistos caractersticos, formas fluorescentes ovides ou esfricas de 4 a 6 m de dimetro. 14.3.2 Ao visualizar os oocistos, ampliar para 400X e mudar o microscpio para filtro bloqueador de UV para DAPI. Os oocistos caractersticos apresentam colorao interna azul brilhante ou presena de at 4 ncleos de colorao azul cu. 14.3.3 Em seguida, examinar em contraste interferencial diferencial e observar a presena de caractersticas morfolgicas internas e externas tpicas de oocistos de Cryptosporidium, em aumento de 1000x. 14.3.4 Um resultado positivo de oocisto Cryptosporidium exibe fluorescncia, tamanho e formas tpicas e positivo para Fluorescncia-FITC, DAPI; Contraste interferencial diferencial-DIC 14.4 C istos de Giardia 14.4.1 Examinar em FITC em aumento de 200X. So cistos caractersticos, formas fluorescentes ovides ou esfricas de 8 a 18 m de dimetro e 5 a 15 m de largura. 14.4.2 Ao visualizar os cistos, ampliar para 400X e mudar o microscpio para filtro bloqueador de UV para DAPI. Os cistos caractersticos apresentam colorao interna azul brilhante ou presena de dois a 4 ncleos de colorao azul cu.
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14.4.3 Em seguida, examinar em contraste interferencial diferencial e observar as caractersticas morfolgicas internas e externas tpicas de cistos de Giardia. 14.4.4 Um resultado positivo para cisto de Giardia fluorescncia tpica, tamanho e forma tpica e no exibe caractersticas atpicas em FA, DAPI ou DIC. 14.5 C lculo dos resultados Caso todo o volume concentrado (final dissociao cida) seja levado ao microscpio
N de (oo) cistos. L-1= N de (oo)cistos identificados
Volume da amostra coletada
Caso seja realizada a leitura em microscpio de uma alquota do volume concentrado obtido ao final da dissociao cida.
Volume do concentrado (uL) -1 N de (oo) cistos identificados x Alquota do concentrado analisada (uL) N de (oo) cistos. L = Volume da amostra coletada
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Bibliografia
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BATALHA, B. H. L.; PARLATORE, A. C. Controle da qualidade da gua para o consumo humano: bases conceituais e operacionais. 1. ed. So Paulo: Cetesb, 1977. BRASIL. Ministrio da Sade. Fundao Nacional de Sade. Manual tcnico de anlise de gua para consumo humano. Braslia: Funasa, 1999. ______. Ministrio da Sade. Portaria n. 518, de 25 de maro de 2004. Dispe sobre normas e padres de potabilidade de gua para consumo humano. Dirio Oficial da Unio, Braslia, DF, 26 mar. 2004. Seo 1, p. 266. COELHO, L. Tcnicas de laboratrio clnico. So Paulo: Atheneu, 1968. GUIA de coleta e preservao de amostras de gua. 1. ed. So Paulo: Cetesb, 1987. LIMPEZA de vidraria. Disponvel em: <http://www.profcupido.ig.com.br/ conserv_e_limpeza_ vidrarias. Htm>. Acesso em: 01 mar. 2004. MAIER, F. J. Fluoruracion del agua potable. 1. ed. Mxico: Limusa-Wiley, 1971. MANUAL de tratamiento de aguas. 4. ed. Mxico: Limusa-Wiley, 1974. OPERAO e manuteno de E.T.A. So Paulo: Cetesb,1973. v. 2. ORGANIZACIN MUNDIAL DE LA SALUD (OMS). Guias para a calidad del agua potable. 2. ed. Ginebra, 1995. v.1. ______. Guias para a calidad Del agua potable. 1. ed. Ginebra, 1998. v.3. ______. Guias para a calidad Del agua potable. 3. ed. Ginebra, 2004. v.1. ORGANIZAO PAN-AMERICANA DA SADE (OPAS). Fascculo gua: a desinfeco da gua. Braslia: OPAS, 1999. SANTOS FILHO, D. F. Tecnologia de tratamento de gua: gua para indstria. 1. ed. Rio de Janeiro: Editora AN, 1976.
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SILVA, M. O. S. A. Anlises fsico-qumicas para controle de estaes de tratamento de esgotos. 1. ed. So Paulo: Cetesb, 1977. STANDARD methods for the examination of water and wastewater. 16th ed. Washington: APHA, 1985. TCNICAS de abastecimento e tratamento de gua. 2. ed. So Paulo: Cetesb, 1977. v.2. TCNICAS de anlises microbiolgicas da gua: membrana filtrante. 1. ed. So Paulo: Cetesb, 1997. UNITED STATES ENVIROMENTAL PROTECTION AGENCY (USEPA). Method 1623: Cryptosprium and Gardia in water by filtration/IMS/FA. Washington, 2005. 68 p.
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Elaborao
Elaborao
Elaborao Marinaldo da Silva Valente/Suest/AM/Funasa Colaboradores Osman de Oliveira Lira/Suest/PE/Funasa Nilce Bazzoli/Suest/MG/Funasa Jlio Csar Reis da Silva/Suest/MA/Funasa Raimundo Rodrigues dos Santos Filho/Suest/MA/Funasa Miguel Crisstomo Leite Brito/Densp/Funasa Coordenao Maria Fernanda Bittencourt/Densp/Funasa Reviso tcnica Felizana M.M. da S. Palhano Girlene Rodrigues Leite Vilma Ramos Feitosa/Densp/Funasa Marinaldo da Silva Valente/Suest-Am/Funasa Reviso da 3 Edio Ana Maria Moreira Dias - Cocag/Desam/Funasa Aristeu de Oliveira Junior - Cocag/Desam/Funasa Antonio Carlo B. Brando - Cocag/Desam/Funasa Demtrius Brito Viana - Consultor OPAS/Funasa Osman de Oliveira Lira - URCQA/Sesam/Suest-PE/Funasa Reviso Ortogrfica e Gramatical da 3 Edio Leila Santos Coesc/Gab/Presi/Funasa/MS Reviso da 4 Edio e atualizao Ana Maria Moreira Dias - Cocag/Desam/Funasa Aristeu de Oliveira Junior - Cocag/Desam/Funasa
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Antonio Carlo B. Brando - Cocag/Desam/Funasa Demtrius Brito Viana - Consultor OPAS/Funasa Osman de Oliveira Lira - URCQA/Sesam/Suest-PE/Funasa Ilustrao Leonardo Ribeiro da Silva Terra /Coesc/Gab / Presi /Funasa Projeto grfico do miolo Glacia Elizabeth de Oliveira - Diedi/Coesc/Gab/Funasa Capa e diagramao Eduardo dos Santos - Diedi/Coesc/Gab/Funasa Reviso Ortogrfica e Gramatical da 1 e 2 Edio Olinda Myrtes Bayma S. Melo Coesc/Gab/Presi/Funasa/ MS Reviso bibliogrfica Raquel Machado Santos - /Coesc/Gab/Presi/Funasa Solange de Oliveira Jacinto - /Coesc/Gab/Presi/Funasa
A publicao deste Manual foi financiada pelo Termo de Cooperao n 38, firmando entre a FUNASA e a OPAS/OMS.
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MISSO
Promover a sade pblica e a incluso social por meio de aes de saneamento e sade ambiental.
VISO DE FUTURO
At 2030, a Funasa, integrante do SUS, ser uma instituio de referncia nacional e internacional nas aes de saneamento e sade ambiental, contribuindo com as metas de universalizao do saneamento no Brasil.
VALORES
tica; Equidade; Transparncia; Eficincia; Eficcia e Efetividade; Valorizao dos servidores; Compromisso socioambiental.
Ministrio da Sade

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Exame bacteriolgico da gua

Origem viral Hepatite A e E Poliomielite Gastroenterites agudas e crnicas

Origem parasitria Disenteria amebiana Gastroenterites

Entamoeba histolytica Girdia lmblia Cryptosporidium

Fonte: OPAS, 1999 Manual Prtico de Anlise de gua

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Bactrias do grupo coliforme

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Material utilizado em bacteriologia

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Preparo do material de vidro

Placas de petri de vidro

c) caldo EC; d) Plate Count Agar.

Preparao dos meios de cultura

Caldo lactosado de concentrao simples

Caldo lactosado verde brilhante bile a 2%

Plate Count Agar

Modo de usar a gua de diluio quando for determinar o NMP de coliformes

Coleta de amostras de gua para exames bacteriolgicos

Procedimentos para coleta em residncias

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Fonte: OMS, 1998 (adaptado)

Outros locais de coleta

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Procedimentos para o exame

1) No produz gs. Ausncia do grupo coliforme

2) Produz gs. Grupo coliforme confirmado.

1) Produo de gs ou produo duvidosa e crescimento forte. Confirmar como em (A)

2) Ausncia de gs. teste negativo para o grupo coliforme

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Expresso dos resultados

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Contagem de bactrias heterotrficas

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Esterilizao do conjunto de filtrao no campo

Coliformes totais e Escherichia coli Teste de presena/ausncia

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Interpretao e expresso dos resultados

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Procedimentos para a esterilizao

Anlises fsico-qumicas da gua

Anlises Titulomtricas Alcalinidade total

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Fluxograma da anlise de CO2

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Onde: A = mL do titulante gasto na amostra. B = mL do titulante gasto no branco. N = normalidade do titulante.

Fluxograma da anlise de cloretos

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Anlises colorimtricas Cloro residual livre

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