CAMPUS ALAGOINHAS-BA

TÉCNICO EM QUÍMICA - TURMA 85674

DISCIPLINA: ANÁLISES MICROBIOLÓGICAS

DOCENTE: JOÃO GABRIEL

DISCENTES: LUANA CLIMACO E PAULO NETO.

IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS TERMOTOLERANTES.

ALAGOINHAS – BA

2023

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 DISCENTES: LUANA CLIMACO E PAULO NETO.

IDENTIFICAÇÃO DE BACTÉRIAS TERMOTOLERANTES.

Trabalho apresentado no curso de técnico em química

no SENAI Alagoinhas – Ba.
ORIENTADOR: JOÃO GABRIEL

ALAGOINHAS – BA

2023

1. INTRODUÇÃO

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 O grupo de bactérias Coliformes é um subgrupo da família
Enterobacteriaceae, que são bactérias gram-negativas em forma de bastonete,
esporogênicos, aeróbicos ou aeróbicos facultativos, abrange mais de vinte espécies
bacterianas, sendo algumas originárias do trato gastrointestinal de animais de
sangue quente, como a Escherichia coli. Outras bactérias do mesmo grupo são
encontradas em ambientes naturais diversos, ou seja, são de origem não intestinal,
como as Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella e Serratia. Estas bactérias podem ser
divididas entre coliformes totais e termotolerantes (também chamados de coliformes
fecais).
No grupo dos coliformes totais estão apenas as enterobactérias, gram-
negativas podendo ser aeróbias ou anaeróbias, não produzem esporos e fermentam
a lactose, essa capacidade de fermentar a lactose, com formação de gás e ácido Á
35-37º C, em meios de cultura, é a base para os métodos tradicionais de detecção
de coliformes totais. Estas bactérias são geralmente encontradas no trato intestinal
de seres humanos e outros animais de sangue quente, são comuns em ambientes
de fabricação de alimentos, podendo se tornar parte da microbiota resistente.
Os coliformes fecais, também chamado de termotolerantes, pelo fato de
incluir três gêneros, Escherichia, Enterobacter e Klebsiella, sendo as cepas de
Enterobacter e Klebsiella de origem não fecal. É um subgrupo dos coliformes totais,
este grupo é restrito às bactérias capazes de fermentar a lactose a 44,5-45,5°C com
produção de gás. A E. coli é a bactéria mais conhecida dentro do grupo dos
coliformes termotolerantes com caracteristica gram negativa, são encontradas em
gado, porcos, gatos e demais animais de sangue quente, como seu habitat é o trato
gastrointestinal, embora também possa ser introduzida nos alimentos por fontes não
fecais. Sendo indicador de contaminação fecal em alimentos “in natura”. Quando
ingerida pode causar gastroenterites assim como desconfortos brandos ou intensos,
dependendo da concentração ingerida no alimento contaminado.
A presença de coliformes totais e/ou termotolerantes em alimentos pode ser
usado para indicar a falta de higiene durante a produção e contaminação pós
processo em alimentos pasteurizados. Isso o torna um indicador muito utilizado para
os manipuladores de alimentos na implementação ou avaliação das boas práticas de
fabricação.

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 2. OBEJETIVO GERAL
Identificar bactérias termotolerantes em sucos industriais.

2.1 OBJETIVO ESPECÍFICOS

 Realizar testes de controle de qualidade com a finalidade de aprimorar

as técnicas de inoculação
 Executar a parte teórica em conjunto com a parte prática da disciplina
de análises microbiológicas, de modo a certificar-se da absorção dos conteúdos
dados em sala de aula
 Aplicar teste presuntivo, confirmatório total e confirmatório específico –
E.coli.
 Realizar técnicas de inoculação em meio de cultura líquido.
 Realizar teste de controle de qualidade.

1. MATERIAIS E METODOLOGIA

3.1 MATERIAIS

09 tubos de ensaios
01 Agitador
09 tubos de Durham
01 Bico de bunsen

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 01 Galeria / estantes
01 Estufa
01 Balança semi- analitica
01 Béquer
01 Espatula
01 Alça de inoculação
7,12 g de Sulfato Lauril Triptose
8,06 g de Caldo verde Brrilhante
02 ampolas de Colillert
03 frascos de vidro com tampas
01 manta aquecedora
Epi’s
Água deionizada (+/- 600mL)
03 amostras de suco de uva industrializado

3.2 METODOLOGIA

Foi realizado no Laboratório do Senai, a preparação do meio de cultura, para

identificar bactérias termotolerantes, através dos testes presuntivos, confirmatório
total e confirmatório específico, descritos nos seguintes itens respectivamente.

3.2.3 Teste presuntivo

Primeiramente houve a higienização e separação dos materiais, a seguir
começou o preparo do meio de cultura Sulfato Lauril Triptose, foram pesados 7,12g
e adicionado 200mL de água deionizada. Depois foi posto sobre a manta
aquecedora com um agitador até que se homogeneizasse. Depois foi transferido
10ml desse meio para 03 tubos de ensaio e identificados como A1, B1 e C1 e
colocados enfileirados na estante.

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 3.2.4 Teste confirmatório total
O teste de confirmação diferencia os tipos de coliformes – ambientais, de
fecais ou termotolerantes. Para realização deste teste, foi utilizado o Brilliant Green
Bile Broth 2 %, conhecido por Caldo Verde Brilhante (anexo), este meio foi usado
para determinar coliformes ambientais. Foi pesado 8,06g de caldo verde brilhante e
adicionado 200mL de água e levado a manta aquecedora com agitador, até
homogeneizar. Depois tomou 10mL desse caldo e transferiu-se para 03 tubos de
ensaios, identificados como A2, B2 e C2.

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 3.2.5 Teste confirmatório específico
Para o caldo Colilert (anexo) e este foi usado para determinar os coliformes
termotolerantes/fecais. Foi preparado adicionando 02 ampolas de Colilert e 200 ml
de água deionizada, levando para manta aquecedora com agitador. Em cada tudo
de ensaio foi adicionado 10 mL do caldo, identificados com A3, B3 E C3 e colocado
na estante com os demais.

Em todos os tubos de ensaio do teste 3.2.3, 3.2.4 e 3.2.5 e foi colocado tubo
de Durham no seu interior, com a boca invertida para baixo, tampou-se os tubos e
virou, com intuito de não formar bolhas no seu interior.

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 Em seguida, utilizou 03 amostras de suco industrial identificadas como A, B e
C, e realizou a inoculação para cada tipo de meio produzido representada a seguir.

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 Foram levados para estufa logo após finalizar a inoculação.

4.0 RESULTADOS E DISCUSSÕES

4.1 Teste presuntivo

Após a devida inoculação das amostras foi observado durante o teste
presuntivo.

IDENTIFICAÇÃO POSITIVO (presença de bolhas)

A1 Sim
B1 Sim
C1 Sim

A presença de bolhas dentro do tubo de Durham tendo o meio de cultura

Lauril Sulfato Triptose, caracteriza a existência de bactérias termotolerantes sendo
assim possível identificar a capacidade ou não de fermentar lactose. Uma ou mais
bolhas dentro do tubo mostra que as bactérias realizaram a fermentação.

4.2 Confirmatório total

IDENTIFICAÇÃO POSITIVO (presença de bolhas)

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 A2
B2
C2

5.0 CONCLUSÃO

Com a observação dos resultados podemos concluir que o resultado da

amostra “1” se mostrou não confiável, por ter apontado positivo no meio de cultura
Caldo Lauril Sulfato o que indicaria a presença de bactérias que fermentam a
lactose, negativo no meio de cultura Caldo Verde Brilhante que indicaria a ausência
de coliformes totais na amostra, e positivo no meio de cultura Colilert que veria
indicar a presença da bactéria Escherichia coli, demonstrando um possível erro do
operador na inoculação.
O resultado da amostra ”2” se apresentou como positivo no meio Caldo Lauril
Sulfato, indica a presença de bactérias que realizam a quebra da lactose, positivo no
meio Caldo Verde Brilhante, que indica a presença de coliformes totais na amostra e
positivo no meio Colilert, o que indica que a amostra está contaminada com a
bactéria Escherichia coli.
Já o resultado da amostra “3” apontou positivo no meio Lauril Sulfato,
negativo no meio Caldo Verde Brilhante, e não foi possível observar o resultado
meio Colilert por causa de um erro durante a viragem do tubo de Duran, gerou uma
bolha antes mesmo do tempo de incubação/fermentação.
Sendo assim nenhuma das amostras de suco analisadas poderiam ser
comercializadas por indicarem a presença de bactérias patogênicas e/ou
apresentarem resultados inconclusivos, se fazendo necessário mais análises para
sua liberação.

6.0 REFERÊNCIAS

CASTRO, Mariana T. de. Coliformes Totais e Coliformes Termotolerantes: qual a

diferença? Disponível em: Coliformes Totais e Coliformes Termotolerantes: qual a
diferença? - Food Safety Brazil. Acesso em: 10 de novembro de 2023.

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O que são coliformes fecais e quais os riscos que conferem à saúde? Disponível em:
O que são coliformes fecais e quais os riscos que conferem à saúde? – Sirius
Biotecnologia Jr (usp.br). Acesso em 11 de novembro de 2023.

fQual a diferença entre coliformes totais e termotolerantes? Disponível em: Qual a

diferença entre coliformes totais e termotolerantes? (kasvi.com.br). Acesso em: 10
de novembro de 2023.

SOUZA, Stefhanie Barreto de; DETERMINAÇÃO DA QUALIDADE

MICROBIOLÓGICA E ANÁLISES FÍSICO-QUÍMICAS DE SUCOS NATURAIS. 2019
31 f. Disponível em determinacaoqualidademicrobiologicasucosnaturais.pdf
(utfpr.edu.br). Acesso em 12 de novembro de 2023.

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