INSTITUTO FEDERAL DE EDUCAÇÃO CIÊNCIA E TECNOLOGIA DA BAHIA

CURSO TÉCNICO EM AGROINDÚSTRIA

ELEN REIS
MARIA
GABRIELA
JULIAN OLIVEIRA
RAISSA DA CONCEIÇÃO

Governador Mangabeira
2023
 RELATÓRIO DE AULA PRÁTICA EM LABORATÓRIO

1. IDENTIFICAÇÃO

Título: Análise microbiológica de coliformes totais e termotolerantes

Discente(s): Elen Reis, Raissa da Conceição, Maria Gabriela, Julian Oliveira

Docente(s): Edilza Nascimento
Unidade curricular: Microbiologia Geral e dos alimentos

Curso: Curso Técnico de Nível Médio em Agroindústria Modalidade

Integrado

2. INTRODUÇÃO

O grupo dos coliformes totais é um subgrupo da familia Enterobacteriaceae. No

grupo dos coliformes totais estão apenas as enterobacterias capazes de fermentar a
lactose com produção de gás, em 24 a 48 horas a 35-37 °C. Nessa definição se
encaixam bactérias originárias do trato gastrintestinal de humanos e outros animais de
sangue quente (Escherichia coli), como também bactérias não entéricas (espécies de
Citrobacter, Enterobacter, Klebsiella e Serratia, dentre outras) (SILVA, 2010).
A capacidade de fermentar a lactose pode ser verificada pela formação de gás e/ou
ácido, nos meios de cultivo contendo lactose. Essas caracteristicas são utilizadas nos
métodos tradicionais de contagem de coliformes totais (SILVA, 2010). O grupo dos
coliformes termotolerantes, comumente chamados de coliformes fecais, é um
subgrupo dos coliformes totais, restrito aos membros capazes de fermentar a lactose
em 24 horas a 44,5-45,5 °C, com produção de gás
 2.1. OBJETIVO

Realizar análise de coliformes totais e termotolerantes em alimentos através de

técnica de NMP.

3. MATERIAIS UTILIZADOS

PRIMEIRA ETAPA:

(25g) maçã

(1) Frasco reagente com 225ml de Água Peptonada 0.1% (H₂Op);

(2) Tubos de ensaio contendo 9ml de (H₂Op);

(9) Tubos de ensaio contendo 10ml de Caldo Lauril Sulfato Triptose (LST) ou caldo
lactosado, com tubos de Durhan invertido

(1) Bico de Busen ou lamparina

(2) pipetas de I mL

SEGUNDA ETAPA

(9) Tubos de ensaio contendo Caldo de E. coli, com tubos de Durhan invertido

(9) Tubo de ensaio com Caldo Verde Brilhante, com tubos de Durhan invertido

TERCEIRA ETAPA

(1) Placa de Petri com Agar Levine Eosina Azul de Metileno (L-EMB);

(1) Tubo de ensaio contendo Agar Padrão para Contagem (PCA)

(1) Tubos de Citrato de Koser ou Ágar Citrato de Simonns

 4. PROCEDIMENTOS

1ª Etapa:

1) Higienizar a bancada com álcool 70%

2) Acender o bico de busen

3) Higienizar as mãos para manusear o alimento

4) Identificar os tubos com Caldo de Lactose (10-¹, 10-², 10-³, em triplicata)

5) Triturar 25g da maçã e pesar na balança analítica

6) Identificar o Erlenmeyer (10-¹)

7) Identificar os tubos de água peptonada (10-¹, 10-², 10-³)

8) Flambar o Erlenmeyer

9) Adicionar a maçã dentro do Erlenmeyer (10-¹) contendo água peptonada

10) Deixar decantar por 10 minutos

11) Retirar 1ml do Erlenmeyer (10-¹) com a pipeta e acrescentar no tubo 10-¹, 10-², 10-³

12) Encubar a 37°C por 48 horas na encubadora

2ª Etapa:

1) Retirar 1ml do Erlenmeyer (10-¹) com a pipeta (2ml)

2) Retirar do erlenmeyer 10-¹ e colocar nos tubos 10-¹ com caldo lactose

3) Colocar no tubo 10-² contendo água peptonada, misturando e higienizando o

mesmo com água destilada e álcool

4)Com a pipeta, retirar 1ml do tubo 10-² com água peptonada, e colocar nos tubos 10-
² com caldo lactose

5) Retirar 1ml da amostra do tubo 10-² e colocar no 10-³

6) Com outra pipeta, retirar 1ml do 10-³ com água peptonada, e colocar nos tubos 10-
³ com caldo lactose

3ª Etapa:

1) Analisar quais tubos deram positivo e negativo através da técnica de NMP para
coliformes totais e termotolerantes

5. RESULTADOS

AMOSTRA ANALISADA: MAÇÃ

AMOSTRA COLIFORMES COLIFORMES

TOTAIS: TERMOTOLERANTES
MAÇÃ 7,4g <3,0g

6. DISCUSSÃO

De acordo com a ANVISA a exigência para que frutas in natura seja considerável
próprio para o consumo, é necessário fazer a analise para coliformes
termotolerantes.
De acordo com a ANVISA o limite para coliformes termotolerantes nesse grupo de
alimentos deve ser 2x10´2 valor mínimo e 2x10´3 valor máximo, sendo assim, a
amostra analisada em laboratório apresentando < 3.0 coliformes termotolerantes por
g de alimentos está em conformidade.
 NM

7. CONCLUSÃO

Concluímos que a prática foi essencial para o entendimento do método do número

mais provável (NMP).

8. REFERÊNCIAS

Página inicial — Agência Nacional de Vigilância Sanitária - Anvisa (www.gov.br)