UNIVERSIDADE FEDERAL DO RECÔNCAVO BAIANO

CURSO DE ZOOTECNIA E ENGENHARIA DE PESCA

LAYANE SENA DOS SANTOS

LUÍSA CORREIA OLIVEIRA

RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA - CONTAGEM TOTAL DE MESÓFILOS EM

PLACA DE PETRI

CRUZ DAS ALMAS 2022

 LAYANE SENA DOS SANTOS

LUÍSA CORREIA OLIVEIRA

RELATÓRIO DA AULA PRÁTICA - CONTAGEM TOTAL DE MESÓFILOS EM

PLACA DE PETRI

Relatório solicitado pela profª

Maria Gardenny Ribeiro Pimenta,
da disciplina Microbiologia Geral -
Prática, do curso de Engenharia de
Pesca e Zootecnia, com caráter
avaliativo.

CRUZ DAS ALMAS 2022

 SUMÁRIO

1  INTRODUÇÃO
—--------------------------------------------------------------------------------- 4
2 -  OBJETIVOS
—------------------------------------------------------------------------------------------------
5
3  -  MATERIAIS E MÉTODOS
—-----------------------------------------------------------------------------6
    3.1 MATERIAIS
—---------------------------------------------------------------------------------------------6
    3.2 MÉTODOS
—----------------------------------------------------------------------------------------------7
4- RESULTADOS E DISCUSSÕES
—----------------------------------------------------------------------8
5- CONCLUSÃO
—----------------------------------------------------------------------------------------------9
7-  REFERÊNCIAS
—------------------------------------------------------------------------------------------- 10
 INTRODUÇÃO
    
Microrganismos mesófilos são microrganismos que possuem
crescimento ideal em temperaturas entre 30 a 35ºC. Basicamente, podemos
dizer que os micro-organismos mesófilos predominam em situações em que há
falta de condições básicas de higiene, por exemplo a falta de refrigeração do
leite. (SANTOS e FONSECA, 2010).
A presença de grandes níveis de bactérias indica, de uma maneira geral,
que a matéria-prima utilizada na produção foi excessivamente contaminada
(SIQUEIRA, 1995). Dessa maneira, altos níveis de bactérias têm efeito
negativo sobre a qualidade do leite, especialmente no que concerne ao sabor,
à vida de prateleira e à segurança alimentar do produto disponibilizado ao
consumidor. As principais fontes de contaminação do leite estão relacionadas
às práticas de ordenha, armazenamento e transporte, visto que o resfriamento,
a presença de resíduos de antimicrobianos ou produtos químicos e a qualidade
microbiológica da água podem influenciar de forma significativa na contagem
bacteriana total (FONSECA e SANTOS, 2000).
A contagem de microrganismos em placas é um método utilizado para
contagem de grupos microbianos em geral, tais como os aeróbios mesófilos,
aeróbios psicrófilos, bolores e leveduras e os clostrídios sulfito redutores. É
utilizado ainda para a contagem de gêneros e espécies específicas, desde que
utilizado um meio seletivo específico para cada gênero, a exemplo de
contagem de Staphilococcus aureus, Bacillus cereus, Vibrio parahaemolyticus
e outros (CARVALHO 2010).
O método de contagem total em placas se baseia na premissa de que
cada colônia microbiana formada é originária de uma célula ou de uma unidade
formadora de colônia presente em uma amostra do alimento. Variando o tipo
de meio de cultura (enriquecido, seletivo, seletivo diferencial) e as condições de
incubação (temperatura e atmosfera) é possível selecionar o grupo, gênero ou
espécie que se deseja contar (CARVALHO 2010).
OBJETIVOS

 Diluir a amostra empregando a técnica de diluição seriada;

 Realizar a inoculação da amostra em placa de Petri utilizando as
técnicas de semeadura em profundidade e superfície.
MATERIAIS
• Ponteiras de 1 mL estéril;
• Placa de Petri estéril;
• Pipeta automática de 1000 mL;
• Lamparina de álcool;
• Chapa aquecedora;
• Agitador de tubos tipo Vortex;
• Caneta para marcar vidraria;
• Recipiente para descarte de ponteiras; • Ágar Triptona de Soja (TS /
TSA) ou Ágar Padrão para Contagem (PC / PCA) (HIMEDIA);
• Placa de Petri com o ágar TS;
• Solução Salina 0,85% (NaCl);
• Amostra.
PROCEDIMENTO

• Diluição da amostra

A obtenção da diluição inicial (1/10), procedeu-se do seguinte modo:

Foi transferido 25ml da amostra para 225ml do diluente de solução salina a

0,85%. As outras diluições necessárias (10−2 , 10−3 , 10−4 e 10−5 ), foram
preparadas a partir da diluição 10−1 , que foi justamente a amostra preparada
anteriormente, transferindo 1ml da diluição inicial para tubos com 9ml de
solução salina a 085%,, feito isso as soluções foram homogeneizadas com o
auxílio do agitador.
Essa diluição foi feita da maior diluição para menor, pois quando feito dessa
maneira não corre o risco de contaminar a amostra seguinte.

• Inoculação por plaqueamento em profundidade

Para isso, foi distribuído 1ml de cada diluição no centro de placas de Petri estéreis
adicionando-se cerca de 15-20ml de ágar fundido e resfriado (44 a 46 °C) na placa de Petri. Em
superfície plana as placas foram homogenizadas com movimentos suaves rotatórios (em forma
de oito), para melhor homogeneização da amostra com o meio de cultura e em seguida
esperou-se solidificar. As placas foram incubadas e invertidas a 36+_1°C por 48 horas.

• Contagem e cálculo dos resultados

• Selecionar as placas correspondentes à diluição com número de colônias

entre 25 e 250 colônias;
• Efetuar a contagem da placa e multiplicar o número de colônias pelo inverso
da diluição correspondente;
• Expressar o resultado em UFC/mL. OBS: Para a contagem em placa, seja
qual for a técnica, o plaqueamento é realizado em triplicata.
RESULTADOS E DISCUSSÕES

CONCLUSÃO

Os resultados microbiológicos obtidos refletem a falta condições básicas de

higiene na ordenha e no processamento do leite, bem como falta de
refrigeração.

REFERÊNCIAS
PROCOP, G. W.; CHURCH, D. L.; HALL, G. S.; JANDA, W. M.; KONEMAN, E.
W.; SCHRECKENBERGER, P. C.; WOODS, G. L. Diagnóstico
Microbiológico: Textos e Atlas. 7 ed., Rio de Janeiro: Guanabara Koogan,
2019. 1872p.
CARVALHO, I. T. Microbiologia básica / Irineide Teixeira de Carvalho. –
Recife: EDUFRPE, 2010. 108 p.
FONSECA, L. F. L; SANTOS, M. V. Qualidade do leite e controle de mastite.
São Paulo: Lemos Editorial, 2000. 175p.
SANTOS, M. V.; FONSECA, L. F. L. Qualidade microbiológica do leite:
métodos de análise e estratégias de controle. Monitoramento da qualidade
do leite, 2010.
SIQUEIRA, R. S. Manual de Microbiologia de Alimentos. Centro Nacional de
Pesquisa de Tecnologia Agroindustrial de Alimentos (Rio de Janeiro).
EMBRAPA-SPI; Rio de Janeiro:EMBRAPA - CTAA, 1995.
VERMELHO, A. B.; PEREIRA, A. F.; COELHO, R. R. R.; SOUTO-PADRÓN, T.
Práticas de Microbiologia. 2 ed., Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2019.
208p.