Universidade Federal do Recôncavo da Bahia

Centro de Ciências Agrárias, Ambientais e Biológicas

Curso de Engenharia de Pesca e Zootecnia

Relatório de Aula Prática Referente ao Preparo de Materiais e

Meios de Cultura para Esterilização.

Cruz das Almas – Ba

Julho de 2018
 ANA CAROLINA DA SILVA NOVAES
JOICE AMPARO FONSECA
PAULO HENRIQUE SOUSA NASCIMENTO
SILAS SOUZA DE JESUS
TACIANE SANTOS DUARTE

Relatório de Aula Prática Referente ao Preparo de Materiais e

Meios de Cultura para Esterilização.

Relatório de aula prática

supervisionado pela docente Maria
Gardenny, realizada no Laboratório
de Microbiologia, pelos discentes do
curso de Engenharia de Pesca e
Zootecnia, da Universidade Federal
do Recôncavo da Bahia CCAAB -
Centro de Ciências Agrárias - Campus
Cruz das Almas.

Cruz das Almas – Ba

Julho de 2018
 1. INTRODUÇÃO

Entende-se por microbiologia o estudo de organismos microscópios,

ou seja, seres que não são possíveis de serem notados a olho nu, portanto
existe a grande necessidade de serem visualizados através de microscópio.
Organismos que apresentam tamanhos de 1nm à 1mm, sendo necessário o
uso de tecnologias especificas.

A microbiologia comumente aplica técnicas de microscopia de luz e

microscopia eletrônica, mecanismos esses que permitem a visualização de
estruturas pequenas, que não são possíveis de serem vistas a olho nu.

O estudo das estruturas e funções das células procariontes e

eucariontes é o principal campo de estudo da microbiologia, além de estudar
formas de cultivo e processos de esterilização.

Os microrganismos necessitam obter nutrientes apropriados do seu

meio ambiente, para ocorrer a proliferação do mesmo. Se desejamos cultivar e
conquistar microrganismos vivos em laboratório, precisamos ofertar meios de
cultura, com nutrientes propícios para uma alta taxa de crescimento. Além de
conceder fatores físico (por exemplo: pH e pressão osmótica) e outros fatores
químicos (como: presença ou ausência de O2). Para uma ótima preparação de
meio de cultura é necessário também fazer processos de esterilização,
evitando assim contaminações com outros microrganismos indesejáveis, pois o
processo de esterilização visa remover microrganismo vivos, ou ao menos
inativar.

Na Universidade Federal do Recôncavo da Bahia foi ofertado no

semestre 2018.2, para os discentes a disciplina curricular de Microbiologia
geral (Disciplina de GCCA025), onde a mesma foi fragmentada em duas partes
sendo elas conhecimento teórico, realizado em sala, e as práticas realizadas
no laboratório de microbiologia.
 Nas aulas práticas os discentes implementam os conhecimentos
adquiridos em sala de aula ministrado pela docente Maria Gardenny, onde a
mesma também supervisiona os procedimentos das práticas.

No dia 07 de maio de 2018, ocorreu a primeira prática tendo como

objetivo principal conhecer práticas de esterilização de materiais, equipamentos
utilizados neste processo, bem como a autoclave, e preparo de meio de
culturas, como pesagem e hidratação do mesmo.
2. MATERIAL E MÉTODO

2.1 MATERIAL

 Água destilada
 Algodão
 Autoclave
 Cloreto de sódio (Nacl)
 Erlenmeyer
 Fita
 Gaze
 Lápis
 Meio de cultura
 Papel Kraft
 Pipetas de 5 e 10 ml
 Placa de Petri
 Tesoura
 Tubo de ensaio

2.2 MÉTODOS

2.2.1 PREPARAÇÃO DO MEIO DE CULTURA

Iniciamos com o cálculo de porcentagem simples com o intuito de encontrar o

valor em gramas do caldo nutriente, para ser utilizado em 50ml de água destilada.
Posteriormente transferimos o caldo nutriente a um pedaço de papel alumínio e com
auxílio de uma espátula sobre uma balança, pesamos o valor encontrado do caldo
nutriente, adicionamos água para hidratar o mesmo, logo após, foi feita a transferência
para um tubo de ensaio que já estava esterilizado. Tampamos com algodão com a
finalidade de esterilizar o meio de cultura por 15 minutos a 121°C.

2.2.2 PREPARAÇÃO DA SOLUÇÃO SALINA A 0,85%

 Inicializamos o processo de preparação da solução salina, constituindo um
cálculo de porcentagem simples a fim de obter o valor do sal (NaCl) a ser diluído em
50ml de água destilada. Seguidamente após a obtenção do resultado, transportamos o
mesmo em um pedaço de papel alumínio e com o amparo de uma espátula sobre uma
balança, pesamos o valor obtido do sal (NaCL), em seguida, transferimos para um
Erlenmeyer, afim de incorporar água destilada para hidratar o reagente. Por seguinte
tamponamos com ajuda de algodão, e enrolamos o mesmo com auxílio do papel Kraft,
com o intuito de levar para a esterilização da solução salina durante 15 minutos a
121°C.

2.2.3 PREPARAÇÃO DA VIDRAÇARIA PARA ESTERILIZAÇÃO:

2.2.3.1 PLACA DE PETRI

Primeiramente fizemos a Separação das placas, limpas e secas,

Embalamos as placas de preferência duas a duas (evitar empilhar um número
grande de placas) para facilitar a esterilização e estocagem, logo após
colocamos as placas no centro do papel e embrulhamos firmemente para evitar
a absorção de umidade, utilizamos a fita adesiva para reforçar o lacre,
esterilizamos o material por 30 minutos a 121 °C

2.2.3.2 TUBOS DE ENSAIOS, BALÕES DE FUNDO CHATO, ERLENMEYER

A priori, selecionamos tubos de ensaios, balões de fundo chato,

erlenmeyer, cortamos um pedaço de gaze, adicionamos na abertura do tubo de
ensaio, colocamos algodão até se obter um tampão firme. No Erlenmeyer ou
qualquer recipiente utilizado para esterilização de meios de cultura,
procedemos da mesma forma, colocando para finalizar a coifa com papel Kraft
ou jornal para proteger o tampão, depois esterilizamos o material por 30
minutos a 121 °C

2.2.3.3 PIPETA GRADUADA

A princípio selecionamos uma pipeta graduada de 10ml, no bocal

tamponamos a mesma com uma rolha feita com um pequeno pedaço de
algodão, por seguida enrolamos a mesma com papel Kraft, e com ajuda de um
pedaço de fita, lacramos o enrolamento, para ser levada a esterilização por 30
minutos a 121°C.

3. RESULTADO E DISCUSSÃO

No dia 07 de maio de 2018, iniciamos uma aula prática no laboratório

de microbiologia, no intuindo de aprendermos a preparar materiais para
esterilização do meio de cultura.
Iniciamos a aula com a esterilização do meio de cultura, a princípio
fizemos um cálculo de porcentagem simples, para obter o valor do caldo
nutriente, ao qual utilizamos para o preparo junto com a água destilada, logo
após colocamos em tubo de ensaios e tampamos com algodão afim de
esterilizar o meio de cultura a 121° a 15 min.
Em seguida fizemos a preparação da solução salina, que usamos os
procedimentos anteriores, com o cálculo de porcentagem simples, para obter a
massa do sal a ser adicionado a 50 ml de agua destilada, transferimos para um
Erlenmeyer para incorporar a agua destilada e hidratar o reagente , logo
depois tampamos com auxílio do algodão e enrolamos o mesmo com auxílio do
papel Kraft, para esterilizar a solução salina em 121º a 15 min.
Para fazermos a esterilização das vidraçarias, pegamos a pipeta
graduada de 10ml, no bocal e tampamos com rolha feitas de algodão, em
seguida enrolamos a mesma com papel Kraft, e com ajuda de um pedaço de
fita, fechamos o enrolamento, para ser levada a esterilização por 30 minutos a
121°C.
Percebemos que, para que crescimento do meio de cultura seja
eficiente, são necessários alguns cuidados durante seu preparo e esterilização.
Isso por que são necessárias condições perfeitas para simular um ambiente
natural para proliferação de microrganismos. Como se trata de um trabalho de
muita precisão, a esterilização de meios de cultura é fundamental dentro de
todo o processo. O principal objetivo é remover totalmente a capacidade
reprodutiva de todos microrganismos indesejáveis para uma determinada
análise, deixando o meio de cultura propício somente para o objeto de estudo.
Através da aula prática analisamos métodos de esterilização em meios
de cultura e utensílios utilizando a autoclave, do mesmo modo como esterilizar
vidrarias em estufa. Com tudo concluímos, que as técnicas de esterilização e
assepsia, são de fundamental importância para a realização de qualquer que
seja o procedimento laboratorial, pois os resultados podem ser alterados ao
menor descuido, podendo causar prejuízos, tais prejuízos podem ser
ocasionados por contaminação, alteração de resultados de exames
laboratoriais e até pesquisas de grande porte, entre outros.
 REFERÊNCIA BIBLIOGRÁFICA

 MAGALHÃES, André; NUNES, Edson; BARROSO, Helena Maria.

Mensuração dos conteúdos acadêmicos da educação superior. Rio de
Janeiro: Observatório Universitário, 2005. Disponível em:
<http://www.observatoriouniversitario.org.br>. Acesso em: maio de 2018.

 BARBOSA, Flávio Henrique Ferreira; BARBOSA, Larissa Paula Jardim

de Lima. Alternativas metodológicas em Microbiologia- Visualizando
atividades práticas. Revista de Biologia e Ciências da Terra. Vol. 10,
núm.2, 2° semestre, 2010. Disponível em:
http://www.redalyc.org/html/500/50016922015/. Acesso em: maio de
2018
 ANEXO

1. APÊNDICE

Fig.01. Transferência do meio de Fig.02. Diluição da solução

cultura para o tubo de ensaio. salina no erlenmeyer

Fig.03. Meio de cultura no tubo de Fig.04. Materiais prontos para

ensaio e solução salina no serem levados à esterilização.
Erlenmeyer
 2. QUESTIONÁRIO

5.1. Qual a importância do correto preparo do material para esterilização?

Para evitar a contaminação com o meio, promover a completa
eliminação ou destruição de todas as formas de microrganismos viáveis
presentes, como vírus, bactérias...

5.2. O que são meios de cultura?

São preparações químicas que tem como principal objetivo servir como
base para multiplicação de microrganismos para análises laboratoriais ou
estudos científicos, e conta com todos os nutrientes que são exigidos para tal
fim.

5.3. Qual o propósito da adição de ágar na formulação dos meios de

cultura?
O ágar é um excelente meio de cultura para o crescimento de vários tipos de
fungos, leveduras e filamentos. Sua consistência gelatinosa permite uma manipulação
fácil e segue dentro do ambiente laboratorial. É utilizado para estabelecimento de
meios seletivos e diferenciados, ele pode ser aplicado em um determinado grupo de
microrganismos impedindo o crescimento de outros no mesmo ambiente e
selecionando um cenário para estudo.

5.4. Por que a esterilização é necessária antes da utilização dos meios de

cultura ou materiais em Microbiologia?
Com o processo de esterilização dos materiais ocorre a eliminação de
vidas microbiológica presente do mesmo. Logo se esterilizamos os materiais e
o meio de cultura, evitamos que ambos tenham contatos com microrganismo
que irá influenciar diretamente no meu trabalho. Pois devido o processo de
esterilização podemos eliminar todos microrganismos vivo ou ao menos torna-
los inativos.