H muitos tipos diferentes de bactrias que esto distribudos em muitos gneros.

Mas
algumas merecem ateno especial: as do grupo dos coliformes.

Escherichia coli. Foto: National Institute of Allergy and Infectious Diseases (NIAID)

Essas bactrias so utilizadas em larga escala nas medies microbiolgicas que testam a
qualidade da gua e de alimentos para que as pessoas os consumam sem riscos maiores.
Ento, considerando a relao diretamente proporcional, quanto maior o ndice de presena
de coliformes, mais a gua ou o alimento est contaminada (o).

Coliformes Fecais e Totais

Existem dois tipos de coliformes: totais e fecais. Os coliformes totais compem os grupos
de bactrias gram-negativas que podem ser aerbicas ou anaerbicas (isto depender do
ambiente e da bactria), no originam esporos e fermentam a lactose, produzindo cido e
gs 35/37C.
J os coliformes fecais so tambm conhecidos como termotolerantes por suportarem uma
temperatura superior 40C, convivem emsimbiose com humanos, bois, gatos, porcos e
outros animais de sangue quente. So excretados em grande quantidade nas fezes e
normalmente no causam doenas (quando esto no trato digestivo). Neste grupo est
presente a bactria gram-negativa Escherichia coli, e ao se ingerir alimentos por ela
contaminados, os resultados desagradveis (como uma gastrenterite, por exemplo) podem
ser brandos ou desastrosos, dependendo do grau de contaminao.

INTRODUO
A classificao dos coliformes apresenta o grupo de coliformes totais que incluem as bactrias
na forma de bastonetes gram-negativos, no esporognicos, aerbios ou aerbios facultativos,
capazes de fermentar a lactose com produo de gs, quando incubados a 35-37C, por 48
horas.
Fazem partes desse grupo predominantemente bactrias pertencentes aos
gneros Escherichia, Enterobacter,Citrobacter e Klebsiella. Destes, apenas a Escherichia
coli tem como hbitat primrio o trato intestinal do homem e animais homeotrmicos. Os
demais - Citrobacter, Enterobacter e Klebsiella -, alm de serem encontrados nas fezes,

tambm esto presentes em outros ambientes como na vegetao e no solo, onde persistem
por tempo superior ao de bactrias patognicas de origem intestinal
como Samonella e Shigella.
Coliformes fecais so um sub-grupo de bactrias coliformes totais. A presena de coliformes
fecais em uma amostra de gua potvel, muitas vezes indica a contaminao fecal recente. O
que indica que h um risco maior de haver patgenos presentes do que apenas as bactrias
coliformes totais serem detectadas.
As bactrias pertencentes a este grupo correspondem aos coliformes totais que apresentam a
capacidade de continuar fermentando lactose com produo de gs, quando incubadas a
temperaturas de 44-45C. Os critrios microbiolgicos que envolvem E.coli so teis quando
desejvel determinar se houve contaminao fecal. E. coli a mais conhecida, sendo seu
habitat o trato gastrintestinal e ela a indicadora de contaminao fecal, em alimentos
processados.
Os grupos dos coliformes totais e fecais so os indicadores mais utilizados para avaliar a
qualidade microbiolgica da gua. Estes indicadores so tambm usados para avaliar a
qualidade de guas superficiais, guas balnerio, guas para rega e guas residuais. Os
coliformes so membros da famlia Enterobacteriaceae.
Conforme o artigo Avaliao microbiolgica das guas dos bebedouros do Campus I da
Faculdade de Medicina do Tringulo Mineiro, em relao presena de coliformes totais e
fecais, no Brasil, as normas so definidas pela portaria 1469 de 29/12/2000 (2/01/2001)
Ministrio da Sade, captulo IV Padro de potabilidade. Estas definem que gua para
consumo humano deve ser livre de Escherichia coli ou coliformes termotolerantes com
ausncia em 100 mL ou positividade de at 5% para coliformes totais.
de grande importncia a presena de coliformes nos alimentos para a indicao de
contaminao durante o processo de fabricao ou mesmo ps-processamento. Os microorganismos indicadores so grupos que, quando presentes em um alimento, podem indicar a
ocorrncia de contaminao fecal, sobre a provvel presena de patgenos ou sobre a
deteriorao potencial de um alimento, alm de poder indicar condies sanitrias inadequadas
durante o processamento, produo ou armazenamento.
A presena de coliformes totais no alimento no indica, necessariamente, contaminao fecal
recente ou ocorrncia de enteropatgenos.
A maioria dos coliformes so encontrados no meio ambiente. Essas bactrias possuem limitada
relevncia higinica. Devido ao fato de os coliformes serem destrudos com certa facilidade
pelo calor, sua contagem pode ser til em testes de contaminaes ps-processamento.
MATERIAIS E MTODOS
MATERIAS
*Bico de Bunsen;

 um dispositivos usado para efetuar aquecimento de solues em relatrios.

*Autoclave
um aparelho utilizado para esterilizar artigos atravs do calor mido sob presso.
*Stomaker;
um equipamento usado em laboratrios para fazer a homogeneizao do saco de Stomaker.
O saco de Stomaker utilizado para colocar a amostra, e fazer a sua pesagem, antes de fazer
as suas analises.
*Erlenmeyer;
um frasco em balo, usado como recipiente em laboratrio, feito de material de vidro,
plstico, ideal para armazenar e misturar produtos e solues, cultivo de organismos e
tecidos e tambm usado em titulaes.
*Pipetas;
um instrumento de medio e transferncia rigorosa de volumes lquidos.
*Duran;
*Becker;
*Tubos de Ensaio;
um recipiente usado para efetuar reaes qumicas de pequena escala com pequenas
quantidades de reagentes de cada vez.
*Ala de Platina;
Usada para captar elementos da colnia e coloca-los em novo meio.
*Meio de Cultura Escherichia Coli;
recomendado para contagem de coliformes fecais. Cuidado especial deve ser dado ao
inculo de amostras maiores que 1ml. Por exemplo, inculo de 10ml deve ser realizado em
10ml do meio com sua formulao dobrada.
*Meio de Cultura Verde Brilhante;
O caldo Bile Verde Brilhante 2% um meio seletivo para coliformes totais recomendado para
confirmao de testes confirmativos para organismos coliformes em analises bacteriologicas de
agua, aguas residuos, alimentos, leites e laticnios.

O verde brilhante e a bile inibem o desenvolvimento de outros organismos no coliformes,

assim como: Clostridium perfringens.
*gua Peptonada;
Na preparao de diluies padronizadas de micro-organismos, transferncia de entre meios,
manuteno por tempos curtos exige-se a utilizao de um diluente inerte, com pH e presso
osmtica estveis, livre de carboidratos que favorecem o crescimento bacteriano, o que leva ao
acumulo de cidos e outros excretas txicos. A gua peptonada 0,1% preparada com a soluo
tamponada de Sorensen.
*LST;
Caldo Lauril Triptose, recomendado pela APHA para deteco presuntiva de coliformes na
gua, efluentes e esgoto pelo teste MPN e para deteco de coliformes em alimentos.
MTODOS
ANLISE DE COLIFORMES FECAIS E COLIFORMES TOTAIS EM ALIMENTOS
Primeiramente pesou-se 25mL de iogurte de morango, com auxilio de um pipeta de 10ml;
misturou-se na amostra 225ml de gua peptonada 0,1% ( j preparada dentro de um
Erlenmeyer ).
Homogeneizou-se o recipiente por aproximadamente 1 minuto, a partir da soluo da amostra
juntamente com a gua peptonada, fez-se as diluies.

Imagem 01. Diluio seriada

Da amostra (1:10) retirou-se 1ml atravs da pipeta, sendo adicionada ao tubo de ensaio, que
continha 9ml de gua peptonada, fazendo a diluio 2 (1:100).

Do tubo de ensaio com (1:100), foi retirado novamente 1ml, fazendo a diluio 3 (1:1000), em
outro tubo de ensaio, tambm contendo 9ml de gua peptonada.
Se pega as trs diluies (1:10), (1:100) e (1:1000) e inoculamos distribuindo 1ml de cada uma
das 3 diluies, para cada 3 tubos de ensaio, sendo que, em cada 1 desses 3 tubos de ensaio,
continha 10ml de LST em concentrao simples.
Aps feitas as inoculaes, incubamos em estufa a 35C, por 24 a 48 horas, sendo neste caso,
24 horas, o restante da amostra, descartado com devido. Se durante esse perodo de
inoculao, as amostras derem negativo para a incidncia de micro-organismos, deve-se fazer
a reincubao das mesmas.
Passada s 24 horas observou-se que todas as inoculaes; exeto um dos tubos de ensaio de
diluio 10-; deram positivas, ou seja, nos outros tubos de ensaio restantes, no total 8, houve a
formao de gs, detectados atravs de bolhas, que so percebidas devido o auxilio do tubo de
Durham, presentes nos tubos.

Imagem 02 Resultados obsevados com auxilio do tubo de Durham. Observa-se a formao

de gs.

As inoculaes das amostras que deram positivas foram transferidas atravs de aladas, para
meios de cultura de Verde Brilhante (V.B) (contagem de coliformes totais), e aps
para Escherichia coli (E.C) (contagem de coliformes fecais).

Imagem 03 Diluies das amostras no meio LST

Havia 1 tubo de ensaio de Escherichia coli, e 1 tubo de ensaio de Verde Brilhante para cada
tubo de LST que deram positivas, como 8 das 9 inoculaes deram positivas, usou-se 8 tubos
de ensaio com V.B e 8 tubos com E.C.
Abriu-se o tubo com a inoculao do alimento (10-), pegou-se uma alada, atravs da ala
descartvel, posteriormente inoculada no meio de cultura V.B e da mesma forma, uma alada
para o meio de cultura E.C; assim feitas tambm com as demais diluies 10-. O mesmo
procedimento foi seguido para as diluies de 10- e 10-.

Imagem 04 Teste confirmativo

Feita a inoculao, tanto para V.B quanto para E.C, incubou-se na estufa o V.B a 35C, de
24/48 horas, e em banho Maria o E.C a 44, 5C por 24/48 horas, aps as 24/48 horas, foram
feitas as contagens dos micro-organismos, atravs das tabelas representadas nos resultados e
discusses.
ANLISE DE COLIFORMES FECAIS E COLIFORMES TOTAIS EM GUA
Tem-se uma amostra de gua, essa amostra deve ser homogeneizada. Nossa amostra foi
coletada diretamente da fonte, em uma propriedade rural, em um poo caxambu.
Fez-se as diluies de 10ml da amostra (10-0), para 5 tubos de ensaio (10-, 10-, 10-, 10-4,
10-5), contendo 9ml de LST em concentrao dupla em cada tubo de ensaio.
Aps feitas as diluies incubou-se em estufa por 35C, em torno de 24/48 horas. Passou-se o
tempo de incubao e verificou-se que todos os 5 tubos de ensaio com a amostra,
apresentaram turvao e presena de gs, isso devido a presena do tubo de Durham.
As inoculaes das amostras que deram positivas foram transferidas atravs de aladas, para
meios de cultura de Verde Brilhante (V.B) (contagem de coliformes totais), e aps
para Escherichia coli (E.C) (contagem de coliformes fecais).
Havia 1 tubo de ensaio de Escherichia coli, e 1 tubo de ensaio de Verde Brilhante para cada
tubo de LST em concentrao dupla que deram positivas, como as 5 inoculaes deram
positivas, usou-se 5 tubos de ensaio com V.B e 5 tubos com E.C.
Abriu-se o tubo com a inoculao do alimento (10-), pegou-se uma alada, atravs da ala
descartvel, posteriormente inoculada no meio de cultura V.B e da mesma forma, uma alada
para o meio de cultura E.C; assim feitas tambm com as demais diluies 10-. O mesmo
procedimento foi seguido para as diluies de 10- , 10-, 10-4 e 10-5.
Feita a inoculao, tanto para V.B quanto para E.C, incubou-se na estufa o V.B a 35C, de
24/48 horas, e em banho Maria o E.C a 44, 5C por 24/48 horas, aps as 24/48 horas, foram
feitas as contagens dos micro-organismos, atravs das tabelas representadas nos resultados e
discusses.
RESULTADOS E DISCUSSO
Os resultados referentes contagem de coliformes fecais e totais no alimento, no caso, no
iogurte Daninha, deram negativos, ou seja, no houve crescimento de nenhuma das duas
formas de contagem, concluindo-se que o iogurte no possui coliformes fecais, nem totais.
Na contagem feita para a amostra de gua, houve a presena de coliformes totais, para todos
os tubos de ensaio, feitos atravs do meio de cultura Verde Brilhante, e tambm houve

presena de coliformes fecais, para todos os tubos de ensaio, feitos atravs do meio de
cultura Escherichia coli.
De acordo com a tabela de Nmeros Mais Provvel (NMP) e intervalo de confiana a nvel de
95% de probabilidade, para diversas combinaes de tubos positivos e negativos na inoculao
de 5 pores de 10ml da amostra por tubo:
Numero de tubos positivos

NMP/100ml

Mnimo

Mximo

>16

8,0

infinito

Portanto, em 5 tubos de ensaio positivos o NMP ( Nmero Mais Provvel) de contaminao por
coliformes fecais e coliformes totais na gua em inoculao de 10ml de amostra por tubo com
intervalo de confiana a nvel de 95% de probabilidade maior que 16,0; onde o mnimo de
8,0 e o mximo de infinito, ou seja, incontvel.
Portanto, a amostra de gua imprpria para consumo, pois apresenta nmeros significativos
de contaminao, tanto por coliformes fecais, quanto por coliformes totais.
CONCLUSO
Aps as analises feitas, conclui-se que na amostra de iogurte no teve presena de coliformes
totais e nem de coliformes fecais, os resultados foram esperados, pois esse produto
submetido a procedimentos rigorosos de controle de qualidade e de processos de
pasteurizao em altas temperaturas.
J na amostra de gua, houve presena de coliformes totais como de coliformes fecais.
Considerando que a amostra no era tratada, e sim, foi coletada diretamente da fonte isso
pode ter influenciado na proliferao de determinados micro-organismos. Conclui-se que essa
gua esta fora dos padres especificados pelas normas, pois o numero mais provvel de
contaminao por micro organismo para este experimento, superou os estabelecidos,
desobedecendo aos critrios especificados pelo regulamento.
REFERNCIAS BIBLIOGRAFICAS
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UTFPR

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Acessado em <www.ebah.com.br>, acesso em 09 de maio de 2012.