Sumário

INTRODUÇÃO..........................................................................................................................2
CAPITULO I..............................................................................................................................3
Conceitos:.................................................................................................................................3
Taxonomia..............................................................................................................................4
Caracteristicas..........................................................................................................................5
Forma.......................................................................................................................................5
Habitat.....................................................................................................................................5
Fermento lactose.....................................................................................................................6
Coliformes totais......................................................................................................................6
Coliformes termotolerantes ou fecais......................................................................................6
Gêneros que compõem bactérias coliformes...........................................................................7
Escherichia...........................................................................................................................7
Enterobacter........................................................................................................................7
Klebsiella..............................................................................................................................8
Citrobacter...........................................................................................................................9
Doenças causadas................................................................................................................9
-Infecção urinária.....................................................................................................................9
Diagnóstico.............................................................................................................................10
CARACTERÍSTICAS, TIPOS, GÊNEROS, DOENÇAS.....................................................................10
Infecções entéricas.............................................................................................................10
Sintomas.............................................................................................................................10
Diagnóstico.........................................................................................................................11
Tratamento........................................................................................................................11
Pneumonia.........................................................................................................................11
Coliformes totais Método da membrana filtrante (MF) Material necessário........................12
Coliformes termotolerantes...................................................................................................14
Preparo do meio de cultura....................................................................................................14
Coliformes totais e Escherichia coli........................................................................................15
Material necessário................................................................................................................16
Esterilização...........................................................................................................................16
CONCLUSÃO..........................................................................................................................17
REFERÊNCIAS.......................................................................................................................19
INTRODUÇÃO
Existem dois tipos de coliformes: totais e fecais. Os coliformes totais compõem
os grupos de bactérias gram-negativas que podem ser aeróbicas ou anaeróbicas (isto
dependerá do ambiente e da bactéria), não originam esporos e fermentam a lactose,
produzindo ácido e gás à 35/37°C.
Já os coliformes fecais são também conhecidos como “termotolerantes” por
suportarem uma temperatura superior à 40°C, convivem em simbiose com humanos,
bois, gatos, porcos e outros animais de sangue quente. São excretados em grande
quantidade nas fezes e normalmente não causam doenças (quando estão no trato
digestivo). Neste grupo está presente a bactéria gram-negativa Escherichia coli, e ao se
ingerir alimentos por ela contaminados, os resultados desagradáveis (como uma
gastrenterite, por exemplo) podem ser brandos ou desastrosos, dependendo do grau de
contaminação.
Há muitos tipos diferentes de bactérias que estão distribuídos em muitos
gêneros. Mas algumas merecem atenção especial: as do grupo dos coliformes. Essas
bactérias são utilizadas em larga escala nas medições microbiológicas que testam a
qualidade da água e de alimentos para que as pessoas os consumam sem riscos maiores.
Então, considerando a relação diretamente proporcional, quanto maior o índice de
presença de coliformes, mais a água ou o alimento está contaminada (o).
CAPITULO I
Conceitos:
Coliformes totais (bactérias do grupo coliforme) - bacilos gram-negativos,
aeróbios ou anaeróbios facultativos, não formadores de esporos, oxidase-negativos,
capazes de desenvolver na presença de sais biliares ou agentes tensoativos que
fermentam a lactose com produção de ácido, gás e aldeído a 35,0 ± 0,5º C em 24-48
horas, e que podem apresentar atividade da enzima ß - galactosidase.
A maioria das bactérias do grupo coliforme pertence aos gêneros Escherichia
Citrobacter, Klebsiella e Enterobacter, embora vários outros gêneros e espécies
pertençam ao grupo.
Coliformes termotolerantes - subgrupo das bactérias do grupo coliforme que
fermentam a lactose a 44,5 ± 0,2oC em 24 horas; tendo como principal representante a
Escherichia coli, de origem exclusivamente fecal.
Escherichia coli - bactéria do grupo coliforme que fermenta a lactose e manitol,
com produção de ácido e gás a 44,5 ± 0,2oC em 24 horas, produz indol a partir do
triptofano, oxidase negativa, não hidroliza a ureia e apresenta atividade das enzimas ß
galactosidase e ß glucoronidase, sendo considerado o mais específico indicador de
contaminação fecal recente e de eventual presença de organismos patogênicos.
A origem fecal da E. coli é inquestionável e sua natureza ubíqua pouco provável,
o que valida seu papel mais preciso de organismo indicador de contaminação tanto em
águas naturais quanto tratadas.
A Contagem Padrão de Bactérias é muito importante durante o processo de
tratamento da água, visto que permite avaliar a eficiência das várias etapas do
tratamento.
É importante, também, conhecer a densidade de bactérias, tendo em vista que
um aumento considerável da população bacteriana pode comprometer a detecção de
organismos coliformes. Embora a maioria dessas bactérias não seja patogênica, pode
representar riscos à saúde, como também deteriorar a qualidade da água, provocando
odores e sabores desagradáveis
Os coliformes constituem um grupo de bactérias que um número de
características agrupadas. Todos pertencem à família Enterobacteriaceae e geralmente
fazem parte da flora bacteriana normal do trato digestivo de alguns animais.
Ele deve seu nome ao membro mais conhecido desse grupo, a bactéria
Escherichia coli . No entanto, as bactérias coliformes agrupam quatro gêneros
bacterianos: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella e Citrobacter.
Escherichia coli, a bactéria coliforme mais conhecida. Do ponto de vista
ecológico, essas bactérias são importantes porque constituem um elemento indicador
dos níveis de poluição dos corpos d’água. A presença dessas bactérias indica que a água
está contaminada com matéria fecal. Além disso, alguns são patógenos importantes para
o homem.

Taxonomia
A classificação taxonômica das bactérias coliformes é a seguinte:
 Domínio: Bactérias
 Reino: Monera
 Borda: Proteobactérias
 Classe: Gammaproteobacteria
 Ordem: Enterobacteriana
 Família: Enterobacteriaceae.
 Gêneros: Escherichia, Enterobacter, Citrobacter, Kleibsella

Caracteristicas
Embora as bactérias coliformes sejam formadas por vários gêneros, elas têm
certas características que compartilham.
Forma
Este grupo de bactérias é caracterizado por uma bengala, razão pela qual são
conhecidas como bacilos. Eles são alongados, medem aproximadamente entre 3 e 6
mícrons e alguns têm bordas arredondadas, enquanto outros têm curvas.
Habitat
Essas bactérias estão espalhadas por todo o mundo, principalmente nos solos.
Alguns crescem com a decomposição da matéria orgânica.
Da mesma forma, eles são parte integrante da flora bacteriana do intestino de
alguns animais de sangue quente, como os humanos.
Eles são geram negativos.As bactérias coliformes são gram-negativas. Isso
significa que, quando submetidos ao processo de coloração de Gram, não adquirem a
coloração violeta típica, mas o fazem em um tom fúcsia.
Isto é devido à configuração de sua parede celular, que é composta de
peptidoglicano e é muito fina. Ser magro não é capaz de reter partículas de corante
grama.
Anaeróbios aeróbicos ou facultativos
Um organismo aeróbico é aquele que deve necessariamente estar em um
ambiente rico em oxigênio para se desenvolver. Da mesma forma, os anaeróbios
facultativos podem se desenvolver em ambientes onde há disponibilidade de oxigênio,
ou então, falta dele. Algumas bactérias coliformes são aeróbicas estritas, enquanto
outras são anaeróbias facultativas.
Eles são oxidase negativos
 As bactérias coliformes não têm capacidade para sintetizar nenhuma das enzimas
do grupo citocromo c oxidases. Isso significa que eles não podem usar oxigênio como
aceitador na cadeia de transporte de elétrons.

Eles não são esporogênicos

As bactérias gram-negativas, que incluem coliformes, são caracterizadas por não
produzir esporos. Dessa forma, eles não possuem esse mecanismo de proteção quando
as condições ambientais se tornam hostis.
Fermento lactose
Uma das características mais distintivas das bactérias coliformes é que elas têm a
capacidade de fermentar lactose, gerando gás no processo dentro de 48 horas a
temperaturas médias de 37 ° C. No entanto, há outro grupo de bactérias dentro dos
coliformes, que podem executar o processo em temperaturas muito mais altas entre 42 e
45 ° C.
É por isso que os especialistas decidiram classificar os organismos coliformes
em dois grandes grupos: total e termotolerante.
Coliformes totais
O grupo de bactérias coliformes totais é composto por uma grande variedade de
bactérias que têm forma bacilar e são gram-negativas, além de serem anaeróbios
facultativos, o que significa que elas podem se desenvolver tanto na presença quanto na
ausência de oxigênio.
Os coliformes totais cobrem todas as bactérias coliformes, nas quais existem
gêneros que podem ser patogênicos para os seres humanos, bem como outros que são
totalmente inofensivos.
Essas bactérias são bastante úteis como indicadores de níveis de poluição ou
limpeza da água. Levando em conta que muitas bactérias coliformes proliferam e se
desenvolvem na matéria fecal, elas constituem um excelente indicador da contaminação
da água pela matéria fecal. Quanto mais coliformes na água, mais intensa e intensa sua
contaminação.
Coliformes termotolerantes ou fecais
f) abrir imediatamente a válvula de escape de vapor;
g) quando começar a sair vapor por essa válvula, esperar
três minutos e fechá-la;
h) nesse instante, o ponteiro do manômetro começará a
subir;
i) quando o ponteiro atingir a marca de 1Kg/cm² de pressão, a temperatura
deverá estar em 121o
 C. Deixar nesta
posição durante 20 minutos;
j) se a pressão continuar subindo, coloque a chave seletora
de temperatura da autoclave, na posição “média“ e fique observando;
k) depois de 20 minutos, o material já estará esterilizado;
Observação: Normalmente as autoclaves possuem uma chave
seletora de temperatura que indica três posições
“Mínima, Média e Máxima”, justamente para manter a pressão e temperatura
dentro da faixa utilizada. Serve, também, para ligar e desligar o aparelho.
Atualmente existem autoclaves microprocessadas que realizam as etapas, ou
seja, o ciclo de esterilização e descontaminação automaticamente, após programação do
usuário.
l) desligar o aparelho e esperar que o ponteiro do manômetro atinja a posição
“0”. Esse procedimento poderá ser acelerado abrindo-se lentamente a válvula de escape
de vapor; Atenção: Não abrir essa válvula de uma vez!
m) quando o ponteiro do manômetro atingir a posição “0” e não estiver mais
saindo vapor pela válvula, abrir a tampa do aparelho e retirar o material.
Nota: Existem vários modelos de autoclaves no mercado. É importante seguir
sempre as instruções do fabricante Devido à sua origem fecal conhecida, as bactérias
coliformes termotolerantes, especialmente Escherichia coli, são um indicador muito
eficaz e inequívoco da contaminação dos corpos d’água por matéria fecal.
Gêneros que compõem bactérias coliformes
O grupo de bactérias coliformes consiste em um total de quatro gêneros
amplamente conhecidos: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella e Citrobacter .
Agora, embora esses quatro gêneros tenham características semelhantes, eles
também têm características distintas que diferem entre si.

Escherichia

Este é um gênero de bactérias bem conhecidas e estudadas, graças ao seu

potencial patogênico. São bactérias que têm a forma de um bacilo com bordas
arredondadas. Eles medem aproximadamente entre 0,5 e 3 mícrons e fazem parte da
flora intestinal de alguns animais, habitando-os como lanchonete.
Isso é verdade para grande parte das espécies que compõem esse gênero. No
entanto, existem espécies consideradas patógenas, sendo a bactéria Escherichia coli a
mais representativa desse grupo.
As patologias causadoras das bactérias do gênero Escherichia concentram-se
principalmente no nível digestivo, como as síndromes gastrointestinais, que têm como
principais sintomas diarréia e cólica. Da mesma forma, essas bactérias podem gerar
distúrbios no nível do trato geniturinário.

Enterobacter

O gênero Enterobacter é muito conhecido no campo médico, pois é a causa de

um grande número de infecções oportunistas. São encontrados principalmente em solos
(alguns são decompositores de matéria orgânica morta), em água e em alguns laticínios.
Uma de suas características mais marcantes é que, do ponto de vista nutricional,
elas são muito pouco exigentes.
Embora este gênero abranja um grande número de espécies, as mais conhecidas
e consideradas mais importantes são: Enetrobacter cloacae, Enterobacter sakozaki e
Enterobacter aerogenes. Estes são os que geralmente estão associados a processos
patológicos nos quais são os agentes causadores.

Klebsiella

As bactérias pertencentes a esse gênero são bacilares, grossas e curtas, com

bordas arqueadas. Da mesma forma, eles não apresentam nenhum tipo de flagelo ou
apêndice que os ajude na locomoção, de modo que ainda são bactérias. Eles tendem a
estar localizados em pares ou cadeias muito curtas.
Entre suas características, pode-se mencionar que suas células estão rodeadas
por uma cápsula altamente resistente, composta por polissacarídeos. Essa cápsula é um
dos seus elementos distintos.
 Essas bactérias são encontradas principalmente em habitats aquáticos e tendem a
se reproduzir muito rapidamente quando os nutrientes necessários estão disponíveis.
Amostra de Klebsiella vista ao microscópio eletrônico. Dentro deste gênero,
existem aproximadamente 13 espécies, no entanto, as mais importantes do ponto de
vista da saúde e da saúde são: Klebsiela pneumoniae, Klebsiella ozaenae, Klebsiella
oxytoca e Klebsiella rhinoscleromatis .
Estes são considerados patógenos e são responsáveis por patologias como
infecções do trato urinário, infecções do trato digestivo, trato respiratório superior e
trato respiratório em geral.

Citrobacter

Este é um dos gêneros de bactérias coliformes que causa uma grande variedade
de patologias em seres humanos. Entre essas patologias podem ser citados abscessos
cerebrais e infecções do trato urinário.
São bactérias móveis, com a forma de um bacilo e um tamanho médio entre 2,5
e 6 mícrons de comprimento. Compartilhe com o restante das bactérias coliformes
certas características como catalase positiva, reduza os nitratos em nitritos e são gram-
negativos. Também é indol positivo e pode fermentar glicose.
Algumas de suas espécies são patogênicas, sendo o Citrobacter freundii o mais
conhecido e estudado .

Doenças causadas
 Os quatro gêneros que compõem o grupo de bactérias coliformes são
responsáveis por várias patologias em seres humanos. Às vezes, são infecções
oportunistas, geradas pela imunossupressão do indivíduo.
-Infecção urinária
É a infecção mais frequente causada por bactérias coliformes. Considerando que
essas bactérias são habitantes regulares do trato digestivo, é comum que elas se
espalhem do ânus para a uretra. Isso ocorre com mais frequência nas mulheres, pois a
distância entre o ânus e o orifício uretral é menor que nos homens.
Sintomas
Pessoas que têm uma infecção urinária têm os seguintes sintomas:
 Pressão na pelve
 Aumento na frequência urinária.
 Desconforto na parte inferior do abdômen.
 Sensação de esvaziamento incompleto da bexiga.
 Queima ao urinar
 Sangue na urina (em alguns casos)
Agora, se esses sintomas não forem tratados a tempo, a infecção pode se espalhar do
trato urinário inferior para os rins. Se isso ocorrer, os seguintes sinais e sintomas
ocorrerão:
Náusea e vômito Febre alta Dor ao nível dos rins e nas costas.
Calafrios
É importante abordar esses sintomas assim que eles ocorrem, caso contrário, pode levar
a condições clínicas mais graves, como insuficiência renal.
Diagnóstico
Esses tipos de patologias podem ser diagnosticados através de vários testes:
Teste de urina de rotina: nesse caso, o especialista faz um estudo completo da
urina, no qual ele pode observar alguma indicação de infecção urinária, como, por
exemplo, vestígios de sangue, presença de leucócitos e até células bacterianas.
Estudos de imagem: os métodos mais utilizados são a ultrassonografia renal e
pélvica e a tomografia. Através desses procedimentos médicos não invasivos, é possível
visualizar órgãos como rim, ureteres, uretra e bexiga. Dessa forma, pode-se determinar
se há alguma anomalia estrutural que possa ser o resultado de uma infecção.
Urocultura: é o teste mais bem sucedido para diagnosticar uma infecção urinária
devido a algumas bactérias coliformes. Nesse sentido, o que se faz é que, a partir de
uma amostra de urina, é realizada uma cultura em laboratório, utilizando os meios de
cultura mais indicados. Se alguma das bactérias coliformes for a causa da infecção, elas
crescerão na cultura preparada.
CARACTERÍSTICAS, TIPOS, GÊNEROS, DOENÇAS
A cultura da bactéria é o teste diagnóstico definitivo tratamento tendo em conta que esta
infecção é causada por bactérias, a terapia mais utilizada é a antibióticos. Entre os
antibióticos mais utilizados para solucionar esta infecção, podemos citar:
Ceftriaxona
Nitrofurantoína
Sulfametoxazol
Fofomicina
É importante cumprir o tempo de tratamento. No caso de infecções recorrentes, o
médico decidirá o esquema de tratamento mais apropriado para cada caso específico.

Infecções entéricas

São infecções que se desenvolvem no nível do trato gastrointestinal. É comum que as

bactérias coliformes sejam responsáveis por esses tipos de infecções, uma vez que elas
normalmente fazem parte da flora bacteriana do trato digestivo.

Sintomas

Os sintomas mais comuns para infecções desse tipo são:

 Deposições frequentes, de consistência pastosa a líquida.
 Dor abdominal
 Fezes com sangue e / ou muco
 Vômito
 Febre
 Dor de cabeça
 Mal estar, incomodo geral

Diagnóstico

É importante que, quando você tiver uma infecção intestinal que envolva fezes
aquosas, seja realizado um teste de fezes.
No exame das fezes, o especialista estudará alguns parâmetros, como a presença de
sangue ou muco oculto, que são evidências inequívocas de uma infecção.
Da mesma forma, é possível que seja realizada uma co-cultura na qual uma
cultura seja realizada com uma amostra de fezes para verificar se há crescimento e
desenvolvimento de bactérias. No caso de haver alguma bactéria coliforme, ela
começará a se reproduzir, formando colônias e permitindo sua identificação.

Tratamento
 Se os sintomas forem leves, o mais comum é que o médico recomende que o
paciente aumente a ingestão de líquidos para restaurar os que perdeu durante
movimentos frequentes do intestino.
Além disso, é possível que prescreva algum tipo de antibiótico para erradicar a
bactéria que causa a patologia. No entanto, conforme apropriado, o médico decidirá
quem é o padrão de tratamento a seguir de acordo com o paciente e de acordo com a
gravidade do caso.

Pneumonia

Esta é uma infecção que afeta o tecido pulmonar. Algumas bactérias do gênero
Klebsiella são agentes causadores conhecidos de pneumonia. Se não for tratado a
tempo, pode ser fatal.
Sintomas
Entre os sintomas mais comuns de pneumonia estão:
 Tosse com catarro, que pode ser purulento ou com sangue.
 Febre alta
 Mal-estar e deterioração geral
 Dor no peito que pode piorar com os movimentos respiratórios.
 Náusea e vômito
 Aumento da frequência cardíaca e diminuição da pressão arterial.

Diagnóstico
Existem vários métodos de diagnóstico dessa patologia. Entre os mais bem-
sucedidos estão os exames de imagem (radiografia ou tomografia) e cultura de escarro.
Nos estudos de imagem, o que se busca é determinar se, no nível anatômico e
estrutural, existe alguma variação no arranjo normal dos pulmões que possa ser causada
por pneumonia.
No caso da cultura de escarro, é feita uma amostra da expectoração ao tossir e
uma cultura bacteriana é realizada. Aqui, através de diferentes métodos de identificação,
busca-se determinar exatamente qual é o microorganismo que causa a patologia. Este
talvez seja o método diagnóstico mais bem-sucedido, pois sem dúvida identifica o
agente causador da doença.
Tratamento
Quando a pneumonia é de origem bacteriana, a primeira linha de tratamento
preferida pelos especialistas é o uso de antibióticos. Entre os antibióticos mais utilizados
no tratamento da pneumonia estão:
Penicilinas
Beta-lactâmicos (amoxicilina)
Quinolonas (Levofloxacina)
Macrólidos (Azitromicina)
Obviamente, o médico determinará quem é a melhor antibioticoterapia necessária.
Outras infecções
As bactérias do grupo coliforme podem gerar, em casos extremos, outras
infecções além das já mencionadas. Estes incluem:
Rinite atrófica
Endoftalmite
Osteomielite
Otite média
Sepse
Celulite
Essas infecções ocorrem em uma porcentagem muito pequena da população,
especialmente naqueles que têm um problema no nível do sistema imunológico, o que
os torna propensos a desenvolver essas infecções.

Coliformes totais Método da membrana filtrante (MF) Material necessário

a) equipamento de filtração com porta-filtro;

b) placa de Petri esterilizada de Ø 47 mm;
c) filtros de membrana de Ø 47 mm e porosidade de 0,45µm, com cartão absorvente;
d) meio de cultura (m Endo Broth MF);
e) água de diluição estéril;
f) pinça de aço inox
g) copo de aço inox;
h) bico de Bunsen ou lamparina a álcool;
i) bomba de vácuo (seringa);
j) estufa bacteriológica.
Execução do ensaio a) com a pinça, colocar cuidadosamente na placa de Petri um cartão
absorvente; b) com pipeta esterilizada colocar 1,8 mL do meio de cultura no cartão
absorvente e tampar a placa; c) colocar a membrana filtrante no porta-filtro, com a pinça
previamente flambada e fria; d) agitar o frasco contendo a amostra, pelo menos 25
vezes; e) destampar e flambar a boca do frasco; f) verter, cuidadosamente, 100 mL de
amostra no porta- -filtro, evitando que a água respingue sobre as bordas superiores; g)
ligar a bomba de vácuo (seringa) e fazer a sucção; h) depois de filtrada a amostra, lavar
3 vezes as paredes do funil com água de diluição estéril com porções de 20 mL
aplicando vácuo; i) após a lavagem e filtração, aliviar o vácuo e remover o funil do
suporte; j) com a pinça flambada e fria, remover o filtro do suporte e colocá-lo na placa
de Petri, antes preparada, com o lado quadriculado para cima; k) tampar a placa de Petri
e incubá-la invertida a 35o C durante 24 ± 2 horas; l) após o período de incubação,
examinar o filtro fazendo a contagem das colônias. Leitura dos resultados As colônias
indicativas de coliformes totais típicas têm uma cor rosa a vermelho escuro, com brilho
metálico. O brilho pode aparecer no centro ou na periferia da colônia.
As não coliformes aparecem com coloração vermelho- -clara ou escura sem o
brilho metálico característico. Observação: Às vezes, quando o disco está muito úmido e
a fonte de luz é muito intensa, as colônias de não coliformes podem aparecer com um
brilho falso, causando erros.
Isso poderá ser contornado usando-se fonte de luz mais difusa ou secando o
filtro antes de ser examinado. Preparo do meio de cultura Material necessário a) meio de
cultura desidratado (m Endo Broth MF);
b) água destilada;
c) álcool etílico a 95%; d) frasco Erlenmeyer de 125 mL; e) vidro de relógio; f) bico de
Bunsen ou lamparina a álcool

Técnica
a) pesar 4,8 gramas do meio desidratado;
b) transferir para o Erlenmeyer;
c) adicionar aos poucos 100 mL de água destilada contendo 2 ml de álcool etílico a
95%;
d) aquecer em banho-maria ou no bico de Bunsen até o
início da fervura (não deixar ferver);
e) deixar esfriar;
f) distribuir 1,8 mL em cada placa.
Observações: 1. Preparar somente a quantidade necessária para
uso. Esse meio pode ser adquirido em ampolas de 2
mL, porém o custo é muito elevado. É mais econômico prepará-lo no laboratório.
2. Em substituição ao meio m Endo Broth MF poderá ser utilizado o meio sólido (LES
Endo agar).
Coliformes termotolerantes
Método da membrana filtrante (MF)
Material necessário
a) equipamento de filtração com porta-filtro;
b) placa esterilizada de Ø 47 mm;
c) filtros de membrana de Ø 47 mm e porosidade de
0,45µm, com cartão absorvente;
d) meio de cultura (m FC Broth Base);
e) água de diluição estéril;
f) pinça de aço inox;
g) copo de aço inox
h) bico de Bunsen ou lamparina a álcool;
i) bomba de vácuo (seringa);
j) estufa bacteriológica ou banho-maria.

Preparo do meio de cultura

Material necessário
a) meio de cultura desidratado (m FC Broth Base);
b) água destilada;
c) ácido rosólico a 1% em NaOH 0,2 N;
d) frasco Erlenmeyer de 125 mL;
e) vidro de relógio;
f) bico de Bunsen ou lamparina a álcool.
Técnica
a) pesar 3,7 gramas do meio desidratado;
b) transferir para o Erlenmeyer;
c) dissolver o meio pesado, em 100 mL de água destilada;
d) adicionar 1 mL da solução de ácido rosólico a 1%;
e) aquecer até a ebulição;
f) deixar esfriar;
g) distribuir 2,0 ml em cada placa.
Observações: 1. Preparar somente a quantidade necessária para uso;
2. Esse meio pode ser adquirido em ampolas de 2 mL, porém o custo é muito elevado. É
mais econômico prepará-lo no laboratório
Coliformes totais e Escherichia coli
Teste de presença/ausência
Método do substrato cromogênico
A opção da metodologia para a realização dos exames bacteriológicos da água
recai naquele procedimento que melhor se adequar às condições do laboratório,
devendo--se, no entanto, adotar como padrão as metodologias, frequências e
interpretação de resultados estabelecidas e recomendadas pela legislação em vigor.
Os métodos de Tubos Múltiplos (TM) e Membrana Filtrante (MF) ainda são
largamente utilizados, entretanto a opção pelo método de Substrato Cromogênico-
Fluorogênico Definido é comumente adotado pela facilidade de manuseio, bem como
por ter relativo custo/benefício já comprovado.
O método é baseado nas atividades enzimáticas específicas dos coliformes (ß
galactosidade) e E. coli (ß glucoronidase). Os meios de cultura contêm nutrientes
indicadores (substrato cromogênico) que, hidrolisados pelas enzimas específicas dos
coliformes e/ou E. coli, provocam uma mudança de cor no meio. Após o período de
incubação, se a cor amarela é observada, coliformes totais estão presentes.
Se a fluorescência azul é observada sob luz ultravioleta (UV) 365 nm, E. coli
está presente Além da maior precisão, esse método tem como vantagem o tempo de
resposta, já que a determinação simultânea de coliformes (totais) e E. coli é efetuada
após incubação das amostras a 35oC por 24 horas, não havendo necessidade de ensaios
confirmativos.
Material necessário
a) recipiente de coleta de vidro ou de plástico;
b) substrato cromogênico (ONPG)/fluorogênico (MUG);
c) estufa bacteriológica;
d) lâmpada ultravioleta de 365 nm.Execução do ensaio
a) coletar a amostra (100mL) em um frasco estéril ou saco de coleta contendo
tiossulfato de sódio a 10% para água tratada;
b) no próprio frasco ou saco adicionar o conteúdo de 1 (um) frasconete contendo o
substrato cromogênico;
c) fechar o frasco ou o saco e agitar levemente, não precisa dissolver totalmente, essa
dissolução ocorrerá de forma natural;
d) incubar a 35,0 ± 0,5oC durante 24 horas.
Interpretação e expressão dos resultadosDecorridas 24 horas de incubação, retirar da
estufa o material e observar visualmente o frasco ou saco.
Se apresentar coloração amarelada, o resultado é presença de Coliformes Totais na
amostra.
Com o auxílio de uma lâmpada ultravioleta 365 nm, observar se existe
fluorescência azul nas amostras que desenvolveram coloração amarelada aproximando a
lâmpada ao frasco.
Se a amostra apresentar coloração amarelada e fluorescência com a luz UV-365
nm significa que há presença de Escherichia coli na amostra examinada.Caso a amostra
permaneça transparente, o resultado é negativo, tanto para Coliformes Totais como para
E. coli.Expressar o resultado como: Presença ou Ausência de Coliformes Totais ou
Escherichia coli.
Nota: A fluorescência azul ocorre somente na presença da luz ultravioleta, ao tirar o
frasco da frente da luz ele volta a ficar amarelo.
Esterilização
Os seguintes materiais devem ser esterilizados: frascos de coleta de amostra,
pipetas, placas de Petri de vidro, frascos e tubos com água de diluição e meios de
cultura.
Procedimentos para a esterilização a) preparar todo o material; b) verificar se o
nível da água dentro da autoclave está acima das resistências. Completar se necessário;
c) colocar todo o material dentro do depósito metálico e tampar a autoclave;
d) apertar as travas da tampa duas a duas para não permitir saída de vapor pela borda do
aparelho. Ligar o aparelho na tomada;
e) ligar a chave seletora de temperatura na posição “Máximo”
f) abrir imediatamente a válvula de escape de vapor; g) quando começar a sair vapor por
essa válvula, esperar três minutos e fechá-la; h) nesse instante, o ponteiro do manômetro
começará a subir; i) quando o ponteiro atingir a marca de 1Kg/cm² de pressão, a
temperatura deverá estar em 121o C. Deixar nesta posição durante 20 minutos; j) se a
pressão continuar subindo, coloque a chave seletora de temperatura da autoclave, na
posição “média“ e fique observando; k) depois de 20 minutos, o material já estará
esterilizado; Observação: Normalmente as autoclaves possuem uma chave seletora de
temperatura que indica três posições “Mínima, Média e Máxima”, justamente para
manter a pressão e temperatura dentro da faixa utilizada. Serve, também, para ligar e
desligar o aparelho.
Atualmente existem autoclaves microprocessadas que realizam as etapas, ou
seja, o ciclo de esterilização e descontaminação automaticamente, após programação do
usuário. l) desligar o aparelho e esperar que o ponteiro do manômetro atinja a posição
“0”.
 Esse procedimento poderá ser acelerado abrindo-se lentamente a válvula de
escape de vapor; Atenção: Não abrir essa válvula de uma vez! m) quando o ponteiro do
manômetro atingir a posição “0” e não estiver mais saindo vapor pela válvula, abrir a
tampa do aparelho e retirar o material.
Nota: Existem vários modelos de autoclaves no mercado. É importante seguir sempre as
instruções do fabricante

CONCLUSÃO
De forma a concluir percebemos que os coliformes constituem um grupo de
bactérias que um número de características agrupadas. Todos pertencem à família
Enterobacteriaceae e geralmente fazem parte da flora bacteriana normal do trato
digestivo de alguns animais.
Ele deve seu nome ao membro mais conhecido desse grupo, a bactéria
Escherichia coli . No entanto, as bactérias coliformes agrupam quatro gêneros
bacterianos: Escherichia, Enterobacter, Klebsiella e Citrobacter.
Escherichia coli, a bactéria coliforme mais conhecida. Do ponto de vista
ecológico, essas bactérias são importantes porque constituem um elemento indicador
dos níveis de poluição dos corpos d’água. A presença dessas bactérias indica que a água
está contaminada com matéria fecal. Além disso, alguns são patógenos importantes para
o homem.
REFERÊNCIAS
Baron, S. (1996). Microbiologia médica Ramo Médico da Universidade do Texas. 4 th
Collado, O., Barreto, H., Rodríguez, H., Barreto, G. e Abreu, O. (2017). Espécies
bacterianas associadas a infecções do trato urinário. Revista arquivo médico de
Camaguey. 21 (4).
Feng, P., Weagant, S., Grant, M. e Burkhardt, W. (2002). BAM 4: enumeração de
Escherichia coli e as bactérias coliformes. Obtido de: fda.gov
M. e Martinko, J. (2005). Biologia de Brock de microorganismos. Prentice Hall. 11 ª
edição.
Menor, J. (2007). Bactérias coliformes fecais. Enciclopédia do meio ambiente e da
sociedade.
Parr, L. (1939). Bactérias Coliformes Revisões de Bacteriologia. 3 (1) 1-48
https://web.archive.org/web/20170817124313/http://darwin.futuro.usp.br:80/site/
ecologia/quadroteorico/c_coliformes.htm
http://pt.wikipedia.org/wiki/Coliforme
https://web.archive.org/web/20111224181340/http://www.slideshare.net:80/Samiravet/
aula-coliformes
http://www.ibb.unesp.br/departamentos/Educacao/Trabalhos/obichoquemedeu/
bacteria_coliformes_fecais.htm