ETEC – DR.
CELSO GIGLIO (OSASCO II) desenvolver e fermentar a lactose com produção de
CURSO: ETIM MEIO AMBIENTE
COMPONENTE: ANÁLISE MICROBIOLÓGICA DA ÁGUA,
AR E SOLO
PROF. VITOR AMARAL
Nome:_____________________________________
_________Nº______ Período:________
Aula prática - Detecção (presença ou ausência) de
bactérias do grupo coliformes em amostras de
água e contagem pelo Número Mais Provável
(NMP)
Introdução
Desde o início da bacteriologia sanitária,
marcada pela observação de Escherich em 1885, de
que o Bacillus coli (Escherichia coli) poderia ser
usado como indicador de na avaliação da
contaminação fecal da água – as bactérias do grupo
coliformes têm sido extensivamente utilizadas na
avaliação qualidade das águas, sendo até hoje o
parâmetro microbiológico básico incluído nas
legislações relativas a águas para consumo humano.
COLIFORMES TOTAIS: grupo de bactérias
constituído por bacilos gram-negativos, aeróbios ou
anaeróbios facultativos, não formadores de
esporos, oxidase-negativos, capazes de crescer na
presença de sais biliares ou outros compostos
ativos de superfície (surfactantes), com
propriedades similares de inibição de crescimento,
e que fermentam a lactose com produção de
aldeído, ácido e gás a 35ºC em 24-48 horas. O
grupo inclui os seguintes gêneros: Escherichia,
Citrobacter, Enterobacter e Klebisiela.
COLIFORMES FECAIS OU COLIFORMES
TERMOTOLERANTES: são coliformes capazes de se
vidro, para dissolução do meio em água
ácido e gás à temperatura de 44,5 ± 0,2°C em 24
horas. O principal componente deste grupo é
Escherichia coli, sendo que alguns coliformes do
gênero Klebisiela também apresentam essa
capacidade.
Objetivo
Este método tem como objetivo a detecção
de coliformes (totais e fecais) em amostras de água,
através do teste de Presença-Ausência (P/A), com
aplicação na avaliação da qualidade bacteriológica
de águas destinadas a consumo humano.
Materiais
 Caldo Meio de cultura E.C ou Caldo Verde de
Bile Brilhante 2%
 Frascos para coleta de amostras (Schott)
 9 tubos de ensaio
 Bico de bunsen
 Tripé
 Tela de amianto
 Micro pipeta de 100 ul
 Ponteira de 100 ul
 Bastão de vidro
 Pipeta de 10 ml
 Pêra
 Béquer de 500 ml
 Tubos de Duran
Método
 Pesar a quantidade de meio de cultura E.C
calculando o quanto de água destilada utilizará.
 No béquer de 500 ml, adicionar o meio o
volume calculado de água destilada.
 Aquecer o conteúdo do béquer em bico de
bunsen até ferver, agitando com o bastão de
destilada.
 Despejar com a pipeta de 10ml, cerca de 5 ml
do meio já fervido nos 9 tubos de ensaio.
 Adicionar 1 tubo de Duran em cada tubo de
ensaio já contendo meio de cultivo.
 Autoclavar os tubos à 121°C, 1 atm e por 15
minutos.
 Esperar esfriar a temperatura ambiente.
 Com a micropipeta coletar 100ul, inocular nos
tubos de ensaio cada amostra com seus
respectivos volumes (3 tubos com 10ml, 3
tubos com 1ml e 3 tubos com 0,1ml – total 9
tubos com 3 diluições da mesma amostra).
 Identificar os tubos de acordo com as
respectivas amostras.
 Incubar na estufa a 35°C + 0,5°C por 24/48h
(coliformes totais) ou 43°C +0,5°C por 24/48h
(coliformes termotolerantes).
 OBS: os tubos de ensaio sempre devem ser
abertos perto do da chama do bico de bunsen
para evitar contaminação.
Resultados
Montar uma tabela com os resultados de
cada amostra de água testada como no exemplo
abaixo:
Amostra
Tubo 10ml Tubo 1ml Tubo 0,1ml
de água
A
B
C
Os resultados devem ser comparados com a
resolução COMANA 357 (outras finalidade para uso
da água) , CONAMA 274 (Balneabilidade) e Portaria
de Consolidação N° 5 – Anexo XX (Potabilidade de
água).
Conclusão
1) Qual(is) amostra(s) apresentou(aram)
crescimento positivos para o grupo
Coliformes Totais e/ou termotolerantes?
2) O que indica a presença desses micro-
organismos nas amostras de água?
3) Quais as características do meio de cultura
utilizado nesse teste? (quanto o estado
físico e função)
4) Das três amostras qual seria a
recomendada para consumo humano? Por
que?

Referências
- Ribeiro, Maria Cagnoni e Soares, Maria Magali ,
Microbiologia Prática: Roteiro e Manual: bactérias e
fungos – São Paulo: Ed. Atheneu, 2000.