INSTITUTO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE

CURSO DE FARMÁCIA

ROTEIRO PARA AULAS PRÁTICAS

DISCIPLINA:
Biotecnologia Farmacêutica
REGRAS BÁSICAS DE SEGURANÇA NO LABORATÓRIO:

1. Durante a aula prática mantenha sempre a atenção ao roteiro, tendo-o sempre

próximo a você. Pode ser efetuada uma marcação com caneta sob cada item realizado
do experimento, de forma a não se perder durante a execução;

2. Leia sempre o roteiro antes de iniciar a prática e mesmo antes das explicações do
professor;

3. Observe a localização do material e dos equipamentos de emergência (chuveiro, lava

olhos, etc);

4. Não abra qualquer recipiente antes de reconhecer o seu conteúdo pelo rótulo;

5. Não pipete líquidos diretamente com a boca; use pipetas adequadas;

6. Não tente identificar um produto químico pelo odor e nem pelo sabor;

7. Não deixe de utilizar os equipamentos de proteção;

8. Não adicione água aos ácidos, mas sim os ácidos à água;

9. Não trabalhe de sandálias, chinelos ou sapatos abertos e de salto no laboratório;

10. Sempre identifique o conteúdo presente nos frascos ou tubos utilizados no

experimento com caneta para os vidros. Isto facilita o seu descarte adequado por parte
dos responsáveis pelo laboratório;

11. Mantenha os solventes em recipientes adequados e devidamente tampados, bem

como os materiais inflamáveis longe de fontes de calor (bico de Bunsen);

12. Utilize a capela sempre que manipular reagentes ou solventes que liberem vapores;

13. Conheça as propriedades tóxicas das substâncias químicas antes de empregá-las

pela primeira vez no laboratório; caso tenha dúvidas, consulte o professor ou o técnico
a respeito;

14. Se tiver cabelos longos, deixe-os presos ao realizar qualquer experiência no

laboratório; não se alimente e nem ingira líquidos nos laboratórios.
 AULA

Título da Aula: Extração de DNA de morango e 1

Instituto de Ciências da Saúde verificação de integridade do DNA por
espectrofotômetro ROTEIRO

OBJETIVO:

Explicar a função do DNA em diferentes células e seus prováveis usos na biologia molecular e
biotecnologia.

Explicar a extração de DNA desta aula e comparar com a que é realizada em laboratórios de
pesquisa

Explicar, resumidamente, os procedimentos mais rotineiros de clonagem molecular usando a

técnica de DNA recombinante.

Discutir efeito hipocrômico do DNA e pureza de DNA

PROCEDIMENTO:

Retire as sépalas e os cabos de 3 ou 4 morangos e coloque os morangos dentro de um saco

plástico e adicione 50-80mL de solução de lise.

Feche o saco e os amasse bem por 1-2 minutos aproximadamente, (pode ou não colocar o
saco em um banho maria 600C por 5-10 minutos a fim de melhorar a lise).

Passe a mistura obtida pelo aparato filtrante e coloque cerca de 10-20 mL em tubo largo limpo.

Colocar o etanol absoluto gelado (na proporção de 1:2) pelas paredes e verificar a precipitação
de DNA quando o etanol se encontra com a solução. Enrolar com um bastão de vidro o DNA
presente no tubo (depois pode misturar levemente por inversão)

Dissolver uma parte do DNA em água, e medir a Abs 260nm. Aquecer e medir novamente.
Verificar o efeito hipocrômico. Discutir aas medidas com = 232 nm e 280nm.

MATERIAIS QUANTIDADE

saco plástico tipo "zip loc" 1 unidade

morangos (fresco ou congelado) 3-4 unidades

Solução de lise (detergente incolor / NaCl/ H2O) 50 ml/15 g/ 50mL

Álcool etílico gelado 90º GL 20 mL

tubo de ensaio grande limpo 1 unidade

Bastão de vidro 1 unidade

Papel absorvente 1 rolo

 EQUIPAMENTOS QUANTIDADE

Aparato filtrante: 1 filtro de papel com funil ou 1 filtro de pano ou 1 por equipe
gaze

Espectrofotômetro 1 por bancada

cubetas 2 unidades

Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança

O bagaço pode ser jogado no lixo, e as soluções podem ser jogadas na pia com a água correndo.

Exercício de fixação

1. Por que é necessário macerar o morango?

2. Em que etapa do procedimento ocorre o rompimento das membranas das células

do morango? Explique.

3. Por que você não pode ver a dupla hélice do DNA extraído?

4. Considerando os procedimentos da extração do DNA genômico, você espera obtê-

lo sem quebras mecânicas e/ou químicas?

AULA
1
Título da Aula: Observação de leveduras ROTEIRO
Instituto de Ciências da
Saúde 2

OBJETIVO:
Observar as leveduras utilizando diferentes técnicas.

Discorrer sobre a participação das leveduras em processos fermentativos.

Explicar fermentação e respiração em leveduras

PROCEDIMENTO:
A. Observação macroscópica

Observar e comparar a textura, a cor e o cheiro do fermento seco e do fermento fresco.

B. Observação das colônias crescidas em placa de Petri

Observar as colônias de leveduras Saccharomyces cerevisae crescidas em placa de Petri

C. Observação microscópica

Observar, no microscópio, um pouco de levedura fresca, fermento seco, e da placa em uma

mesma lâmina. Explicar o que é fermento seco

C. Observação de colônias

Fazer lâmina com lamínula e azul de metileno ou tinta nanquim.

Pode-se fazer coloração de Gram para observação das leveduras

MATERIAIS QUANTIDADE
fermento de padaria fresco 1 por grupo
fermento de padaria seco instantâneo 1 por grupo
conta-gotas 1 por grupo
Alça de platina
placa de Petri com meio nutriente de Sabouraud estéril preparado como 1 por grupo
indicado no Guia 30 (Meios de cultura: Sabouraud para fungos),
Coloração de Gram 1 por grupo

EQUIPAMENTOS QUANTIDADE
Microscópio
lâminas e lamínulas

PS: a quantidade a ser utilizada deverá ser discutida com o professor

Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança:

As soluções presentes nos tubos deverão ser desprezadas na pia, com água corrente.

Exercício de fixação

1- Comparar eucariotos e procariotos não só na presença de membrana nuclear, mas

em outras características.

2- Como poderemos saber se é uma levedura ou cocos?

3- Por que o tempo de prateleira é maior em levedura seca que em fresca?
 AULA
2
Título da Aula: Presença de proteases em produtos ROTEIRO
Instituto de Ciências da comerciais
Saúde 1

OBJETIVO:

Identificar a presença de proteases nos produtos comerciais para a lavagem de roupas e na

remoção de manchas: sabão em pó, amaciante de roupas, detergente e bicarbonato de sódio.

Explicar a composição possível das manchas e a função das enzimas presentes nos detergentes.

PROCEDIMENTO:

1. Rotular os copos (controle, produto 1, produto 2, produto 3 e produto 4).

2. Preparar a gelatina conforme as instruções da embalagem.

3. Distribuir quantidades iguais nos 5 copos e completar os passos 4, 5 e 6.

4. Colocar 1 colher de água em um dos copos (controle) e misturar bem.

5. Colocar 1 colher do primeiro produto no copo correspondente e misturar bem.

6. Repetir o item anterior com os produtos restantes.

7. Depois de duas horas colocar na geladeira, até que a gelatina do copo controle solidifique.

8. Observar se a gelatina solidificou ou não nos copos restantes.

MATERIAIS QUANTIDADE
envelope de gelatina branca
5 copos e 5 colheres de plástico
1 colher de sopa de amaciante de roupas
1 colher de sopa de sabão em pó
1 colher de sopa de detergente
1 colher de sopa de bicarbonato de sódio
PS: a quantidade a ser utilizada deverá ser discutida com o professor

Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança:

As soluções presentes nos tubos deverão ser desprezadas na pia, com água corrente.

EXERCICIO DE FIXAÇÃO

1- Por que se deve tomar cuidado ao levar as mãos aos olhos caso esteja

2-Por que a água quente ajuda no processo de retirada de manchas

 AULA
3
Título da Aula: BIOPLÁSTICOS / PLÁSTICOS DE ROTEIRO
Instituto de Ciências da AMIDO
Saúde 1

OBJETIVO:

Preparar um bioplástico a partir de amido tendo como dispersante óleo vegetal.

PROCEDIMENTO:

1. Misturar em um saco plástico 2 colheres das de sopa de amido, 2 colheres das de sopa de
água e umas gotas de corante para alimentos.

2. Acrescentar 4 ou 5 gotas de óleo vegetal no saco plástico e misturar muito bem o conteúdo.

3. Fechar o saco deixando uma abertura na ponta.

4. Esquentar no micro-ondas por 30 ou 40 segundos. CUIDADO AO RETIRAR DO FORNO DE

MICROONDAS

5. Aguardar até a temperatura abaixar e distribuir em formas. À medida que o plástico vai
secando, perde a flexibilidade e, depois de um ou dois dias, fica rígido.

6. Deixar secar a temperatura ambiente.

7. Analisar algumas das características do bioplástico obtido (dureza, flexibilidade,

degradabilidade, por exemplo).

Controle: Repetir o procedimento substituindo, no item 2, o óleo vegetal por água.

Pode-se comparar os bioplásticos obtidos com diferentes fontes: maisena, farinha de trigo, fécula
de batata, fécula de mandioca etc. e com diferentes dispersantes: óleo de soja, óleo de girassol,
óleo de milho etc.( modificando as proporções por exemplo, de maisena e óleo)

MATERIAIS QUANTIDADE
Maisena
água
óleo vegetal
corante alimentar
sacos plásticos
PS: a quantidade a ser utilizada deverá ser discutida com o professor

EQUIPAMENTOS QUANTIDADE
forno de micro-ondas

Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança:

As soluções presentes nos tubos deverão ser desprezadas na pia, com água corrente.
EXERCICIO DE FIXAÇÃO

1- Por que bioplásticos são degradados na natureza e o plástico não?

 AULA
Título da Aula: Produção de iogurte
3
Instituto de Ciências da Saúde
ROTEIRO

OBJETIVO:

Explicar o processo de fermentação (nomenclatura usada em indústria de fermentação:

mosto, inóculo, vinho, uso ou não de oxigênio) enfocando a fermentação lática.

PROCEDIMENTO:

1-Adicionar 2% de açúcar refinado a um frasco de iogurte (comprado em supermercado)

e colocar na estufa 370C por 1 hora para ativação dos microorganismos presente no
frasco.

2- Em um becker, colocar 750mL de leite para aquecer 800C durante 15 minutos e

resfriar rapidamente em banho de água fria.

3- Separar 100 mL de leite pasteurizado em becker (ainda quente) e dissolver a gelatina

completamente.

4- Colocar no leite sacarose à 10%. Adicionar 40g de iogurte ativado (inóculo) quando
a temperatura chegar cerca de 400C.

5- Cobrir o recipiente com papel alumínio e incubar em estufa a 370C, durante no mínimo
de 1 no máximo 2 dias.

6- Depois do iogurte pronto, fazer um esboço de controle de qualidade com a verificação

de propriedades organolépticas (cor, sabor, odor, textura) e acidez (graus Dornic):
pipetar 5 mL de iogurte a adicionar 20 mL de água destilada com 3 gotas de
fenolftaleína, titular esta solução com uma solução de NaOH 0,1N até viragem
rosa.(sabe-se que 10D corresponde a 0,001g de lactato contido em 10 mL de leite.)

MATERIAIS QUANTIDADE

Leite UHT integral 0,75 L

Açúcar refinado 10%

Inoculo 3%

gelatina 1%
 frasco de iogurte 1 unidade

Proveta 1L 1 unidade

Becker 500mL, 250ml 1 e 2 unidades

Papel absorvente 1 rolo

Papel alumínio 1 rolo

espátula 1 -2 unidades

EQUIPAMENTOS QUANTIDADE

Estufa 370C 1 unidade

Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança:

As soluções podem ser jogadas na pia com a água correndo.

EXERCICIO DE FIXAÇÃO

01 - Na fabricação de iogurte, os microorganismos transformam o açúcar presente no leite em

ácido lático. Como ocorre esse processo?

02 - Em uma das etapas do processo de produção de iogurte, esquematizado na figura, ocorre

a mudança da consistência característica do leite, de líquido para gel.

ROBERT, N. R. Disponível em: www.respostatecnica.org.br. Acesso em: 26 fev. 2012 (adaptado).

Em qual etapa ocorre essa mudança de consistência? Justifique.

03 - Tadeu adora iogurte natural, mas considerando o preço do produto industrializado, vendido
em copos plásticos no supermercado, resolveu construir uma iogurteira artesanal e produzir seu
próprio produto. Para isso, adaptou um pequeno aquário sem uso, no qual havia um aquecedor
com termostato para regular a temperatura da água. Nesse aquário, agora limpo e com água em
nível e temperatura adequados, colocou vários copos nos quais havia leite fresco misturado à
uma colherinha do iogurte industrializado. Passadas algumas horas, obteve, a partir de um único
copo de iogurte de supermercado, vários copos de um iogurte fresquinho. Explique o processo
biológico que permite ao leite se transformar em iogurte e explique por que Tadeu precisou usar
uma colherinha de iogurte já pronto e um aquecedor com termostato na produção do iogurte
caseiro.
 AULA
Título da Aula: Destilação de garapa fermentada
4
Instituto de Ciências da Saúde

ROTEIRO

OBJETIVO:

Explicar o processo de fermentação alcoólica.

Comparar as várias fermentações alcoólicas: álcool combustível pinga, cachaça, vinho

e cerveja.

PROCEDIMENTO:

1- No dia anterior ao dia da aula, colocar em 1-2 L de garapa em um container fechado

com um tubo que libera o gás (CO2) em um becker com água, 1-2 pacotes de levedura
dissolvido em garapa, com uma “espatulada” de fonte de nitrogênio NH4 (SO4)2.

2- Depois de aproximadamente 24hs destilar, após a retirada das leveduras por filtração
em filtro de papel (colocar uma amostra em uma lâmina + azul de metileno+lamínula) e
analisar em microscópio óptico.

3- Verificar a grau de etanol presente nas amostras usando densitômetro.

4- Separar cabeça, corpo e cauda da fermentação em erlenmeyer e “experimentar” os

diferentes odores das 3 alíquotas

MATERIAIS QUANTIDADE

3-5 Erlenmeyer (para coleta do destilado) 1 conjunto por classe

Garapa fermentada 1 por classe

1-2 pacotes de levedura 1 por classe

NH4 (SO4)2 “1 espatulada”

Azul de metileno 1-2 gotas por grupo

Lâminas e lamínulas 1 conjunto por grupo

 EQUIPAMENTOS QUANTIDADE

Container com 1-2 L de garapa + inoculo+ destilador+ 1 conjunto por

densitômetro classe

densitômetro 1 por classe

microscópio 1 por bancada

Descarte do material utilizado conforme Normas Internacionais de Segurança:

As soluções podem ser jogadas na pia com a água correndo.

EXERCICIO DE FIXAÇÃO

01 - Os processos de destilação são muito usados nas indústrias. Por exemplo, nos engenhos,
a fabricação da cachaça é feita destilando-se o caldo fermentado num alambique. Relacione as
partes de um alambique (Figura 1) com as peças que constituem um aparelho para destilação
simples (Figura 2), representadas abaixo, numerando a segunda coluna de acordo com a
primeira.
(1) Fornalha (?) Béquer.

(2) Tacho de aquecimento (?) Balão de fundo redondo.

(3) Serpentina de resfriamento (?) Bico de Bunsen.

(4) Recipiente coletor (?) Condensador.

02 – Quais as são as etapas do processo de produção de cachaça?

Nome:____________________________________________ RA:________________
Data:______/_____/_____

ATIVIDADE OBRIGATÓRIA 1

1. Qual a função do sal de cozinha? Justifique

2. Qual o papel do álcool? Justifique

Visto do docente: _________________________________

Nome:____________________________________________ RA:________________
Data:______/_____/_____

ATIVIDADE OBRIGATÓRIA 2

1- Se a gelatina solidificar, pode ser por que o tempo de incubação foi insuficiente? Explique.

2- Pode usar estes detergentes com enzimas (proteases, amilases, lipases e carboidrase) para
lavar lã e seda? Explique.

Visto do docente: _________________________________

Nome:____________________________________________ RA:________________
Data:______/_____/_____

ATIVIDADE OBRIGATÓRIA 3

1- Quais as consequências caso alimentos sejam embalados em bioplásticos em termo de tempo

de prateleira?

2-Por que ainda não são largamente utilizados na indústria?

Visto do docente: _________________________________

Nome:____________________________________________ RA:________________
Data:______/_____/_____

ATIVIDADE OBRIGATÓRIA 4

1 – Quanto tempo o caldo deve ficar fermentando e qual a temperatura ideal deste ambiente?

2 – Proponha um método de produção para outros tipos de bebidas fermentadas e destiladas.

Visto do docente: ________________________________