Investigação de uma enzima – a catalase

Esquema da catalase (wikipédia)

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 Estrutura

A catalase é uma proteína com 4 cadeias polipeptídicas, cada uma com mais de 500
aminoácidos. Cada cadeia tem um grupo heme (um átomo de ferro e protoporfirina) o
que lhe permite reagir com o peróxido de oxigénio. O pH óptimo da catalase varia de
espécie para espécie, sendo a humana de pH 7. A temperatura óptima também varia de
espécie para espécie.
Velocidade da reacção

Velocidade da reacção

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 Abundância
A catalase é uma enzima muito comum, encontrada em quase
todos os organismos aeróbios.

Com actividade significativa da catalase Actividade da catalase ausente

Alperces Bróculos Maças
Bananas Cenouras Citrinos
Cerjas Pepinos Pessegos
Flores frescas batatas Tomates
Alho francês Flores senescentes
Cebola
nabo

As espécis de Streptococcus e de
Enterococcus são exemplos de
microrganismos catalase negativos.

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 Função da catalase

A catalase tem a função de proteger a célula dos efeitos tóxicos do peróxido de

hidrogénio (vulgo água oxigenada) que é gerado como um subproduto do metabolismo
celular. Esta enzima catalisa a decomposição do peróxido de hidrogénio em água e
oxigénio:

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 Actividade experimental – Investigação dos factores que
condicionam a velocidade da reacção catalisada pela enzima
Catalase.

Pode ser medida a velocidade da reacção através

da quantidade de oxigénio libertado.
Ensopando discos de papel de filtro com o
extracto da enzima mergulham-se numa solução
de peróxido de oxigénio.
À medida que se vai libertando oxigénio o disco
vai subindo na solução empurrado pelas bolhas
de gás formado.
O tempo que o disco de papel leva a percorrer
determinada distância é directamente
proporcional à velocidade de libertação de
oxigénio, isto é à velocidade da reacção.

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 Material

Reagentes Equipamentos
Batata, frutas, sementes,… Discos de papel de filtro
Peróxido de hidrogénio Papel de filtro
Tampão de pH 7 Almofariz
Tubos de centrífuga
Centrífuga
Cronómetro
Régua
Tubos de vidro estreitos
Caneta de acetato
Lupas de mão
Bisturi

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 Procedimento:
1. Extracção da enzima:

1. Num almofariz triture o material biológico com um pouco de tampão de pH 7 e alguma areia
(material com bastante água não necessita de nenhum tampão). Este tampão deve ser usado com
muita parcimónia, pois pretende-se apenas uma quantidade mínima de sobrenadante.
2. Ponha a mistura num tubo de centrífuga e ponha a centifugar a uma velocidade alta até se formar
um depósito.
3. Transfira o sobrenadante para um tubo novo.
Alternativa: Colocar o disco em contacto directo com uma superfície cortada de fresco de um
vegetal ou fruta.
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 Procedimento:
2. Medição da velocidade da reacção:

4 5 6 7

4. Prepare tubos cheios uma solução de 1% de H2O2, com 2 cm de altura de solução. Estes
2 cm são a distância percorrida pelo disco.
5. Coloque um disco no extracto e retire o excesso noutro papel de filtro.
6. Coloque o disco no fundo de um tubo e inicie a contagem.
7. Meça o tempo que leva o disco a subir e remova o disco. Pode repetir a experiência até
10 vezes com a mesma solução pois as enzimas difundem-se muito pouco do disco
para a solução.

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 Ideias para pesquisas:

Exemplos de variáveis possíveis de investigar: que efeito têm na velocidade

da reacção?

•Concentração do substrato: Vários tubos com concentrações diferentes de

peróxido de hidrogénio.
•Germinação: Observar, à lupa, a formação de bolhas em sementes em
diferentes estádios de germinação.
•Temperatura: Colocar o extracto de enzima em diferentes condições de
Temperatura, medindo depois a velocidade de reacção.
•Tratamento hormonal: Sujeitar órgãos de plantas a diferentes hormonas.
•Doenças: Observar a actividade da catalase em tecidos saudáveis e atacados
por fungos ou vírus.
•Diferentes tecidos nas sementes.

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 Ideias para pesquisas:
Actividade da catalase nos cotilédones, no embrião, na camada de
aleurona ou no endosperma.

dicotiledóneas monocotiledónea

Semente de feijão Semente de milho

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http://www-saps.plantsci.cam.ac.uk/worksheets/ssheets/ssheet24.htm

Choinski J.S. and Patterson J.W. (1993) A simple and inexpensive method for
studying the effects of the enzyme catalase.  Journal of Biological Education 27
(1) 7-10 A copy is available Delpech R. (2000b)
Investigating the phenomenon of programmed cell death in maize (Zea mais)
seeds Journal of Biological Education 35 (1) 41-44

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