ROTEIRO DE AULAS PRÁTICAS

DISCIPLINA: Genética Médica

Lauro de Freitas
Ano 2024
TEMA: Extração de DNA

1. INTRODUÇÃO

O DNA (Ácido desoxirribonucleico) é uma molécula orgânica responsável pelo armazenamento

e transmissão das informações genéticas que compõem os organismos vivos. Nos organismos
eucarióticos, como animais, plantas e fungos, o DNA está presente no núcleo das células sendo
composto por três substâncias químicas, que são as bases nitrogenadas, um açúcar formado por
cinco átomos de carbono (pentose) e um radical de ácido fosfórico.
O tamanho microscópico do DNA faz com que só seja possível observar essa molécula
utilizando métodos avançados de microscopia eletrônica. No entanto é possível identificar a
presença da molécula de DNA em solução a partir da extração de uma grande quantidade dessa
molécula de células vegetais. Com isso, o objetivo desse roteiro de aula é contribuir para a
identificação do DNA extraído a partir de material vegetal em solução de lise.

2. OBJETIVO
Este documento pretende descrever em detalhes as atividades do seguinte processo:
- Metodologia simples para compreensão do princípio fundamental da técnica de extração de DNA
utilizando morango (Fragaria sp.).
- Compreensão da metodologia de extração de DNA de eucariotos;
- Ambientação e domínio das práticas laboratoriais e metodologias pertinentes;
- Discutir aspectos relacionados à aplicabilidade da utilização da extração de DNA na saúde.

3. MATERIAIS UTILIZADOS

Materiais / Reagentes Quantidade Observação

Álcool Etílico 96gl 500 mL
Por Banacada
Água Destilada 300 mL Por Banacada
Morango 4 Por Banacada
Sal 10 g Por Banacada
Detergente 100 mL Por Banacada
Equipamentos Quantidade
Saco Ziplock 2/bancada
Peneira 2/bancada
Colher 4/bancada
Palito de madeira 6/bancada
Banho Maria 1
Termômetro 1
Vidrarias Quantidade
Proveta Graduada 500 mL 2/bancada
Béquer de 500 mL 3/bancada
Cadinho 2/bancada

4. PROCEDIMENTOS

Recomendações

- É altamente recomendável que todas as instruções sejam lidas cuidadosamente antes de se

proceder ao teste;
- Preparar todas as soluções antes do início do processo;
- Separar, previamente, todo material a ser utilizado;
- Verificar validade de reagentes e soluções;
- Não pipete com a boca;
- Não coma, beba ou fume no laboratório ou áreas limítrofes aos mesmos;
- Não use componentes com prazo de validade vencido e não misture componentes de kits de
diferentes números de lote;
- Resultados ótimos serão obtidos seguindo-se rigorosamente o protocolo deste teste;
- Leia atentamente o manual de instruções e a IT de cada equipamento antes de utilizá-lo;
- Não utilize aparelhos celulares e eletrônicos, exceto quando necessários à realização das práticas;
- Qualquer dano aos materiais e equipamentos devem ser imediatamente comunicados aos
responsáveis;
- Ferimentos devem ser tratados imediatamente e comunicados aos responsáveis.

Ações de Biossegurança

- Limpar as superfícies de trabalho com álcool etílico 70% e, se disponível, concomitante com álcool
isopropanol 70%, antes e após o início das atividades;
- Manipule todos os materiais biológicos como potencialmente infectantes;
- Usar luvas de proteção / roupa protetora / proteção para os olhos / proteção para o rosto;
- Usar jaleco limpo, de manga longa, com comprimento até o joelho e sem adornos.
- Usar calça comprida, sapato fechado, prender o cabelo e manter as unhas curtas;
- Todos os resíduos devem ser adequadamente descontaminados antes de serem eliminados;
- Antes e após os procedimentos lavar as mãos e utilizar álcool etílico 70% para desinfecção;
- Manter um recipiente para descarte de ponteiras e reservatórios de reagentes, contendo Solução de
- Hipoclorito a 5%, sempre próximo durante todo o procedimento.

Procedimento:

- Organizar todos os materiais a serem utilizados na superfície de trabalho;

- Rotular os 2 béqueres com o nome da substância a ser adicionada (um com água destilada e outro
com álcool);
- Com a proveta, mensurar 150 mL de água destilada e colocar no béquer;
- Com a proveta, mensurar 250 mL de álcool e colocar no béquer;
- Ligar o banho maria e regular para 50ºC;
- Colocar a proveta contendo água destilada;
- Retirar as folhas dos 4 morangos;
- Colocar os 4 morangos dentro do saco ziplock e vedar adequadamente – tenha o cuidado de retirar
o máximo possível de ar de dentro do saco antes de vedar;
- Colocar o saco ziplock contendo os morangos no cadinho e amassar até tornar o mais homogêneo
possível;
- Abrir o saco e adicionar 1 colher de chá de sal;
- Adicionar 1 colher de chá de detergente;
- Adicionar 150 mL de água morna;
- Fechar o saco e misturar o conteúdo cuidadosamente por 5 minutos de forma a homogeneizar o
máximo possível;
- Pegar um béquer não rotulado e colocar a peneira encima dele;
- Abrir o saco e coar o conteúdo dele na peneira;
- Retirar a peneira de cima do béquer;
- Adicionar 250 mL de álcool gelado ao conteúdo do béquer;
- Aguarde a separação de fazes, onde o DNA se separará das demais proteínas permanecendo na
fase alcoólica;
- Com a proveta, mensurar 150 mL de água destilada e colocar no béquer;
- Pegar o DNA sobrenadante com um palito de madeira e colocar no béquer com água destilada;
- Visualizar o DNA sobrenadante na água.

Descarte:

- As amostras devem ser encaminhadas para a incineração;

- Placas de Petri, tubos e suabe com meios de cultura utilizados, devem ficar submersos em solução
de Hipoclorito a 5%;
- Logo após devem ser lavados e autoclavados para descontaminação.

REFERÊNCIA
- PERUZZO, Francisco Miragaia & CANTO, Eduardo Leite Do. Química: na abordagem do cotidiano. Vl.
único.2ed.- São Paulo:Moderna, 2002. pp.538 [1]
ANEXO A
CRONOGRAMA DE AULAS PRÁTICA
CURSO: Biomedicina
PROFESSOR(S): Dan Loureiro Nascimento DINÂMICA DA
Data TEMA DA AULA
TURMA
22/03/24 Extração de DNA

Horário das aulas:

Turma 1: 19:00 às 21:00

Quantidade de alunos:

Turma 1:25

Quantidade atual
matriculado

Quantidade de kits:

Ex:1 kit por bancada

O técnico irá organizar a

quantidade de kit indicada
por bancada de
OBSERVAÇÃO