Universidade Federal do Pará – Campus Universitário de Bragança

Disciplina: Genética Básica

Turma: Engenharia de Pesca (ano: 2020)
Profa. Grazielle Gomes

OBS: Apenas os alunos presentes durante a aula prática poderão entregar esta atividade.

ROTEIRO – AULA PRÁTICA

1. Organização do Material e Realização da Extração de DNA;

2. Eletroforese em Gel de Agarose;
3. Visualização dos resultados (pós-eletroforese) no Transiluminador;

Aula Prática – Extração de DNA e Eletroforese

Aluno:__________________________________________Mat.___________________
Aluno:__________________________________________Mat.___________________

1. Explique o procedimento de retirada de amostra para composição do Banco de Tecidos.

R: Ao chegar no laboratório com a amostra devemos higienizar o local, preparar o número de tombo, as
etiquetas e o material a ser utilizado. Das amostras tem que ser retirado o tecido de cima primeiro, que é
o mais propicio a estar contaminado, em seguida é retirado um tecido da parte mais interna possível
para que não tenha risco de contaminação. Esse tecido e colocado em um tubo eppendorf 1 5ml com
álcool pra preservar
2. Qual a importância do número de Tombo?
R: Ele que identifica a amostra
3. Em se tratando de peixes, qual seria o tecido biológico mais adequado para extração de DNA?
R: O tecido muscular
4. Quais amostras você irá utilizar para sua extração de DNA? (espécie e número de tombo).
R: As amostras utilizadas foram: LsyPA 01, LsyPA 02, LsyPA 03, LsyPA 04, LsyPA 05
5. Qual tecido biológico utilizado?
R: Tecido muscular
6. Qual protocolo de Extração você irá utilizar?
R: O protocolo de precipitação com NaCL de Aljabi, S.M, & Martinez., I. (1997)
7. Quais os principais cuidados que você deve ter antes de iniciar sua Extração de DNA?
R: Higienização do local, organizar a bancada e o matéria a ser utilizado, fazer checagem de tudo como:
verificar se esta funcionando, se ainda tem material e a estabilidade da energia elétrica.
8. Quais os equipamentos e materiais que você utilizou para realizar sua Extração de DNA?
R: Equipamentos: centrífuga, banho maria, frízer, vórtex e estufa
Materiais: Luvas, tubos eppendorf 1 5ml, pipetas, ponteiras e estantes para micro tubos
9. Qual a função do Tampão de Lise?
R: Tem a função de quebrar as macromoléculas
10. Qual a necessidade de utilizar enzimas degradativas, RNase e Proteinase K?
 R: De retirar/degradar as proteínas e RNAs
11. Qual a temperatura ótima de ação da enzima RNase?
R: A temperatura ótima da enzima RNase e de 37°c
12. Qual a temperatura ótima de ação da enzima Proteinase K?
R: A temperatura ótima da enzima e de 55° c
13. Qual o papel da centrifugação nas diferentes etapas descritas no protocolo?
R: Em um primeiro momento
14. Em qual momento o DNA será precipitado? Qual a necessidade da precipitação?
R: O DNA será precipitado no momento que o NaCL é adicionado, isso garante a pureza do material
15. Qual reagente deve ser utilizado para a precipitação do DNA?
R: O NaCL
16. O que fazer com sua amostra, após a precipitação do DNA?
R: Secar, hidratar a molécula de DNA e estocar em frízer
17. Como é possível avaliar o resultado de sua Extração de DNA?
R: Com uma Eletroforese submarina em gel de agarose
18. Qual padrão de resultado você pode encontrar no seu gel de agarose (pós-eletroforese) para considerar
sua Extração de DNA positiva e com boa qualidade?
R: Devemos consideram que o DNA tenha ficado integro e o mais próximo do poço, sem
rastros grandes de DNA
19. Descreva o procedimento de eletroforese submarina de ácidos nucléicos e sua finalidade.
R: O procedimento de eletroforese consiste em uma corrida de ions
20. Após os experimentos de Extração de DNA, o que fazer com as amostras extraídas?
R: Se tiverem funcionado depois da migração, passamos para a PCR- reação em cadeira da polimerase,
que é a amplificação daquela região alvo