RELATÓRIO DE PRÁTICA VIRTUAL

IDENTIFICAÇÃO

1. Acadêmico: Yasmin Pereira Cruz

2. Matrícula: 3698542

3. Curso: Biomedicina 4. Turma: FLC10096BBI

5. Disciplina: Genética humana e médica

6. Tutor externo: Angela Lemos Mendeiros

DADOS DA PRÁTICA

1. Título: Reação em cadeia da polimerase- PCR

2. Semestre: 5

3. Data: 07.10.2023

INTRODUÇÃO
Atualmente, a RT-PCR é amplamente utilizada nas ciências ômicas, ou seja, em uma análise
global dos RNAs de uma determinada célula sob um certo estímulo. Essa parte da ciência é
chamada de Transcriptoma, e nela se quantificam quais RNAs estão mais expressos e quais
estão inibidos ou com quantidade diminuída. Pode-se analisar a expressão gênica em
diferentes tecidos e entre organismos diferentes, assim como em ensaios com fármacos e
outras terapias (NOLAN, 2006). Em um contexto mais atual de sua importância, pode-se dizer
que, na pandemia de COVID-19, o RT-PCR em tempo real é um dos métodos de melhor
utilização e confiabilidade para detectar o RNA viral no SARSCoV-2.

OBJETIVOS

Neste experimento, irei realizar a técnica de reação da transcriptase reversa (RT – reverse
transcriptase) seguida da reação em cadeia da polimerase (PCR – polymerase chain reaction),
entendendo o procedimento da reação.

MATERIAIS

Jaleco, luvas, óculos, máscara, Tubo Eppendorf, Tubo Eppendorf contendo amostra de RNA,
Oligo Dt, dNTP, Buffer RT, DTT, RNAse inibidor, Transcriptase reversa, Termociclador, Buffer
amplificação 10x, Primer F, Primer R, Taq DNA polimerase, Água ultrapura, Micropipeta e
Ponteira.

METODOLOGIA

SEGURANÇA DO EXPERIMENTO: Coloque os equipamentos de proteção individual localizados

no “Armário de EPIs”.

REALIZANDO O MIX: Na capela, pipete no Eppendorf: 1 µl de oligo dT, 7 µl da amostra de RNA,

1 µl de dNTP, 4 µl de água ultrapura e leve ao termociclador. Configure-o da seguinte forma: 1
ciclo a 5 minutos.

EXECUTANDO A TRANCRIPÇÃO REVERSA: Retire o tubo do termociclador e coloque no suporte.

Em seguida, coloque no tubo: 4 µl de Buffer RT, 1 µl do DTT, 1 µl de RNAse inibidor, 1 µl de
transcriptase reversa e leve ao termociclador. Configure-o da seguinte forma: 1 ciclo a 25°C
por 5 minutos, 1 ciclo a 50°C por 60 minutos e 1 ciclo de 70°C por 15 minutos. Na segunda
parte, coloque “off” no Hot Lid, selecione “tube” e 20 µl no volume da amostra. a 65°C. Na
segunda parte, coloque “off” no Hot Lid, selecione “tube” e 13 µl no volume da amostra.

REALIZANDO A POLIMERIZAÇÃO: Retire o tubo do termociclador. Em seguida, coloque no tubo:

5 µl de Buffer 10x, 2,5 µl de MgCl2, 0,5 µl de primer F, 0,5 µl de primer R, 8 µl de dNTP, 0,5 µl de
Taq DNA polimerase, 5 µl da amostra e 28 µl de água ultrapura, e leve ao termociclador.
Configure-o da seguinte forma: 1 ciclo a 95°C por 11 minutos, 28 ciclos a 94°C por 1 minuto, 28
ciclos de 59°C por 1 minuto, 28 ciclos a 72°C por 1 minuto e 1 ciclo de 60°C por 60 minutos. Na
segunda parte, coloque off no Hot Lid, selecione tube e 50 µl no volume da amostra.

RESULTADOS E DISCUSSÕES

A prática para a realização da técnica da RT-PCR visa ao estudo e identificação das moléculas
de RNA por meio de sua conversão inicial em DNA complementar e amplificação em
quantidades suficientes de qualquer sequência dessa molécula. A técnica se aplica a diversas
áreas das ciências biológicas e médicas, como, por exemplo, na detecção da expressão de
genes pelo estudo de RNAs mensageiros, podendo ter direcionamentos para o diagnóstico de
patologias, farmacogenética, melhoramento genético e criação de organismos transgênicos,
identificação de agentes infecciosos, dentre outros. Qualquer sequência específica de RNA
poderá ser utilizada a partir de diversos materiais biológicos, como sangue, urina, cabelo,
tecidos e patógenos.

REGISTRO FOTOGRÁFICO

Durante a prática, realize um registro fotográfico em que você aparece executando a prática.
Você pode tirar um selfie.
REFERÊNCIAS

NOLAN, T.; HANDS, R.; BUSTIN, S. Quantification of mRNA using real-time RT-PCR. Nat Protoc 1,
1559-1582, 2006. Disponível em: https://doi.org/10.1038/nprot.2006.236. Acesso em: 16 fev.
2021.