Aplicações Biológicas da reação em cadeia da polimerase.

REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE

A técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR) possibilita a

amplificação rápida, prática e econômica de bilhões de cópias de uma determinada
sequência de DNA de interesse em um tubo de ensaio. Baseada na replicação
natural do DNA, essa tecnologia tem diversas aplicações, desde a pesquisa básica
de genes e genomas até a identificação de indivíduos, testes de paternidade,
diagnóstico molecular, produção de enzimas de interesse biotecnológico,
paleogenética e projetos de sequenciamento de genomas de diferentes organismos.
Mesmo tendo sido criada há quase 40 anos, a PCR continua sendo uma ferramenta
essencial nos laboratórios de genética molecular ao redor do mundo devido ao seu
baixo custo e aos aperfeiçoamentos que ocorreram ao longo dos anos, culminando
na versão mais recente e altamente promissora, a PCR digital. 1

A PCR convencional requer o uso de um alvo de DNA, um par de primers

sintéticos de oligonucleotídeos posicionados em ambos os lados do alvo, uma DNA
polimerase termoestável, como a Taq polimerase, e nucleotídeos. Com o auxílio de
um termociclador, o processo de amplificação passa por três fases distintas em cada
ciclo: a desnaturação do DNA de dupla hélice em fitas simples separadas, a
hibridização dos primers à sequência do DNA-alvo e à amplificação do DNA a partir
dos primers pela DNA polimerase, criando um novo DNA de dupla hélice com uma
fita antiga e uma nova. As fitas recém-sintetizadas servem como modelo para a
próxima etapa de amplificação, resultando em um aumento exponencial de milhões
de vezes na quantidade de DNA em apenas 20 ciclos.

TIPOS DE REAÇÃO DE PCR

A PCR é altamente versátil, permitindo diversas modificações que ampliam

sua aplicabilidade na análise de diferentes tipos de amostras. Dentre as principais
técnicas derivadas das modificações da PCR, destacam-se o PCR multiplex, que
possibilita a amplificação simultânea de múltiplas sequências de DNA em uma única
reação, e o PCR em tempo real, que permite a detecção quantitativa e em tempo
real da amplificação do DNA-alvo durante o processo de PCR, possibilitando a
análise precisa da expressão gênica, a identificação de mutações e outras
aplicações em diagnóstico molecular.(1)

PCR EM TEMPO REAL

A PCR em tempo real (Real-Time PCR) é uma técnica semi-quantitativa

(qPCR) altamente sensível, capaz de fornecer resultados em um curto espaço de
tempo. Amplamente utilizada na área médica, a tecnologia está disponível
globalmente para atender à necessidade de testes diagnósticos eficientes e rápidos.
Atualmente, existem vários protocolos e kits comerciais disponíveis para identificar
uma ampla gama de patógenos de importância médica. A técnica permite a detecção
direta dos produtos da PCR durante a fase exponencial da reação, combinando a
amplificação e a detecção em uma única etapa.

PCR MULTIPLEX

A PCR multiplex é uma técnica de amplificação de DNA que permite a

amplificação simultânea de várias regiões distintas de DNA em um único tubo de
reação, por meio da utilização de diferentes pares de primers específicos para cada
loco a ser identificado. A viabilidade do diagnóstico através da PCR multiplex
depende da similaridade da temperatura de anelamento dos primers e da distinção
dos tamanhos dos fragmentos de DNA produzidos.

A técnica PCR (Reação em Cadeia da Polimerase) é uma das mais

importantes e revolucionárias técnicas na biologia molecular. Ela permite amplificar
quantidades muito pequenas de DNA em grandes quantidades, o que é fundamental
para a identificação de genes específicos, diagnóstico de doenças genéticas e
infecciosas, estudos evolutivos, produção de proteínas recombinantes e outras
aplicações biotecnológicas. Além disso, a técnica PCR é relativamente rápida e fácil
de ser realizada, tornando-se uma ferramenta essencial em laboratórios de pesquisa
e diagnóstico em todo o mundo.

As diversas aplicações biológicas da técnica de PCR têm grande importância

na ciência por permitirem amplificar e identificar sequências específicas de DNA de
interesse, possibilitando uma série de estudos e aplicações práticas. Algumas das
principais aplicações biológicas da PCR incluem:

- Identificação de patógenos: a PCR é utilizada para identificar patógenos

causadores de doenças, possibilitando um diagnóstico mais rápido e preciso.

- Estudos genéticos: a PCR é utilizada para amplificar genes e regiões

específicas do genoma, possibilitando a identificação de variações genéticas e
estudos de genética populacional.

- Testes de paternidade: a PCR é utilizada para identificar variações genéticas

em regiões específicas do DNA, permitindo a determinação da paternidade.

- Medicina forense: a PCR é utilizada para amplificar regiões específicas do

DNA a partir de amostras biológicas encontradas em cenas de crime, possibilitando
a identificação de suspeitos.

- Paleogenética: a PCR é utilizada para amplificar e sequenciar DNA a partir

de fósseis e outras amostras antigas, permitindo estudos de evolução e história da
vida na Terra.

- Biologia molecular: a PCR é utilizada para a amplificação de genes e

sequências específicas de DNA para a produção de proteínas recombinantes,
enzimas e outros produtos biotecnológicos.

Infográfico
 Claro, aqui estão algumas informações sobre as aplicações biológicas da
técnica de PCR que podem ser úteis para um infográfico:

1. Diagnóstico molecular: a PCR é amplamente utilizada na detecção de

patógenos, incluindo vírus, bactérias e fungos. Isso pode ser útil no diagnóstico de
doenças infecciosas em humanos, animais e plantas.

2. Identificação de mutações genéticas: a PCR pode ser usada para amplificar

regiões específicas do DNA, permitindo a detecção de mutações que podem estar
associadas a doenças genéticas.

3. Análise de expressão gênica: a PCR em tempo real (qPCR) permite

quantificar a expressão de genes específicos em amostras biológicas, o que pode
ajudar a entender os mecanismos moleculares subjacentes a diferentes processos
biológicos.

4. Paleogenética: a PCR pode ser usada para amplificar o DNA antigo,

permitindo a análise de espécies extintas e o estudo da evolução.

5. Identificação de paternidade: a PCR pode ser usada para comparar o DNA

de um indivíduo com o de seus pais, permitindo a identificação de paternidade.

6. Sequenciamento de DNA: a PCR é frequentemente usada para amplificar

regiões específicas do DNA para sequenciamento posterior, permitindo a análise de
genomas completos de organismos.
 7. Biotecnologia: a PCR pode ser usada para clonar genes específicos,
produzir proteínas recombinantes e modificar geneticamente organismos.

Essas são apenas algumas das aplicações biológicas da PCR, mas ilustram a
ampla gama de usos que a técnica tem na ciência e na medicina.
 REFERÊNCIAS

De Oliveira, E. H. D., & Pereira, T. C. (2019). A Reação em Cadeia da

Polimerase (PCR). Genética na Escola, 14(2), 88-97. 1

1. Joaquim HAAS D, Caroline Doyle TORRES A. APLICAÇÕES DAS TÉCNICAS DE

PCR NO DIAGNÓSTICO DE DOENÇAS INFECCIOSAS DOS ANIMAIS.