Técnicas e aplicações da

biotecnologia
Reação em cadeia da
polimerase(PCR)
Trabalho realizado por:
Lourenço Pena
Regina Amorim
No âmbito da disciplina de Biologia.
Professor responsável: Alberto Sousa
Escola Secundária c/ 3 ciclo de Ponte da Barca
Introdução:

Neste trabalho vamos abordar a temática de engenharia genética, mais

precisamente a técnica de Reação em Cadeia da Polimerase (do inglês,
Polimerase Chain Reaction), usualmente designada pela abreviatura “PCR”.

Esta técnica foi desenvolvida nos anos 80, mais especificamente no ano de
1983, por Kary Mullis, e apresentada à comunidade científica em 1985.
Descrição Sumária do PCR

É uma técnica, in vitro rápido, sensível e versátil que

se baseia no processo de replicação de DNA e
permite fazer várias cópias a partir de um só
fragmento da molécula.

Esta técnica possibilita novas estratégias de análise

de genes no âmbito da tecnologia de DNA
recombinante.

Fig.1 Molécula de DNA

Índice:

➢ Descrição Sumária do PCR

➢ Componentes necessários
➢ Fases do PCR
➢ Aplicações
➢ Teste RT-PCR- COVID19
➢ Particularidades da técnica
➢ Resumo sinóptico do tema
➢ Conclusão
Componentes necessários :

Thermal cycler

Fig.2 PCR
DNA Polimerase:

Nas primeiras iniciativas para amplificar fragmentos de

DNA utilizou-se a enzima DNA polimerase da Escherichia
coli, que possui atividade máxima a 37°C. Esta enzima
deveria ser adicionada a cada ciclo pois o passo de
desnaturação inativa a enzima.
Um importante avanço ocorreu com a descoberta da
enzima Taq DNA polimerase (Saiki et al, 1988) oriunda da
bactéria Thermus aquaticus que tolera altas
temperaturas. A Taq DNA polimerase possui atividade
ótima a 72°C e permanece razoavelmente estável mesmo Fig.3 Bactéria Thermus aquaticus
a 95°C e com isto, a enzima é adicionada somente no
início do processo .
Fases do PCR:

A técnica de PCR envolve três etapas que se

repetem ciclicamente:

● Desnaturação
● Emparelhamento
● Polimerização

Fig.4 Técnica de PCR- um ciclo

Fases do PCR: Desnaturação

➢ É a primeira etapa desta técnica e consiste

na incubação do DNA, com o objetivo de
separar as cadeias simples.
➢ Para tal, coloca-se o DNA molde a altas
temperaturas, cerca de 95ºC, o que faz com
que se quebrem as ligações de hidrogénio
entre as bases complementares das duas
cadeias. Fig.5 Fase desnaturação

➢ Durante este processo, as ligações entre as

moléculas de fosfato e desoxirribose
permanecem intactas.
Fases do PCR: Emparelhamento

➢ É a segunda etapa desta técnica e decorre

após a separação das cadeias simples.
Consiste no emparelhamento dos primers
(iniciadores), que flanqueiam o DNA, as
extremidades da sequência alvo, marcando Fig.6 Fase de Emparelhamento
onde deverá ocorrer a amplificação do DNA.
Para que os primers se liguem e iniciem a
síntese de uma nova molécula complementar
à cadeia molde, é necessário ocorrer uma
diminuição da temperatura para cerca de
55ºC.
Fases do PCR: Polimerização

➢ É a última etapa desta técnica e consiste na

síntese de DNA feita pela Taq polimerase a
elevadas temperaturas, cerca de 72º. Esta
enzima vai adicionar os dNTPs, a partir das
extremidades dos primers, tendo como molde
a outra cadeia de DNA.
➢ A Taq polimerase utiliza os dNTPs presentes
Fig.7 Fase de polimerização
na solução para incorporar os nucleótidos
complementares à sequência alvo.
Fases do PCR: Ao fim dos ciclos

➢ O resultado de cada ciclo é a grande amplificação Amplificação

das sequências de Dna delimitadas pelos dois
primers usados na reação. ciclos nº de
moléculas
➢ Repetem-se os ciclos o número de vezes 1 0
necessários até obter o número de cópias
pretendido. 2 0

➢ A partir do terceiro ciclo as moléculas são 3 0

duplicadas levando a uma amplificação 4 4
exponencial do DNA, em que cada n ciclos leva a
produção de 2n moléculas de DNA. 5 8
Tab.1- Número de moléculas de DNA
obtidas por PCR
Particularidades da técnica:

Apesar das várias vantagens desta técnica, a utilização de PCR abrange alguns problemas.
Como:

➔ A taq polimerase não consegue corrigir erros comuns às DNA polimerases e apesar
de ser com baixa frequência introduz alguns erros. Erros esse que serão tanto mais
amplificados quanto mais cedo ocorrerem no ciclo.
➔ A contaminação. Se a reação de PCR for contaminada com DNA estranho este pode
ser emparelhado com os primers e ser amplificado.
Aplicações:

● Identificação de bactérias, vírus ou fungos patogénicos (Testes COVID-19);

● Testes de paternidade;
● Diagnóstico de doenças hereditárias;
● Estudos forenses;
● Identificação de espécies atuais, estudos de evolução biológica e de espécies
extintas.
Teste RT-PCR - Covid-19

Durante a pandemia de 2019, o RT-PCR, uma

variação da técnica de PCR, era o teste de
preferência no diagnóstico da covid-19 uma
vez que este procura diretamente a
coronavírus, SARS-COV-2 ( um vírus de RNA),
nas vias respiratórias, possui uma
especificidade na identificação simultânea
de vários genes do vírus e pelo facto de se Fig.8 Técnica de PCR
caracterizar por ser um processo muito
rápido.
Teste RT-PCR - Covid-19
➢ A técnica de RT-PCR é assim apelidada uma
vez que recorre previamente à enzima
transcriptase reversa (RT) e é usada em
amostras de RNA.
➢ Esta enzima permite uma cópia de cDNA* a
partir de uma cadeia simples de RNA.
➢ Este procedimento é usado em laboratório
para verificar se o paciente está infectado Fig.9 Técnica utilizada na identificação
da covid-19
com o vírus. Para tal utiliza-se primers
específicos do género da proteína spike.

*DNA complementar-DNA sintetizado a partir de um molde de

RNA mensageiro, cujos intrões já foram removidos.
 Reação em cadeia de
polimerase(PCR)

Resumo sinóptico É uma técnica usada para fazer muitas cópias de um região
do tema : específica de DNA

Materiais

DNA polimerase dNTPs Solução tampão Termociclador

DNA molde Primers

Etapas

Desnaturação Emparelhamento Polimerização

○ separação das cadeias ○ Emparelhamento dos primers às
simples do DNA cadeias simples ○ Síntese de DNA

Correspondem a 1 ciclo
Ao longo dos ciclos
Amplificação das
sequências de DNA
Resumo sinóptico do tema:
continuação…
Amplificação das
sequências de DNA

Aplicações

○ Testes de paternidade ○ Estudos forenses ○ Diagnóstico de ○ Identificação de

doenças hereditárias; bactérias, vírus
ou fungos
patogénicos
Conclusão:

➢ Em suma, o PCR é um processo rápido e de grande sensibilidade

que está bastante presente no nosso quotidiano.

➢ Esta técnica levou a inúmeros progressos na área da saúde

humana, na genética forense, entre outros e, por isso é de grande
interesse na sociedade e abordá-la contribui para a divulgação
da ciência e para o desenvolvimento.
Fontes:

➢ Manual Matias Osório - BioFOCO - Biologia 12oano, 1a edição, areal, 2023.

➢ Videira Arnaldo- Engenharia Genética- Princípios e Aplicações, 2ª edição,Lidel,2011
➢ https://www.bio.fiocruz.br/index.php/br/noticias/1785-quais-exames-sao-usados-par
a-o-diagnostico-da-covid-19 Consultado em: 21/02/2024
➢ https://www.igenomix.com.br/blog/o-que-e-a-tecnica-de-rt-qpcr-para-deteccao-dos-c
asos-de-covid-19/ Consultado em: 21/02/2024
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