2º Revisão de Biologia Molecular

01) Etapa 1 : melting ou desnaturação

Etapa 2 : annealing ou anelamento ou hibridização
Etapa 3 : extension ou extensão

02) Lise das membranas

Purificação do DNA
Precipitação do DNA
Reidratação do DNA

03) tipos de pcr:

Q-pcr
RT- pcr
Multiplex
Nested PCR

04) A eletroforese é um método habitualmente usado para separar e também purificar

macromaléculas , principalmente ácidos nucleicos e proteinas. Fatores que influenciam a
eletroforese : tamanho e conformação do DNA, concentração de agarose, presença do brometo
de etídeo no gel, voltagem e tipo de tampão de eletroforese aplicada

05)•Eletroforese em gel de agarose: Este é o tipo mais comumente utilizado e é ideal para a
separação de grandes moléculas, como DNA e RNA.
•Eletroforese de gradiente: Esta técnica envolve a separação de moléculas com base na sua
concentração. Esta técnica é ideal para a separação de proteínas ou outras macromoléculas de
baixo peso molecular.
•Eletroforese em gel de poliacrilamida: Esta é uma técnica usada para separar moléculas com
base no seu tamanho e carga elétrica. É utilizado principalmente para a separação de moléculas
peptídicas e proteínicas.

06) Sequenciamento de DNA é o processo de determinação da sequência de bases

nucleotídicas (As, Ts, Cs, e Gs) em um pedaço de DNA.
Os tipos são:

1.Método Sanger de sequenciamento, o DNA alvo é copiado muitas vezes, produzindo

fragmentos de comprimentos diferentes. Nucleotídeos “terminadores de cadeia” fluorescentes
marcam os finais dos fragmentos e permitem que a sequência seja determinada.
2.Pirosequenciamento é uma nova técnica da Biologia Molecular, na qual a síntese de DNA
ocorre através de um complexo de reações que inclui enzimas (ATP sulfurilase e luciferase) e
substratos (adenosina 5’ fosfossulfato e luciferina). O grupo pirofosfato, liberado durante a
adição de um nucleotídeo, resulta na produção de luz detectável.
3.Sequenciamento em tempo real de molécula única utiliza um guia de onda de modo zero
(ZMW). Uma única enzima DNA polimerase é afixada na parte inferior de um ZMW com uma
única molécula de DNA como modelo.

07) A Engenharia Genética constitui um conjunto de técnicas de análises moleculares que

permitem estudos de caracterização, expressão e modificações do material genético (DNA e
RNA) dos seres vivos. São inúmeros os exemplos em diversas áreas como a produção de
vacinas, a terapia gênica, a transgenia, entre outras. Na agropecuária, a Engenharia Genética
também encontra sítio para sua prática, desenvolvendo novos processos.

08) A terapia gênica pode tratar diferentes tipos de condições. Algumas aplicações são:
• Doenças hereditárias e raras
• Doenças multifatoriais
• Câncer
• Doenças crônicas

09) 1. O primeiro passo é isolar um fragmento de DNA, que contém o gene de interesse. Lembre-
se que cada gene origina uma proteína.

2. O gene de interesse, agora isolado, é colocado em um meio com um fragmento de DNA

bacteriano circular, o plasmídio e as enzimas de restrição.

3. O plasmídio bacteriano possui sua capacidade de inserir um fragmento de DNA externo ao seu
próprio genoma.

4. As enzimas de restrição vão cortar uma determinada região do plasmídeo, onde será ligado ao
fragmento de DNA de interesse.

5. O fragmento de DNA isolado irá unir-se com o DNA bacteriano, através das enzimas de
ligação, ligases. Nesse momento, é originado o DNA recombinante.

6. O próximo passo é introduzir o DNA recombinante em bactérias vivas ou diretamente em meio

de cultura com as mesmas.

7. Após a incorporação do DNA recombinante, as bactérias serão capazes de produzir um nova

proteína, conforme os genes do fragmento de DNA isolados inicialmente.
Um dos vetores mais utilizados nos processos de clonagem molecular é o denominado
bacteriófago , o qual comporta-se como um vírus da E. coli.