UNIVERSIDADE FEDERAL DE MINAS GERAIS

ESCOLA DE ENFERMAGEM
FUNDAMENTOS DE GENÉTICA
Anna Luíza Augusto Moreira N° de matrícula: 2023093940
ESTUDO DIRIGIDO 3

1) Quais são os passos básicos da clonagem molecular?

R: Os passos da clonagem molecular são: isolar o gene de interesse (produção de
fragmentos do DNA de fontes distintas; unir o gene ao vetor (RNA Recombinante) e
transformar células bacterianas com a molécula recombinante de modo que elas se
repliquem.
2) O que são enzimas de restrição?
R: Enzimas de restrição são ferramentas fundamentais na engenharia genética, pois
permitem a criação de novas moléculas de DNA em laboratório cortando e rearranjando
pedaços de informações genéticas, elas têm a capacidade de reconhecer sequências de
pares de bases nitrogenadas em moléculas de DNA e as cortam em pontos específicos.
Cada tipo de enzima de restrição reconhece e retira uma série de nucleotídeos (com 4 ou 6
pares de bases). O local onde a molécula de DNA é clivada pela enzima recebe o nome de
sítio de restrição. Além disso, essas enzimas têm aplicações importantes, por exemplo, na
medicina forense.
3) Descreva as ferramentas usadas em clonagem molecular aprendidas na aula.
R: - Enzimas de restrição: produzidas naturalmente por bactérias como mecanismo de
defesa e são essenciais para engenharia genética, cortam o DNA em pontos específicos,
baseando-se na sequência de nucleotídeos.
- DNA Ligase: responsável pela união dos fragmentos de DNA depois da retirada dos
iniciadores pela DNA polimerase.
- Vetores: moléculas de DNA em que um gene é inserido para a construção da molécula de
DNA recombinante. Muitas vezes os plasmídeos (DNA circular das bactérias) são utilizados
como vetores para clonar o DNA.
- Eletroforese: método que permite a separação e análise de macromoléculas e fragmentos
através do tamanho e polaridade delas.
- Reação em cadeia da Polimerase (PCR): técnica usada para amplificar regiões
específicas de DNA, aumentando o número de cópias dessas regiões. A PCR é baseada na
capacidade da enzima DNA polimerase de sintetizar uma nova fita de DNA complementar e
uma fita molde.
4) O que é plasmídeo? Qual a função do plasmídeo na natureza? Qual a função do plasmídeo na
clonagem molecular?
R: O plasmídeo é uma molécula de DNA bacteriano circular que possui a capacidade
de se replicar de forma independente, carregam genes de resistência a antibióticos. Na
clonagem molecular são usados como vetores, transportando genes ou fragmentos de
um DNA a ser incorporado e clonado dentro da célula hospedeira. Os plasmídeos podem
ser modificados para carregar novos genes, ou seja, são usados para multiplicar ou
expressar genes de interesse.
5) Descreva as características do plasmídeo bacteriano e a diferença do plasmídeo de clonagem
para plasmídeo de expressão.
R: Os plasmídeos bacterianos são segmentos de DNA circular com replicação autônoma.
Plasmídeos de clonagem são usados na inserção do gene ou fragmento de interesse em
uma célula hospedeira. Plasmídeos de expressão são otimizados para a produção de
 proteínas na célula hospedeira, eles têm sequências regulatórias que controlam a
transcrição e tradução do gene inserido, permitindo que a proteína seja produzida.
6) O que é proteína recombinante? Como obter uma proteína recombinante?
R: Proteína recombinante: é produzida a partir da expressão de uma molécula de DNA
recombinante em um sistema de expressão adequado. Para obter a proteína recombinante
é necessária a clonagem do gene e a expressão da proteína.
7) Conceituar:
R: - DNA Recombinante: molécula de DNA produzida a partir de uma combinação de
sequências de DNA provenientes de diferentes fontes, geralmente de espécies diferentes
❖ Transformação: fenômeno em que algumas células adquirem o material genético de
outras (sofrem alteração genética a partir da introdução de outro (DNA).
- DNA Ligase: enzima que ajuda a unir cadeias de DNA catalisando a formação de
uma ligação fosfodiéster. Ela une os fragmentos de Okazaki depois da retirada dos
iniciadores pela DNA polimerase.
- Gel de agarose: matriz em que é aplicada a amostra que permite a separação de
moléculas, sua estrutura possibilita a formação de um gel resistente.
- Gel de proteínas: gel usado na eletroforese para separação de proteínas.
- PCR: técnica usada para fazer cópias de uma região específica do DNA.
- Eletroforese: usado para separação e purificação de macromoléculas (são
submetidas a um campo elétrico migrando para um polo positivo ou negativo
dependendo de sua carga).
8) Como podemos selecionar bactérias que contêm DNA recombinante de interesse? Descreva.
R: As bactérias são selecionadas a partir de uma preparação, elas são misturadas com o
DNA recombinante que são produzidas ao inserir um fragmento de DNA que contém um
gene de interesse no fragmento de DNA bacteriano (plasmídeo). Em seguida, elas sofrem
um choque térmico que faz com que algumas incorporem o plasmídeos (eles têm um gene
de resistência para antibióticos) e formam colônias. Depois desse processo, as colônias são
verificadas para identificação do plasmídeo correto, uma colônia contendo o plasmídeo
correto cresce em volume e é usada para a produção de plasmídeo ou proteína.
9) Quais são os impactos da produção de proteínas recombinantes na indústria farmacêutica e
médica?
R: Destre os impactos da produção de proteínas recombinantes estão o desenvolvimento
de fármacos destinados ao tratamento de várias doenças; crescimento significativo da
indústria farmacêutica; fins terapêuticos; estudos; segurança e efeitos colaterais reduzidos;
outras aplicações diversas (diagnósticos, tratamento de doenças genéticas, entre outras).