Respostas do Estudo dirigido de genética - (2 reais pra

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1º)Descreva sucintamente o mecanismo de Metilação do DNA e sua

importância na regulação gênica em eucariotos- É um processo
epigenético que envolve a adição de grupos metil à cadeia de DNA, a metilação
ocorre quando um grupo metil é adicionado ao carbono 5 da citosina,
transformando-a em Guanina. Desempenha um papel essencial na regulação gênica
em eucariotos, influenciando a expressão dos genes e contribuindo para a
estabilidade e plasticidade do genoma.

2º) Descreva sucintamente o mecanismo de microRNA e sua

importância na regulação gênica em eucariotos- Diferentemente da
metilação do DNA, os miRNA inativam genes sem alterar a estrutura do DNA. O
miRNA quando incorporado ao complexo RISC, procura por sequências
complementares em moléculas de mRNA alvo, quando o miRNA encontra um mRNA
alvo com complementaridade, ele induz a supressão da expressão gênica através de
diferentes mecanismos, como inibição da tradução do mRNA ou degradação do
mRNA.

3º) Explique por que no genoma humanos há menos genes,

aproximadamente 32.000 genes, que proteínas, aproximadamente
100.000 proteínas?- Durante o processamento do RNA, os genes podem sofrer
splicing alternativo, que é um mecanismo pelo qual diferentes combinações de
éxons podem ser unidos, resultando em múltiplas variantes de RNA mensageiro
(mRNA) a partir de um único gene. Isso permite a produção de proteínas diferentes
a partir de um único gene.
Algumas proteínas podem desempenhar múltiplas funções em diferentes
contextos celulares. Portanto, uma única proteína pode estar envolvida em várias
vias metabólicas ou processos biológicos, ampliando a funcionalidade do genoma
humano.
A regulação da expressão gênica é complexa e envolve uma rede intricada de
fatores de transcrição, modificadores epigenéticos e mecanismos de regulação
pós-transcricional, como os miRNAs mencionados anteriormente. Esses
mecanismos regulatórios permitem uma ampla gama de respostas adaptativas e
ajustes finos na expressão gênica sem a necessidade de um gene individual para
cada proteína específica.
4º) Conceitue alelo, SNP, desnaturação do DNA, renaturação do DNA,
curva de Melting, primers, dNTPs, Transcriptase reversa, Taq
Polimerase, Vetores, inserto, operon Lac.
Alelo: Um alelo é uma das diferentes formas de um gene. Pode haver diferentes
alelos de um gene em um indivíduo ou em uma população, que podem resultar em
variações nas características hereditárias.

SNP: (Polimorfismo de Nucleotídeo Único): É uma variação genética comum que

ocorre quando uma única base do DNA difere entre os indivíduos. SNPs são usados
em estudos genéticos para identificar associações com doenças ou características
específicas.

Desnaturação do DNA: A desnaturação do DNA refere-se ao processo no qual as

duas cadeias de DNA de uma dupla hélice se separam, interrompendo as pontes de
hidrogênio entre as bases nitrogenadas. Isso ocorre sob condições de alta
temperatura ou exposição a produtos químicos, levando à separação das fitas de
DNA.

Renaturação do DNA: A renaturação do DNA ocorre quando as fitas de DNA

previamente desnaturadas se reconectam e se reassociam para formar uma dupla
hélice novamente. Esse processo pode ocorrer quando as condições são reduzidas
de temperatura ou removidos os fatores que causaram a desnaturação.

Curva de Melting: também conhecida como curva de desnaturação, é um gráfico

que representa a variação da absorbância ou fluorescência do DNA ao longo de uma
faixa de temperatura. A curva de melting mostra a temperatura na qual metade do
DNA está desnaturado e pode fornecer informações sobre a estabilidade e a
composição do DNA.

Primers: Os primers são pequenos fragmentos de DNA sintetizados que fornecem

uma sequência inicial complementar ao local de interesse no DNA durante a
amplificação por reação em cadeia da polimerase (PCR) ou em outras técnicas de
amplificação de DNA. Eles atuam como iniciadores para a síntese do novo DNA
complementar.

dNTPs: São os blocos de construção utilizados na síntese do DNA. São moléculas

que contêm uma base nitrogenada (A, T, C ou G), uma pentose desoxirribose e três
grupos fosfato. Os dNTPs são incorporados à nova cadeia de DNA durante a
replicação ou amplificação.
Transcriptase Reversa: É uma enzima utilizada para converter o RNA em DNA
complementar (cDNA). A transcriptase reversa é amplamente utilizada em técnicas
como a reação em cadeia da transcriptase reversa (RT-PCR) para a detecção e
amplificação de RNA.

Taq Polimerase: É uma enzima de DNA polimerase termoestável isolada da bactéria

Thermus aquaticus. A Taq polimerase é amplamente utilizada na PCR, pois pode
suportar as altas temperaturas necessárias para a desnaturação do DNA durante o
ciclo de amplificação.

Vetores: São moléculas de DNA usadas para transportar e replicar fragmentos de

DNA em células hospedeiras, como bactérias ou células eucarióticas. Os vetores
são amplamente utilizados em técnicas de clonagem e engenharia genética.

Inserto: Refere-se ao fragmento de DNA que é inserido em um vetor durante o

processo de clonagem. O inserto pode conter um gene específico, uma sequência
regulatória ou qualquer outra sequência de interesse.

Operon Lac: É um exemplo clássico de um operon em bactérias, que consiste em

um conjunto de genes relacionados envolvidos na metabolização do lactose. O
operon Lac inclui genes como o gene da lactose permease, beta-galactosidase e um
gene regulatório chamado gene lacI. Ele ilustra o conceito de regulação gênica em
resposta a um substrato específico, no caso, a lactose.

5º) Conceitue a tecnologia do DNA recombinante- Envolve a manipulação e

combinação de diferentes segmentos de DNA de fontes diferentes para criar novas
moléculas de DNA. Essa técnica permite a introdução de genes específicos em
organismos, transferindo características desejáveis de uma espécie para outra.
● O primeiro passo é isolar o gene de interesse a partir de uma fonte doador de
DNA. Um vetor de clonagem é um veículo de transporte de DNA usado para
inserir o gene de interesse.
● Geralmente, o vetor é um plasmídeo bacteriano modificado que pode ser
replicado em uma célula hospedeira, como uma bactéria.
● Enzimas de restrição são usadas para cortar o vetor de clonagem e o gene de
interesse em locais específicos. As extremidades cortadas são
complementares, permitindo a união das duas moléculas de DNA.
● O gene de interesse é ligado ao vetor de clonagem usando a enzima ligase,
que une as extremidades cortadas do vetor e do gene, formando uma
molécula de DNA recombinante.
● A molécula recombinante é então introduzida em uma célula hospedeira,
geralmente uma bactéria, por meio de um processo chamado transformação.
 As células hospedeiras são capazes de replicar o vetor recombinante,
resultando na produção de múltiplas cópias do gene de interesse.

6º) Descreva sucintamente como proceder para produção de insulina a

partir da tecnologia do DNA recombinante.
● O gene da insulina é isolado a partir de células produtoras de insulina, como
as células beta do pâncreas de um organismo doador.
● O gene da insulina é clonado, ou seja, amplificado usando a técnica de reação
em cadeia da polimerase (PCR) ou outras técnicas de amplificação de DNA.
● Um vetor de clonagem é preparado para receber o gene da insulina.
Geralmente, um plasmídeo bacteriano é usado como vetor.
● O gene da insulina é ligado ao vetor de clonagem usando enzimas de
restrição e a enzima ligase. As extremidades do gene e do vetor são
complementares, permitindo sua união.
● A molécula recombinante contendo o gene da insulina é introduzida em
bactérias, como Escherichia coli, por meio de um processo chamado
transformação.
● As bactérias hospedeiras são capazes de replicar o vetor recombinante
contendo o gene da insulina.
● As bactérias transformadas começam a produzir insulina recombinante à
medida que replicam o vetor recombinante contendo o gene da insulina. A
insulina recombinante purificada é formulada em medicamentos para o
tratamento da diabetes.

7º) Descreva o vetor pUC-18 explicando a função de cada região do

referido vetor- O vetor pUC-18 é um plasmídeo amplamente utilizado em estudos
de biologia molecular e clonagem de DNA.
● Origem de replicação (ori): A região de origem de replicação é responsável
por iniciar a replicação do plasmídeo dentro da célula hospedeira.
● Gene de resistência a antibiótico (amp): O pUC-18 contém o gene amp, que
confere resistência à ampicilina, um antibiótico comumente usado para
selecionar células transformadas com o plasmídeo. As células hospedeiras
que não possuem o plasmídeo serão mortas na presença de ampicilina,
enquanto as células que receberam o plasmídeo resistirão ao antibiótico.
● Sítios de restrição múltiplos (polylinker): O polylinker, também conhecido
como sítio de clonagem múltipla, é uma região onde estão presentes diversos
sítios de restrição. Esses sítios de restrição são sequências de DNA
reconhecidas por enzimas de restrição, que podem ser usadas para cortar o
plasmídeo e inserir fragmentos de DNA.
 ● Promotor lacZ: O vetor pUC-18 possui um promotor do operon lacZ, que é
responsável pela transcrição do gene lacZ. Esse promotor pode ser utilizado
para controlar a expressão de genes inseridos no plasmídeo.
● Gene lacZ: O gene lacZ codifica a enzima beta-galactosidase, que é
frequentemente utilizada como um marcador para identificar células
transformadas com o plasmídeo. A enzima beta-galactosidase é capaz de
clivar substratos específicos, produzindo um produto visível, como a
mudança de cor do meio de cultura.
● Terminador: A região de terminação é responsável por sinalizar o final da
transcrição do gene lacZ. Ela garante que a enzima beta-galactosidase seja
produzida em níveis apropriados.

8º) Explique os fundamentos dos resultados observados em protocolo

da tecnologia do DNA recombinante:
a) Após aplicação do método de DNA recombinante foram visualizadas
apenas colônias de bactéria de cor branca. A visualização de colônias de
bactéria de cor branca após a aplicação do método de DNA recombinante pode
estar relacionada a uma clonagem bem-sucedida do gene de interesse no vetor, mas
a expressão desse gene não ocorreu. A coloração branca pode indicar que a enzima
beta-galactosidase não está sendo produzida ou está inativa. Isso pode ocorrer se o
gene de interesse estiver inserido de forma incorreta no vetor, se houver mutações
no gene lacZ ou se houver problemas na regulação da expressão gênica.

b) Após aplicação do método de DNA recombinante foram visualizadas

apenas colônias de bactéria de cor azul. A visualização de colônias de
bactéria de cor azul após a aplicação do método de DNA recombinante indica uma
clonagem bem-sucedida do gene de interesse no vetor e a expressão funcional do
gene lacZ, que codifica a enzima beta-galactosidase. A coloração azul é um
resultado comum quando a enzima está ativa e capaz de clivar o substrato
específico, produzindo um produto visível. Portanto, as colônias de cor azul indicam
que o gene de interesse foi corretamente inserido no vetor e está sendo expresso
nas células bacterianas transformadas.

9º) O que a reação em cadeia da polimerase (PCR) e qual o seu

fundamento? - A reação em cadeia da polimerase (PCR) é uma técnica que
permite a produção de milhões de cópias de um fragmento de DNA em um curto
período de tempo. O fundamento da PCR baseia-se em um ciclo repetitivo de
aquecimento e resfriamento da reação contendo o DNA alvo, primers específicos,
nucleotídeos e uma enzima chamada DNA polimerase. O processo é divido em 3
fases cíclicas, Desnaturação, anelamento dos primers e extensão.
10º) Descreva os componentes da PCR explicando a função de cada
componente.
● DNA alvo: É o fragmento de DNA que se deseja amplificar. Pode ser obtido a
partir de uma amostra biológica, como sangue, tecido ou cultura de células.
● Primers: São pequenos fragmentos de DNA sintetizados em laboratório que
se ligam especificamente às sequências de interesse no DNA alvo. Os
primers delimitam a região que será amplificada durante a PCR.
● Nucleotídeos (dNTPs): São os blocos de construção do DNA, compostos por
adenina (A), citosina (C), guanina (G) e timina (T). Durante a PCR, os dNTPs
são adicionados à reação para que a DNA polimerase possa sintetizar novas
cadeias de DNA complementares ao DNA alvo.
● DNA polimerase: É uma enzima responsável pela síntese do DNA. Na PCR, a
enzima mais comumente utilizada é a DNA polimerase Taq, que é
termoestável e resistente ao calor, permitindo que ela funcione em altas
temperaturas.
● Solução tampão: É uma solução que mantém o pH estável e fornece as
condições ideais para a atividade da DNA polimerase. Também contém íons
necessários para a estabilidade da enzima e para o anelamento dos primers
ao DNA alvo.
● MgCl2: O íon magnésio (Mg2+) é essencial para a atividade da DNA
polimerase, pois atua como um cofator. A concentração adequada de Mg2+
na reação é importante para garantir a eficiência da PCR.
● Água: A água é adicionada para completar o volume da reação e fornecer o
ambiente aquoso necessário para as reações químicas ocorrerem.

11º) Qual o fundamento do método PCR-SSPC?- É uma variação da reação

em cadeia da polimerase (PCR) que é usada para detectar polimorfismos de
conformação de uma única fita de DNA. Esses polimorfismos podem estar
relacionados a mutações ou variações genéticas que afetam a estrutura do DNA. O
fundamentado do método PCR-SSCP baseia-se na detecção de diferenças na
conformação das fitas de DNA devido a variações em sua sequência. No entanto, é
importante notar que a interpretação dos padrões de migração no gel pode ser
subjetiva e requer uma análise cuidadosa para identificar corretamente os
polimorfismos de interesse.

12º) Qual o fundamento do método PCR-RFLP?- Uma técnica que combina

a reação em cadeia da polimerase (PCR) com o polimorfismo de comprimento de
fragmentos de restrição (RFLP). Ele é usado para detectar variações genéticas em
sequências de DNA específicas que resultam em padrões de restrição diferentes. O
fundamentado do método PCR-RFLP baseia-se na amplificação do DNA alvo por
meio da PCR e, em seguida, na digestão desse fragmento amplificado por uma
enzima de restrição específica. No entanto, é importante considerar que nem todos
os polimorfismos podem ser detectados por PCR-RFLP, uma vez que dependem da
presença de sítios de restrição específicos na sequência do DNA.

13º) Qual o fundamento do método Neste-PCR?- É uma variação da reação

em cadeia da polimerase (PCR) que aumenta a sensibilidade e especificidade da
amplificação de um alvo de DNA específico. O fundamentado do método Nested
PCR envolve a realização de duas rodadas consecutivas de amplificação do DNA
alvo.

14º) Qual o fundamento do método PCR-Multiplex?- É uma variação da

reação em cadeia da polimerase (PCR) que permite amplificar simultaneamente
múltiplos alvos de DNA em uma única reação. O fundamentado do método
PCR-Multiplex envolve o uso de múltiplos pares de primers específicos, cada um
direcionado a um alvo de interesse distinto.

15º) Qual o fundamento do método RT-PCR? - É uma técnica utilizada para

amplificar sequências de RNA específicas por meio da conversão do RNA em cDNA
(DNA complementar) por uma enzima chamada transcriptase reversa. O
fundamentado do método RT-PCR envolve duas etapas principais: a transcrição
reversa (RT) e a reação em cadeia da polimerase (PCR).

16º) Descreva o método de PCR-Real Time ou PCR-Quantitativo

(qPCR)- Também conhecido como PCR em Tempo Real quantitativo (qPCR), é uma
técnica que permite a amplificação e a quantificação em tempo real do DNA ou RNA
alvo durante a reação de PCR. Diferente da PCR convencional, onde a detecção dos
produtos amplificados ocorre após a conclusão da reação, a qPCR permite a
monitorização em tempo real do acúmulo de produtos amplificados durante cada
ciclo de amplificação. O fundamentado do método de PCR em Tempo Real envolve o
uso de sondas ou corantes fluorescentes que se ligam especificamente aos
produtos amplificados, gerando um sinal de fluorescência proporcional à quantidade
de DNA ou RNA presente na reação.