REGULAÇÃO GÊNICA

- Rede de Regulação Gênica: É uma coleção de segmentos de DNA de uma célula, os quais,
interagem indiretamente entre si (através de seus RNAs o seus produtos proteicos) e com outras
substâncias na célula, governando os níveis de expressão de mRNAs e proteínas.
- Em organismos unicelulares, células respondem a estímulos externos, ajustando o metabolismo do
organismos unicelular para tirar o melhor proveito do meio.
- Organismos multicelulares:
• células após divisão celular, possuem o mesmo conteúdo genético, mas não necessariamente o
mesmo conjunto de genes ativos
• Estas diferenças são desencadeadas por um cascata de sinais externos e/ou internos que vão
ativar ou desativar a expressão de um gene
- Mecanismo de Regulação hormonal: Regulação da expressão de um gene pelo receptor de
hormônio esteroide
- Sinais de transdução: é quando um estímulo/sinal, externo à célula, ativa um receptor de superfície
de membrana. Esta ativação induz uma modificação na parte voltada para o citosol do receptor
desencadeando um sinal em resposta a este estímulo

- Regulação gênica: são mecanismos usados por uma célula para controlar a quantidade que será
sintetizado de cada gene
• Função da regulação gênica:
- Sintetizar genes individuais somente quando necessários
-Modular a síntese de genes
-Evitar interações proteicas desnecessárias
-Gerenciar a diferenciação celular

- Entre a estruturação do genoma, o início da transcrição e o produto final de gene existem diversas
etapas onde regulação é possível
- A transcrição é principal etapa onde regulação é mais intensa.
- Em eucariotos regulação ocorre antes mesmo da transcrição: Mecanismos de metilação e
Condensação do DNA
- A regulação Pode ser classificada em dois tipos básicos:
• Constitutiva: É a transcrição e tradução de um gene de forma contínua e não regulada. Exemplos
são os genes de que são necessários em qualquer estágio da vida celular, como os genes
ribossomais e do ciclo metabólico básico.
• Modulada: É aquela onde um gene não é necessário em todas etapas da vida celular e assim
devem ser desligados ou induzidos a expressar, no momento mais adequado, o seu produto. Por
exemplo, genes que induzem cada etapa do ciclo celular, ou desenvolvimento embrionário.
- Processos regulatórios no DNA podem atuar como:
Elementos de atuação em cis: São sequências de nucleotídeos que regulam genes imediatamente
adjacentes a estas, não afetando genes em outros cromossomos
- Elementos no DNA afetam regulam a transcrição
- Transcritos com mRNA afetam processamento do mRNA, turnover e tradução

• Fatores de atuação em trans: São moléculas que se difundem, normalmente proteínas ou RNAs,
que regulam a expressão de genes com os quais entram em contato
- Fatores trans que regulam a transcrição são denominados fatores de transcrição.

- Modos de Regulação:
• Regulação positiva: ativador
• Regulação negativa: repressor

- Âmbito da Regulação Gênica:

• Mecanismos de regulação global: Regulam diversos genes ao mesmo tempo e refletem grandes
mudanças nas células.
- Em Eucariotos :
Regulação via cromatina (desligamento das atividades de transcrição durante a mitose). De forma
semelhante na síntese proteica, onde é represso o processamento do pre-mRNA ou são regulados a
síntese de fatores de alongamento
Regulação de Domínio Ampla (Co-Regulação) ou Restrita: Se refere a regulação de um grupo ou
genes de forma individual, como por exemplo na ativação de promotores e intensificadores
individualmente. ex.: os regulons, operons, etc.

- Expressão Gênica: Procariotos X Eucariotos

• Cromatina: é um meio de regulação universal tanto para pro- quanto eucariotos, pois a estrutura
da mesma afeta a interação do DNA com enzimas que tem afinidade por ele.
- Em eucarioto a organização núcleo-proteica é altamente complexa e é denominada de cromatina.
Esta organização permite que regiões possam estar disponíveis ou não para interagirem com
enzimas. Enquanto que quando a cromatina está condensada as regiões promotoras não estão
disponíveis criando um mecanismo de repressão e ativação em massa
- Expressão Gênica: Eucariotos - Modificação do DNA
• Estruturais: A densidade do empacotamento do DNA é indicativo da frequência de transcrição. A
densidade pode ser temporariamente modificada por fosforilação ou mais permanente por metilação
de histonas. Acetilação de histonas também é um processo importante, pois dissocia o DNA das
histonas.
• Química: Metilação do DNA é o método mais comum de silenciamento de um gene.
• Núcleo: Núcleo é uma estrutura característica de eucariotos. Este compartimento separa a
transcrição e a tradução tanto espacialmente quanto temporalmente. Esta situação cria mais uma
oportunidade de regulação, exportação do mRNA do núcleo para o citoplasma
• Regulação coordenada cis- : Muito comum em procariotos (óperon). Não é comum em eucariotos
porém ocorre quando elementos de regulação estão num mesmo cromossomo, mesmo que
distantes.
• Introns: São praticamente exclusivos de eucariotos superiores. Eucariotos inferiores possuem
alguns introns, assim como, procariotos. Via de regra em procariotos a regra um gene uma proteína
é correta. Em eucariotos um gene pode sintetizar mais de uma proteína. Isto é possível através da
retirada seletiva de introns (splicing alternativo).
• Atividade da RNA polimerase: Em procariotos a holoenzima possuí uma subunidade integrada
que auxilia no reconhecimento do gene a ser transcrito. Em eucariotos a RNApol necessita uma séria
de fatores auxiliares
• Regulação na transcrição: Em bactérias normalmente as regulações são mediadas por fatores
que interagem diretamente com a RNApol que normalmente estão sob controle alostérico. Em
conjunto com a rápida reciclagem do mRNA facilita a resposta a estímulos ambientais.
Em eucariotos interação com fatores distantes do promotor basal e também através da excisão dos
íntrons
• Regulação na transcrição: Em eucariotos as vezes fatores que se ligam distante do promotores
básicos e a interação ocorre por meio da formação de um laço, no qual está a sequência entre os
promotores e os fatores. Isto cria uma situação de regulação em cis- onde diversos genes competem
por um mesmo elemento.
• Regulação na transcrição: Em bactérias o uso de regulação alostérica com fatores já existentes
fornece um meio rápido de resposta a interação com o meio ambiente.
Em eucariotos modificações pós-transcripcionais são mais comuns
- Controle alostérico: Se refere a regulação de uma enzima que envolve a ligação de uma molécula,
que não é o substrato da enzima, conhecido como efetor alostérico, numa região da enzima que não
é o seu sítio ativo
REGULAÇÃO DA TRANSCRIÇÃO EM PROCARIOTOS
- Transcrição pela RNA polimerase pode ser regulada em pelo menos três pontos diferentes:
• Ativadores: Incrementam a interação da RNA polimerase e um promotor em particular promovendo
a expressão do gene. O fazem através da interação de proteínas com subunidades da RNApol ou
modificando o DNA > função de um ativador é o aumento na taxa de transcrição
• Repressores: Se ligam a regiões não codificantes próximas ou sobrepõe à promotores > função de
um repressor é a redução na taxa de transcrição
OBS: Ambos Elementos tem em comum > Proteína com afinidade pelo DNA e Regulam a
expressão de um ou mais genes
• Fatores de especificidade: Alteram a especificidade da RNA polimerase por um determinado
promotor. Aumentando ou diminuindo a afinidade por um dado promotor.
- Fatores de Especificidade: São proteínas que direcionam outra proteína a reconhecer e ligar ao
DNA Ex.: Fatores sigma (s) em procariotos

- Operon Lac: composto por 3 genes: lacZ, lacY e lacA

• lacZ – sintetiza a ß-galactosidase. Gene responsável por quebrar a lactose produzindo glicose e
galactose
• lacY – sintetiza a lactose permease. Esta proteína se insere na membrana plasmática e transporta
lactose para o interior da célula
• LacA – sintetiza tiogalactosidase transacetilase. Proteína responsável pela degradação dos
tiogalactosídeos tóxicos que também podem ser transportados pelo gene lacY
- Exemplo Repressão/Ativação:
• É transcrito como um mRNA policistrônico
• Este genes são expressos somente quando há altos níveis de lactose e quando a fonte preferida,
glicose, não está presente
- Função da Lactose e ß-Galactosidase:
• Lactose permease:
- Esta enzima permite o transporte da lactose para dentro do citoplasma celular. Juntamente com a
lactose entra uma molécula de H+.
- Bactérias mantém um gradiente de hidrogênio de cada lado da membrana citoplasmática. Através
deste mecanismo consegue acumular ativamente lactose dentro da célula.
• ß-galactosidase:
- Enzima citoplasmática que degrada lactose e compostos aparentados em galactose e glicose.
- Via alternativa menos importante é a transformação da lactose em alolactose e esta por sua vez é
degradada em galactose e glicose
Exemplo Repressão/Ativação:

• É regulado por duas proteínas: o Repressor lac e o Ativador CAP

• O gene do Repressor lacI está situado a montante próximo ao óperon e é regulado por um
promotor próprio

Proteína ativadora CAP – Proteína Catabólica Ativadora (“Catabolic Activator Protein”) ou CRP
Proteína Receptora de AMP cíclico (“cAMP Receptor Protein”)
Localizado no cromossoma bacteriano não necessariamente próximo
- Regulação pela Proteína Repressora:
• Indução da expressão
• Regulação alostérica

- Funcionamento do ciclo:
• Na presença de glicose e lactose há uma expressão basal.
• Na ausência de lactose a transcrição é reprimida
• Na presença de lactose o operon é ativado e o repressor é inativado e a transcrição inicia-se

- O Operador do Operon Lactose: Operador lac é formado por uma sequência de 21 nucleotídeos
que formam um repetição invertida com 20 nucleotídeos
• Exemplo Repressão/Ativação:
Detalhamento da região controladora do operon lac
O operador lac está situado na área coberta pela RNApol.
Se o Repressor está posicionado no operador a RNA pol. não tem como se ligar ao DNA para
transcrever

A RNApol se liga muito fracamente sem a presença da proteína CAP.

O promotor -35 não possui uma sequência ideal para fortalecer a ligação da RNApol.
E não possuem elemento UP que ajudam a RNApol. Típico de elementos controlados por ativadores
• Exemplo Repressão/Ativação:
Estrutura de uma região promotora em bactérias
Elemento -10 (Pribnow box)
Elemento -35
Eventuais elemento UP
Na ausência de um elemento -35 pode haver um elemento -10 estendido
- Regulação do Operon lac por Proteína Ativadora:
• Repressão Catabólica**:
Regulação por meio de uma molécula (catabólito) no caso do operon lac é a glicose. A glicose leva a
repressão do operon lac.
Glicose, não é a molécula efetora e sim o AMP cíclico (cAMP), cuja síntese é reprimida na presença
de glicose.
O cAMP se liga a proteína CAP, que ativa o operon lac
** Catabolismo: é o conjunto de reações envolvidas na degradação ou quebra de moléculas
complexas em moléculas menores
- Exemplos de Repressão/Ativação:
Proteína CAP se liga ao DNA
RNApol interage com a CAP posicionando a RNApol para transcrição
- Terceiro Método de Regulação:
• A análise da cristalização mostrou que para o repressor se ligar a dois operadores se forma um
laço de DNA.
- Operon da Arabinose:
• Arabinose é um açúcar constituinte da parede celular de algumas plantas
• A ação das 3 enzimas (araA, B e D) transforma em D-xilulose-5-fosfato.
- Regulação do Operon Ara:

● Operon inibido na ausência de arabinose

● Operon ativo na presença de arabinose

- Operon do Triptofano:
• Operon contém 5 genes necessários para síntese de Triptofano
• Além dos 5 genes contém o gene trpL que tem papel regulatório; trpR que não faz parte do operon
mas tem papel de sintetizar a proteína repressora;
• É ativado somente na falta do amino ácido triptofano
• O elemento regulador é o próprio triptofano
• Atua como um co-repressor
- Atenuador do Operon do Triptofano:
• O fato da disponibilidade do promotor à RNApol permite o início da transcrição. Nem toda
transcrição alcança o primeiro gene do operon
• Existe um 2º mecanismo de regulação: A Atenuação
• Regiões 3 e 4 formam um terminador (grampo com alça) seguidos de poli-U : Sequência líder e
Peptídeo líder
OBS: Quando a tradução não se acopla a transcrição, possível somente em bactérias pois não
possuem um envoltório nuclear, a região 1 de complementa a região 2 e a 3 com a 4. Isto termina a
transcrição na sequência poli-U.
- Atenuação do Operon do Triptofano:
• Existe a possibilidade da formação de 2 grampos de DNA (regiões 1 e 2; 3 e 4)
•Síntese de um peptídeo líder contendo dois códons seguidos para trp na falta de trp gera uma
limitação, impedindo a progressão do ribossomo e permitindo a formação de um grampo entre
regiões 2 e 3

REGULAÇÃO DA TRANSCRIÇÃO EM EUCARIOTOS

- Possíveis Pontos de Regulação: Cromatina

● Controle da Transcrição

● Processo de Maturação do mRNA

● RNA maduro

● Transporte através da membrana nuclear

● Controle de Tradução

● Controle de degradação

● Controle de degradação proteíca

- Regulação em Eucariotos:

● Em Eucariotos existem mais elementos regulatórios que em bactérias

● Eles podem estar situados a montante ou a jusante do gene

● Alguns elementos controlam o ponto de início e outros quando deve ser o início

● Transcrição é ativada por proteínas altamente especializadas

- Promotores:

● promotores podem ser um ou muitos cada um com uma proteína específica e para um gene

● Promotores podem ser regulados positivamente ou negativamente

- Intensificadores/Silenciadores:

● Podem ocorrer a jusante ou a montante do início de um gene

● Proteínas específica se ligam a intensificadores específicos, o que determina isto é a sequência

● Laços podem se formar entre o fator de transcrição e os elementos intensificadores

- Pontos comuns entre Promotores e intensificadores:

● Algumas proteínas reguladoras são comuns entre células diferentes e outros são específicos

● A taxa de expressão é controlada pela interação de proteínas com controle positivo e negativo

● Regulação combinatória de genes: Promotores e intensificadores,possuem muitas proteínas em

comum o que implica em muita interação entre os dois elementos
- Características das Proteínas Reguladoras:

● Se ligam ao DNA como dímeros, em muitos casos como heterodímeros

● Quando não são dímeros normalmente se associam a outras proteínas

- Fatores de Transcrição da Regulação:

● Domínios: são regiões numa proteína que tem função específica. Ex.: domínio com afinidade ao
DNA; sítio de ligação de uma molécula efetora

● Motivos: quando um domínio ou uma parte dele tem uma estrutura muito similar em muitas
proteínas
- Domínios proteicos: é uma parte conservada de uma dada sequência proteica e (estrutura) terciária
que pode evoluir, funcionar e existir indepen-dentemente do resto da proteína
- DNA Imprinting: H19 e Igf2. O primeiro somente está ativo no cromossomo herdado da mãe e o
segundo no cromossomo herdado do pai
- Motivos Proteicos:
● são estruturas supersecundárias, que também estão presentes numa variedade de outras
moléculas.

● Não permitem deduzir a função da mesma.

- Domínios de Fatores de Transcrição:

● Possuem normalmente uma estrutura secundária na forma de α-hélice

● Estruturas na conformação α-hélice possuem a largura adequada para reconhecer sequencias

através do sulco profundo

● Há a formação de pontes de hidrogênio entre o hélice e as bases e também pode haver interação
entre amino ácidos com carga “+” e a fita de DNA (açúcar-fosfato-açúcar)
- Alguns Domínios de Ligação com DNA:

● Proteínas Hélice-volta-hélice

● Proteínas Hélice-laço-hélice

Também forma uma estrutura em forma de tesoura, só que é um monômero, que interage com o
sulco profundo do DNA
Forma junto com zíper de Leucina um conjunto de proteínas denominadas proteínas básicas de
zíper

● Domínio de Zíper de Leucina

Formado por duas estruturas proteicas em alfa-hélice unidas pelo meio formando uma
espécie de tesoura.
Esta estrutura interage com o sulco profundo do DNA
 ● Domínios de Ligação contendo Zinco

Incluem uma série de estruturas diferente que contém Zinco, ex.: Dedo de Zinco (TFIIIa),
Aglomerado de Zinco (cluster de zinco)
Podem ter mais de uma destas estruturas por proteínas

● Proteínas com Homeodomínio: são fatores de transcrição que compartilham uma estrutura
proteica que se liga à molécula de DNA.

● Sintetizar genes individuais somente quando necessários

● Modular a síntese de genes

● Evitar interações proteicas desnecessárias

● Gerenciar a diferenciação celular

- Ativadores:

● Ativadores tem a função de estimular a transcrição de genes

● Eles não recrutam a RNA polimerase diretamente e participam do recrutamento de duas

formas

● Interagindo com outros componentes do maquinário de iniciação os quais interagem com

RNApol
Recrutando modificadores de nucleossomo, os quais, modificam nucleossomos nas
proximidades de um gene, ajudando a RNApol se posicionar para início da transcrição
- Recrutamento de Ativadores: Apesar de muitos componentes serem necessários para início da
transcrição de um gene, na maioria dos casos somente são necessários a presença de um mediador
e a RNApol (holoenzima)
- Repressores da Transcrição:

● Ao contrário dos ativadores, são proteínas que reprimem a atividade de transcrição

● Podem se ligar a sítios adjacentes a um promotor e interagir com RNApol

● Interferir com a ação de ativadores

● Recrutamento de proteínas modificadoras de nucleosso-mos, na forma oposta de como

funcionam com ativadores

● Ao contrário das bactérias eles não sobre põe o promotor para impedir a ligação da RNA pol

- Sinalização à Distância Intensificadores e Isolantes:

● Intensificadores são elementos que auxiliam na modulação da expressão de um gene.

● Podem estar dezenas centenas ou milhares de pares de base a jusante ou montante de um

gene

● Existem sítios, em localidades intermediárias à região promotora do gene, que promovem a

aproximação do intensificador com o gene

● Outros tipos de proteínas, os isoladores, por outro lado impedem que o intensificador se
alinhe com qualquer outra região promotora

● Intensificadores: são elementos que ao se ligarem ao DNA estimulam a transcrição de 10 a

1000X.

● Silenciadores: é o oposto de intensificadores.

● Não estão necessariamente localizados próximo a um gene (até 100kb de distância de uma
gene)
- Isoladores: é um segmento de DNA que funciona como limite entre dois genes. O isolante
“protege”, “isola” um gene do reflexo da ação de genes vizinho
- Locus Control Group – LCR: Um grupo agregado de genes que controla um agregado (cluster) de
genes Ex.: genes da ß globina. Não se sabe como funciona
- Sinal por Transdução: É a ativação da transcrição por meio de pequenas moléculas que
desencadeiam uma série de sinais que terminam por induzir a transcrição dos respectivos mRNA
- Silenciamento de Genes:

● é um efeito de posicionamento do gene

● o silenciamento não tem relação com nenhuma resposta a um estímulo externo

● Silenciamento pode se estender por um longo trecho do DNA

 ● O mecanismo de silenciamento é formado pelos mesmo mecanismos de regulação até aqui
descritos

● Exemplos de silenciamento são:

● Por modificação de nucleossomo: formação de heterocromatina

O ativador recruta proteínas modificam as histonas ou remodelam a cromatina, expondo sítios

de regulação no DNA.
Acetilação também serve para promover a ligação de proteínas que regulam a transcrição

● Por metilação:

Este tipo de silenciamento ocorre quando nucleotídeos de sequências adjacentes a um gene

foram metiladas
Metilação são sinais reconhecidos por proteínas com afinidade por DNA as quais, recrutam
histonas deacetilases e metilases, modificando a cromatina adjacente
Este evento induz a formação de heterocromatina

● Por deacetilação

- DNA Imprinting:

● é o fenômeno, em células diploides, onde um dos alelos é silenciado em um dos

cromossomos e permanece ativo no outro

● Silenciamento normalmente ocorre durante a formação do ovócito e esperma.

- Epigenética: é o estudo da variação do trato celular e fisiológicos que não são causados por
modificações na sequência de DNA.
• Exemplos de mecanismos que produzem modificações no DNA, sem modificar sua sequência são
a metilação do DNA ou acetilação de histonas. Ambas alteram como genes são expressos sem
modificar sua sequência
- Regulação Epigenética: Quando uma regulação é herdada ou seja é passada de uma geração para
seguinte
- Regulação Durante Síntese de RNA:

● Após a formação do complexo de iniciação a RNApolII esta inicia a síntese e para após ~100
pb.

● A RNApolII está presa pelo domínio do terminal “C”, o qual após fosforilação libera a enzima
para continuar a síntese
- Regulação por “Splicing” Alternativo:
REGULAÇÃO GÊNICA A NÍVEL DE CROMATINA

- Regulação na Cromatina:

● A cromatina é a composição de DNA mais proteínas com afinidade pelo DNA

● Histonas são as principais proteínas

● Interação DNA + proteínas são interações fracas

● Histonas não tem interação permanente com DNA

● Nucleossomos podem ser deslocados ao longo do DNA

- Classificação
• Eucromatina: Forma de cromatina menos compactada. Possui uma grande concentração de genes
normalmente, mas nem sempre, sendo transcritos. Forma de cromatina encontrada tanto em
eucariotos como em procariotos
• Heterocromatina Forma de DNA empacotada firmemente (de forma mais condensada).
Classificada em duas formas, constitutiva e facultativa. Histológicamente diferenciada pela
intensidade de coloração (hetero + escura; eu + clara). Contém DNA satélite e genes que estão
reprimidos à diversos níveis. É duplicada na fase tardia S. Existe somente em eucariotos. Telômeros
e centrômeros e corpúsculo de barr no (cromossomo X)
Constitutiva: Região próxima ao centrômero ou ao telômero. Genes contidos nestas regiões possui
uma expressão muito fraca
Facultativa: Regiões compactadas que variam de tipo celular. O que é compactado numa célula
pode não ser num tipo diferente. Estas regiões normalmente tem haver com a morfogênese ou
diferenciação celular
OBS:
- A composição de nucleotídeos numa sequência de DNA influencia a afinidade do nucleossomo
pelo DNA
- A maioria das proteínas interagem melhor com DNA livre
- O acesso a região depende da liberação pelo nucleossomo e a posição na região que interage com
nucleossomo

- Remodelagem da Cromátide

● A estabilidade da ligação das histonas está vinculada a um grupo de proteínas denominadas

complexo de remodelagem nucleossômica

● A mudança na localização do nucleossoma ou interação com DNA utiliza ATP

● Três potenciais modelos de remodelagem:

– Deslizamento

– Transferência

– Remodelação

- Restrição ou posicionamento do nucleossomo: Quando proteínas interagem com DNA mantendo

uma região livre de proteínas
- Quando nucleossomos interagem com proteínas que estão ligadas ao DNA levando os
nucleossomos a preferencialmente se montarem na posição adjacente a estas proteínas
- Modificações nas histonas:
• Acetilação:
Histona Acetilada: Associada a regiões de atividade de transcrição
Histona Deacetilada: Regiões onde a transcrição foi repressa
• Metilação: A metilação terá tanto uma função de repressão como ativação dependendo do resíduo
da região N- terminal da proteína que foi metilada
• Fosforilação: Normalmente encontrada em nucleossomos de cromatina altamente condensada
- Como funciona:
• Acetilação: Influencia na carga positiva do terminal N- da histona reduzindo a afinidade pelo DNA
• Metilação: Aumenta ou diminui a afinidade das histona ao DNA. Resíduos comumente metilados
Lisinas ou argininas (+ comum Lisina).
• Fosforilação: Influencia na carga positiva do terminal N- da histona reduzindo a afinidade pelo DNA
> N- terminais das histonas são importantes para formação das fibras de 30 nm. Qualquer
modificação afeta a sua formação
- Remodelagem da Cromatina

● A estabilidade da ligação das histonas está vinculada a um grupo de proteínas denomina-das

complexo de remodelagem nucleossômica

● A mudança na localização do nucleossoma ou interação com DNA utiliza ATP

● Três potenciais modelos de remodelagem:

– Deslizamento

– Transferência

– Remodelação

● Remodelagem e modificações em histonas são dois meca-nismos que trabalham juntos

● Proteína se fixa à um sítio de reconhecimento. Recruta um complexo proteico de remode-lagem

(CPR)

● CPR faz modificações nas histonas outras proteínas com afinidade ao DNA se ligam

● Estas por sua vez recrutam proteínas que vão acetilar os terminais N- das histonas

● Estas modificações vão desfazer a estrutura de 30 nm para 10 nm tornando o DNA mais

acessível
- Acetilação e deacetilação de histonas:
• resíduo = lisina
• Enzimas: Acetilação - Histona Acetiltransferase e Deacetilação: Histona deacetilase
• Efeito: Modifica a carga “+” externas das histonas, diminuindo (acetilado) ou aumentando
(deacetilado) a afinidade das histonas ao DNA.

MÉTODOS EM BIOLOGIA MOLECULAR

– Os métodos atuam em propriedades físico químicas das moléculas
- Todos os métodos tem:
• Lise das membranas
• Purificação e recuperação do DNA
• Armazenamento do DNA

- Clonagem de DNA: é o processo de amplificação seletiva do DNA, dependente da ligação do DNA

de interesse a vetores
• Vetores: sequências de DNA capazes de replicação independente do(s) cromossomo(s) da célula
hospedeira
• DNA recombinante: a combinação de DNA de fontes diferentes: vetor artificial e uma sequência de
DNA de organismo, por ex
1) Clivar o vetor e o DNA doador com a mesma ER
2) Ligar estes DNAs com uma enzima ligase
3) Inserir o DNA recombinante em células adequadas
4) Isolamento dos clones com o DNA recombinante
- Biblioteca genômica: é uma coleção de fragmentos de DNA de uma determinada espécie de
organismo, obtidos a partir da ação de endonucleases de restrição, ligados aos vetores apropriados
e clonados após terem sido inseridos em um hospedeiro
- Reação em Cadeia da Polimerase: A PCR permite a amplificação seletiva de uma sequência alvo
de DNA a partir de uma população heterogênea de DNA > realizada em termociclador
- Eletroforese: técnica usada para separar biomoléculas baseada em: carga, tamanho e forma