Instituto de Química de São Carlos – IQSC

Universidade de São Paulo

Regulação da expressão gênica

e a Biotecnologia
Disciplina: Bioquímica II
Docente: Profa. Dra. Fernanda Canduri
Refere-se ao controle do
processo em que a
informação codificada por
um determinado gene é
decodificada em uma
proteína
 • Expressão gênica de enzimas constitutivas:
ocorrem sempre e em grandes quantidades
- Ex: enzimas da via glicolítica

Expressão
Gênica • Expressão gênica de enzimas indutíveis:
ocorrem ocasionalmente e dependente da
presença de um indutor
- Ex: β-galactosidase - presença de lactose no
meio de cultivo de E. coli
 Nas bactérias o controle da expressão
gênica serve principalmente para permitir
Importância da que as células se ajustem às mudanças
regulação da nutricionais no ambiente, de forma que o
seu crescimento e divisão sejam
expressão otimizados.
gênica em
Em organismos multicelulares a expressão
bactérias e em gênica controlada regula um programa
organismos genético fundamental para o
desenvolvimento embrionário,
multicelulares diferenciação celular e manutenção das
diferentes funções.
 Principalmente!

Mudanças pós-traducionais

Como uma célula

• Há seis maneiras possíveis, mas principalmente pelo
pode controlar a controle da primeira etapa
síntese de proteínas?
 • As RNA polimerases eucarióticas precisam ter acesso

Diferenças na aos genes e requerem a ajuda de um grande conjunto

de proteínas chamadas fatores gerais de transcrição
Iniciação da
Transcrição • Em bactérias os genes são frequentemente controlados

em Eucariotos por uma única sequência regulatória, tipicamente

localizada próxima ao promotor
e Bactérias
• A RNA polimerase bacteriana é capaz de iniciar a
transcrição sem o auxílio de proteínas adicionais

• Em eucariotos, são necessários fatores de transcrição

 A região promotora
e a regulação da transcrição
Participação de uma proteína repressora Participação de uma proteína ativadora
A expressão gênica em
eucariotos pode ser
regulada por sinais inter
e intracelulares

• Os efeitos de hormônios
esteroides (e também da
tireoide e retinóide)
fornecem exemplos de
modulação de proteínas
regulatórias pela interação
direta com sinais
moleculares
 A regulação em procariotos
• Bactérias regulam a expressão dos seus genes
de acordo com a disponibilidade de nutrientes
• A Escherichia coli possui uma única molécula
de DNA circular de aproximadamente 4,6 x
106 pares de nucleotídeos
• Seu DNA codifica aproximadamente 4.300
proteínas
• Muitos dos seus genes estão reunidos e
regulados em óperons, os quais são
transcritos conjuntamente, e os produtos
participam de processos relacionados - são
genes policistrônicos
• Portanto, múltiplos genes pertencem a um
único transcrito, possuindo um único
promotor, o qual regula a expressão de todos
eles conjuntamente
• Exemplos são o óperon lac e o óperon trp
 O óperon lac
Contém genes envolvidos no metabolismo da
lactose:
B-galactosidase (Z), galactosídeo-permease (Y) e
tiogalactosídeo-transacetilase (A)

A alolactose, molécula indutora da expressão desse óperon,

consiste nos monossacarídeos D-galactose e D-glicose ligados
através de uma ligação glicosídica β(1-6) (ao invés da ligação
(β1-4) da lactose). É o produto da transglicosilação da lactose
pela β-galactosidase.
A tiogalactosídeo transacetilase tem função de inativar
galactosídeos tóxicos para a bactéria
O óperon lac
Na ausência de glicose
((b) e (d)), a bactéria
produz cAMP, ativando
a proteína receptora de
cAMP - proteína CRP, a
qual liga-se aos genes
que possibilitam à
célula empregar outras
fontes de carbono.
Na ausência de lactose,
o repressor Lac desliga
o óperon ((a) e (b)).
O Óperon lac é
A CRP
altamente expresso
quando:
- A glicose está ausente ou
em baixa concentração,
- A lactose está presente.
O repressor Lac
Reguladores da Em eucariotos: Os reguladores positivos (promotores)
arquitetura em se ligam a regiões específicas do DNA e auxiliam a RNA
polimerase a iniciar a transcrição dos genes
eucariotos

A formação de alças de DNA possibilita que as proteínas reguladoras

ligadas ao DNA interajam umas com as outras e, posteriormente, com
a RNA polimerase na região promotora
Fatores Gerais
de Transcrição
Os fatores gerais de transcrição (TFIIs) são
responsáveis pelo posicionamento correto da RNA
polimerase II no promotor, ajudam na separação
das fitas de DNA para permitir o início da
transcrição, e liberam a RNA polimerase do
promotor quando a transcrição se inicia.
 Fatores de Transcrição
possuem motivos
estruturais de ligação ao
DNA Zíper de Leu
Dedos de zinco

• Contatos entre um regulador

transcricional e o DNA, envolvem ligações
de hidrogênio, ligações iônicas e
interações hidrofóbicas.
• A superfície da proteína é complementar
Hélice-alça-hélice Homeodomínio
às características da dupla-hélice do DNA.

a Sequência de DNA de dupla-hélice composta por nucleotídeos T e A.

b Proteína de ligação a TATA, do inglês TATA-binding protein.
c Elemento de reconhecimento B.
A Biotecnologia: envolve diferentes áreas
A PCR
 Etapas da PCR

DNA
molde

 A PCR é o primeiro passo para o sequenciamento de DNA: técnica utilizada para determinar em que
ordem as bases contidas no DNA se encontram, sendo possível desvendar a sequência de um gene ou
genoma.
Vetores de clonagem
• Uma variedade de pequenas moléculas de DNA com replicação autônoma são utilizadas como vetores
de clonagem
• Plasmídeos: Moléculas de DNA circular encontradas em bactérias ou em células de leveduras
• Vantagem: os vetores trazem resistência a antibióticos, importantes na seleção – só sobrevivem as
células resistentes, que contém o DNA de interesse

Na clonagem molecular, há a
necessidade de uma célula hospedeira,
capaz de replicar o DNA de interesse e
fornece ácidos nucléicos e/ou proteínas
para vários estudos
 O DNA recombinante

•Uma única célula transformada pode

multiplicar-se indefinidamente,
produzindo grandes quantidades de
DNA recombinante: pela clonagem!

•As células transformadas são Transformação

plaqueadas em meio de cultura

contendo um antibiótico específico
para o plasmídeo em questão
 O papel das enzimas de restrição na recombinação do DNA

Plasmídeo linearizado

Plasmídeo DNA alvo Plasmídeo DNA alvo

 Qual a importância da tecnologia do DNA recombinante?

• Produção de proteínas

- O gene clonado a partir do vetor de clonagem pode ser inserido em um vetor de expressão – plasmídeo
que controla a transcrição e a tradução
- Este plasmídeo recombinante deve ser transformado em uma célula hospedeira capaz de realizar a
expressão da proteína, referente ao gene clonado (expressão heteróloga)
- A produção da proteína de interesse pode chegar a 30% da proteína celular total do hospedeiro

• Organismos transgênicos
Organismos multicelulares que expressam genes de um outro organismo

• Terapia gênica
Transferência de material genético novo às células de um indivíduo, com o objetivo de produzir um
efeito terapêutico
Vetor de expressão e a expressão de proteínas heterólogas
Promotor do
operon lac

Gene de interesse

Alolactose, o indutor, se liga a proteína

repressora, deslocando-a do operador

IPTG, análogo à alolactose,

também é um indutor, porque
se liga a proteína repressora
A expressão de proteínas

Cromatografia
líquida