Tecnologia do DNA

Recombinante
Disciplina: Biotecnologia e Bioinformática
Prof. Enide Luciana Belmont Montefusco
 O que é a Tecnologia do DNA
Recombinante?

- Técnicas que visam o isolamento de genes e a introdução de

genoma exógeno em outros organismos.

- São produzidos organismos transgênicos, com diversas

finalidades.

- Ampla aplicação comercial e tecnológica.

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 Clonagem do DNA

Processo no qual se faz várias cópias idênticas de

uma parte específica de DNA

Introduzido em
bactérias

Reprodução, replicação e
transmissão
Clonagem do DNA
 Clonagem do DNA
 Um clone é uma cópia idêntica.

 A clonagem do DNA é o principal processo da Tecnologia do

DNA recombinante.

 Envolve a separação de um gene ou um segmento de DNA

específico, que se liga a uma pequena molécula de DNA-
transportador e depois replica este DNA recombinante
milhões de vezes.
 Etapas da clonagem do DNA
1. Escolher o gene ou segmento do DNA que será clonado;
2. Cortar o DNA em um local específico, isolando o gene;
3. Obter uma molécula de DNA com capacidade de
autorreplicação, chamada de vetor.
4. Unir os dois pedaços de DNA (vetor e segmento de interesse),
formando um DNA recombinante;
5. Transferir o DNA recombinante para uma célula;
6. Identificar e selecionar as células recombinantes.
Etapas da clonagem do DNA
 Qual a finalidade?

 Muitas cópias de DNA para realizar experimentos ou

construir novos plasmídeos

 Gene que codifica uma proteína útil e as bactérias são usadas

para produção dessa proteína.

Ex.: o gene da insulina humana é expresso em bactérias E. coli

para produzir a insulina usada pelos diabéticos.
Vetor de Clonagem Plasmidial - Plasmídio
Origem da replicação

Região onde o
DNA exógeno
pode ser
inserido

Marca de seleção
Polylinker
Ou
Sítio de ligação múltipla
Ou
Sítio múltiplo de clonagem
Formação do DNA recombinante
Sequência de restrição

Enzima de restrição

Extremidades coesivas

DNA ligase
Sítio de clonagem múltipla

Aumento da versatilidade do vetor

Clonagem utilizando células vivas - In vivo

Transformação
 SELEÇÃO DOS CLONES RECOMBINANTES

Um marcador de antibiótico é frequentemente usado, assim uma célula

hospedeira sem o vetor morre quando exposta a um determinado antibiótico,
enquanto o hospedeiro com o vetor sobrevive e se multiplica, porque é
resistente.
 SELEÇÃO DOS CLONES RECOMBINANTES
Marcador de triagem
A inserção do DNA de interesse ocorrerá no meio do gene da β-galactosidase 
Esta enzima catalisa uma reação que gera a cor azul.

A ausência da atividade (colônia branca) é um indicativo da presença do inserto no

plasmídio.

Mantém a atividade da
enzima

Não possui atividade da

enzima
 Clonagem independente de células vivas
(PCR)

3 ETAPAS

Desnaturação – a fita dupla se

separa

Anelamento – os primers vão

se anelar a fita de DNA

Extensão – onde ocorre a

polimerização da fita
1 ciclo
Na técnica são entre 30 e 35 ciclos
 Situação-Problema
Você se encontra em um ambiente profissional, no qual é necessário
reconhecer as localizações gênicas atuantes de determinadas enzimas de
restrição bacterianas para que possa efetuar o recorte correto da parte do
DNA de interesse para a construção de um DNA recombinante com
informação gênica específica.
 Situação-Problema

Você conseguiria mimetizar as etapas de construção de uma molécula

recombinante através de recortes de papel contendo sequências de bases
nitrogenadas para facilitar a visualização de tal protocolo, uma vez que essa
etapa minimizaria erros de bancada? Quais etapas deveriam ser executadas?
 Referências

BRUNO, A.N. Biotecnologia II: aplicações e tecnologias. Porto Alegre: Artmed, 2017.
Disponível em:
https://integrada.minhabiblioteca.com.br/#/books/9788582713853/cfi/6/2!/4/2@0:0

RESENDE, R.R.; SOCCOL, C.R. Biotecnologia Aplicada à Saúde: Fundamentos e

Aplicações. São Paulo: Blucher, 2015. 1. Disponível em:
https://integrada.minhabiblioteca.com.br/#/books/9788521208976/cfi/0!/4/2@100:0.00