19/11/2023, 20:20 Avaliação I - Individual

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GABARITO | Avaliação I - Individual A+

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Prova 74656128
Qtd. de Questões 10
Acertos/Erros 9/1
Nota 9,00

1 O uso de bibliotecas de DNA ou cDNA permitem a manutenção e replicação

do material genético em grandes coleções mantidas em colônias de bactérias, nas
quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados. Sobre
as bibliotecas de DNA e cDNA, avalie as asserções a seguir e a relação proposta
entre elas:

I- A bactéria E. coli é a principal célula hospedeira utilizada no processo de

clonagem em vetores, inclusive na construção de bibliotecas de DNA e cDNA,
em que cada bactéria irá internalizar apenas um vetor.

PORQUE

II- Assim que o vetor é inserido, em condições adequadas de diluição e meio de

cultivo, em poucas horas corre a formação de diversos clones dos fragmentos
inseridos, sendo cada um encontrado em uma colônia diferente de crescimento
bacteriano.

Assinale a alternativa CORRETA:

As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da
A
I.
B As asserções I e II são proposições falsas.

C A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.

As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma
D
justificativa da I.

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[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o roteiro de hibridização, o sucesso
dessa prática depende da capacidade do DNA de se anelar às sequências
complementares após a desnaturação (período em que a fita de DNA é simples).
Dessa forma, o ponto de fusão do DNA, ou seja, o momento em que ocorre a
ruptura das pontes de hidrogênio e a abertura da dupla fita de DNA, varia de um
organismo para outro. O ponto de fusão do DNA também depende da quantidade
de pares de base G-C e A-T, sendo que, quanto mais pares G-C, maior o ponto de
fusão do genoma. Isso ocorre porque o par G-C é mais estável, apresentando três
pontes de hidrogênio, enquanto o par A-T conta apenas com duas. Após o
anelamento da sonda com sua sequência-alvo complementar, o padrão de
hibridização é visto em microscópio de fluorescência. Além do ponto de fusão,
outros fatores podem interferir na hibridização da sonda de DNA. Sobre esses
fatores, analise as opções a seguir:
I- Temperatura de fusão.
II- pH alto para produzir condições de hibridização.
III- Concentração de cátions monovalentes.
IV- Presença de solventes orgânicos.Assinale a alternativa CORRETA:
A Somente a opção I está correta.

B As opções I, II, III e IV estão corretas.

C Somente a opção III está correta.

D Somente a opção II está correta.

3 O sequenciamento de DNA permite a identificação de qual nucleotídeo

ocupa cada posição na fita de uma molécula ou fragmento de DNA. As primeiras
técnicas que permitiram sequenciar o DNA começaram a ser desenvolvidas na
década de 70, com o método desenvolvido por Sanger. Sobre o método de
Sanger, assinale a alternativa CORRETA:
Os didesoxinucleotídeos são similares aos primers ou iniciadores, já que
A
iniciam a reação em diferentes terminações 3'.
Os didesoxinucleotídeos são ineficazes para a técnicas de Sanger, sendo
B utilizados somente os primers e diversas fitas de DNA réplicas da mesma fita
molde, com a mesma extremidade 5'.
A técnica de Sanger, utiliza terminadores de sequência em réplicas de DNA
C
de uma fita molde diferenciada.
São utilizados iniciadores (primers), fitas de DNA réplicas da mesma fita
molde, ou seja, com a mesma extremidade 5' e diferentes terminações 3',
D
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devido à inserção dos didesoxinucleotídeos, que são nucleotídeos

terminadores de cadeia (ddNTP: ddATP, ddTTP, ddCTP e ddGTP).

4 Para construir uma biblioteca de DNA, utiliza-se técnicas de clivagem com

enzimas de restrição e clonagem em vetor. Com base nas etapas para construção
de uma biblioteca de DNA, ordene os itens a seguir:

I- Fragmentos de DNA são inseridos em vetores idênticos e ligados através da

DNA ligase.
II- Clivado do DNA com uma enzima de restrição, formando centenas a milhares
de fragmentos de DNA.
III- Inserção do vetor em células hospedeiras, produzindo a clonagem dos
diferentes fragmentos.
IV- Extrair e isolar o DNA genômico de uma célula, tecido ou até mesmo de um
organismo.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A I - III - II - IV.

B IV - II - I - III.

C IV - II - III - I.

D I - IV - III - II.

5 A terceira geração de métodos de sequenciamento de DNA, possibilitaram

analisar as sequências de nucleotídeos de uma única molécula de DNA, sem a
necessidade de amplificar a molécula. Sobre esses métodos, assinale a alternativa
CORRETA:
É um método totalmente automatizado, também conhecido como Illumina,
em que o DNA a ser sequenciado é fragmentado por nebulização e os
A
fragmentos são acoplados a uma placa de vidro por meio de primers
adaptadores, formando uma biblioteca de DNA, que será submetida ao PCR.
A terceira geração de sequenciamento utiliza DNA fragmento que é
transformado em fragmentos de DNA circular, os quais são replicados em
B
chips com nano-poços. A cada novo nucleotídeo adicionado à nova fita,
ocorre a emissão de fluorescência e a detecção ocorre em tempo real.
Para os métodos de terceira geração, são utilizadas plataformas 454, que são
C esferas sólidas, nas quais são ligadas as sequências adaptadoras, com o DNA
a ser sequenciado, formando uma biblioteca de DNA.

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É o mais recente avanço em biologia molecular, que permite o

sequenciamento de DNA de forma portátil, capaz de sequenciar grandes
D
moléculas de DNA em pequenos equipamentos, semelhantes a pen drives. A
plataforma MinION é a mais utilizada.

6 A técnica de eletroforese consiste na separação de moléculas de DNA, RNA

ou proteínas em gel de agarose ou poliacrilamida. Essa separação se dá de acordo
com o tamanho da molécula. Com base no processo de eletroforese em gel,
analise as sentenças a seguir:

I- Uma corrente elétrica é transmitida através do gel do polo negativo ao polo

positivo.
II- As moléculas de DNA são carregadas negativamente e são carregas por
afinidade para o polo positivo.
III- Moléculas menores tendem a migrar com maior dificuldade no gel. Já as
moléculas maiores, tendem a migrar mais facilmente.

Assinale a alternativa CORRETA:

A Somente a sentença III está correta.

B As sentenças I e II estão corretas.

C As sentenças I e III estão corretas.

D Somente a sentença II está correta.

7 As bibliotecas de DNA e cDNA são essenciais para manter e replicar um

fragmento clonado por tempo indeterminado. Sobre essas técnicas, associe os
itens, utilizando o código a seguir:

I- Biblioteca de cDNA.
II- Biblioteca de DNA.
III- Hibridização em colônia.

( ) Técnica que detecta os fragmentos do DNA de interesse com sondas

específicas em meio de cultivo sólido.
( ) Clonagem de fragmentos aleatórios do DNA, permitindo a sua identificação,
isolamento e sequenciamento do genoma.
( ) Clonagem de mRNAs, em que cada célula/tecido pode originar uma
biblioteca diferente, considerando o padrão de expressão gênica específico,
relacionado sempre a sua função.

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Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A I - II - III.

B I - III - II.

C II - I - III.

D III - II - I.

8 Através da técnica de eletroforese, ocorre a separação de moléculas em

populações de tamanhos semelhantes, as quais são visualizadas como bandas no
gel através de marcadores específicos. Sobre os marcadores para técnica de
eletroforese em gel, assinale a alternativa CORRETA:
A O corante mais utilizado para marcação de DNA é o azul de brometo.
O corante ideal para eletroforese de DNA e RNA é aquele que não se liga ao
B
DNA ou ao RNA, ficando somente na solução tampão da técnica.
O marcador ideal para a técnica de eletroforese em gel será aquele capaz de
C
separar as bandas de DNA em diferentes tons de cores.
O marcador ideal é o brometo de etídio, um corante fluorescente, que se liga
D ao DNA ou RNA e possibilita a sua visualização através de luz ultravioleta
(UV).

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[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Conforme o
sumário da prática, os ácidos nucleicos apresentam características estruturais
específicas, que permitem que sejam isolados e manipulados para diversos tipos
de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, baseia-se na
complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes
para a detecção da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica
permite o estudo da expressão gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo
princípio e finalidade, é a reação em cadeia da polimerase transcriptase reversa
(RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas infecções e doenças.
Considerando esses aspectos, o primeiro passo para a maioria das técnicas citadas
é o isolamento e a purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de
extração do DNA pode ser dividido em etapas.
Com relação às etapas visualizadas na aula prática, assinale a alternativa
CORRETA:
A Na Etapa de Lavagem, são adicionados 210 µl de álcool 96%.

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A segunda etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado

B álcool 96% no eppendorf, homogeneizado, e 640 µl são transferidos para o
tubo spin.
A primeira etapa é a Etapa de Ligação, em que adicionamos 250 µl de
C
Proteinase K, 20 µl da amostra e 20 µl do tampão de lise S.
D O principal composto adicionado na Etapa de Ligação é a Proteinase K.

10 O advento das técnicas de biologia molecular possibilitou o estudo genético

de diversos organismos, incluindo os seres humanos. Esses estudos têm trazido
ganhos significativos no entendimento de doenças, síndromes e mecanismos de
ação de substâncias. De acordo com a importância das técnicas de clonagem do
DNA e construção de bibliotecas genômicas, classifique V para as sentenças
verdadeiras e F para as falsas:

( ) As enzimas de restrição são utilizadas na construção de bibliotecas de DNA,

com o objetivo de fragmentar o DNA genômico, já que podem ser conhecidas
como tesouras moleculares.
( ) Os vetores são essenciais na técnica de clonagem e são utilizados tanto na
construção de bibliotecas de DNA, quanto de cDNA, uma vez que carregam os
fragmentos de DNA ou o cDNA extraído.
( ) As bibliotecas de cDNA são construídas a partir da extração do DNA de
células ou tecidos, que posteriormente é submetido à clonagem do DNA.
( ) O mRNA é convertido em cDNA pela transcrição reversa, para então serem
introduzidos em vetores e submetidos ao processo de clonagem para originar as
bibliotecas de cDNA.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A V - F - F - V.

B V - F - V - V.

C F - F - V - F.

D V - V - F - V.

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