18/11/23, 00:07 Avaliação I - Individual

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GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:883916)
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Prova 74656168
Qtd. de Questões 10
Acertos/Erros 10/0
Nota 10,00

1 Para detecção do DNA em bibliotecas de DNA, uma membrana é colocada em contato com as
colônias na placa logo após o crescimento das colônias bacterianas em placas de cultivo contendo
meio sólido. Algumas células irão se aderir à membrana, formando uma impressão das colônias
presentes na placa. Em seguida, as células aderidas sofrem lise celular, a fim de liberar o DNA, que
permanece aderido à membrana. Por fim, a membrana é incubada com sondas de hibridização
marcadas, complementares à porção do gene de interesse, permitindo a visualização da posição dos
clones que contêm o fragmento de interesse. Sobre a técnica exposta, assinale a alternativa
CORRETA:
A Southern-blot.

B Hibridização in situ.

C Northen-blot.

D Hibridização em colônia.

2 O sequenciamento Shotgun, o qual é aplicado como estratégia para o sequenciamento de

grandes sequências de nucleotídeos, especialmente genomas inteiros dos mais diversos organismos.
Sobre o sequenciamento Shotgun, avalie as asserções a seguir e relação proposta entre elas:

I- Devido ao grande volume de informação gerado por esse procedimento, é necessário que
programas computacionais sofisticados sejam utilizados para a determinação da sequência do material
em estudo.

PORQUE

II- Na técnica Shotgun, o material clonado é sequenciado diversas vezes, fornecendo uma quantidade
de dados de cerca de 10 vezes o tamanho do material genético que está sendo estudado, assegurando
que todos os nucleotídeos presentes no material genético sejam detectados e inseridos na sequência
final do DNA.

Assinale a alternativa CORRETA:

A As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.

B A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.

C As asserções I e II são proposições falsas.

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D As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.

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"A clonagem de genes possui variadas aplicações na área de pesquisa, por meio do conhecimento da
organização de genomas, da sequência de genes e suas proteínas codificadas, da criação de bibliotecas
de DNA e cDNA, além de produtos que beneficiam a sociedade, como a produção de enzimas
industriais, produção de insulina humana, vacinas, hormônios de crescimento e melhoramento
genético". Sobre as principais diferenças entre essas técnicas, destacando os objetivos de cada uma
delas, analise as sentenças a seguir:
I- As Bibliotecas de DNA ou cDNA são grandes coleções de material genético mantidas em colônias
de bactérias, nas quais um fragmento específico de DNA ou um gene podem ser procurados.
II- Uma biblioteca de DNA é formada por fragmentos originados a partir de um DNA genômico. Já
uma biblioteca de cDNA é formada por sequências codificantes dos genes que estavam expressos na
forma de mRNA em uma determinada amostra.
III- A formação das bibliotecas de DNA e cDNA permite que fragmentos clonados sejam mantidos e
replicados por tempo indeterminado.
Assinale a alternativa CORRETA:
Fonte: CALEFFE, R. T. T.; OLIVEIRA, S. R.; FREITAS, A. C. O.; KIDO, K. K.; GARCIA, A.;
PAMPHILE, J. A. Clonagem de genes: métodos e aplicações. Revista UNINGÁ, v. 47, p. 73-77,
jan./mar. 2016. Disponível em: http://revista.uninga.br/index.php/uninga/article/view/1252/874.
Acesso em: 5 fev. 2021.
A Somente a sentença II está correta.

B Somente a sentença I está correta.

C Somente a sentença III está correta.

D As sentenças I, II e III estão corretas.

4
[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Conforme o sumário da prática, os
ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas, que permitem que sejam isolados e
manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, baseia-
se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a detecção
da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica permite o estudo da expressão
gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo princípio e finalidade, é a reação em cadeia da
polimerase transcriptase reversa (RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas infecções e
doenças. Considerando esses aspectos, o primeiro passo para a maioria das técnicas citadas é o
isolamento e a purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de extração do DNA pode ser
dividido em etapas.
Com relação às etapas visualizadas na aula prática, assinale a alternativa CORRETA:
A O principal composto adicionado na Etapa de Ligação é a Proteinase K.

B A primeira etapa é a Etapa de Ligação, em que adicionamos 250 µl de Proteinase K, 20 µl da

amostra e 20 µl do tampão de lise S.

C A segunda etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado álcool 96% no
eppendorf, homogeneizado, e 640 µl são transferidos para o tubo spin.

D Na Etapa de Lavagem, são adicionados 210 µl de álcool 96%.

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5 A hibridização in situ foi elaborada com o objetivo de isolar e identificar fragmentos, através do
anelamento entre duas fitas simples de origens distintas, sejam elas DNA ou RNA. Sobre essa técnica,
associe os itens, utilizando o código a seguir:

I- Northen-blotting.
II- Southern-blotting.
III- Hibridização in situ.

( ) Técnica que utiliza sondas de ácidos nucleicos, com marcação química, no local em que a
molécula de interesse deve ser encontrada (RNA dentro da célula, DNA específico em cromossomos).
( ) Técnica que avalia padrões de sequências de nucleotídeos de genes do DNA e utiliza sondas de
DNA molde, os quais são marcados com radiação ou quimicamente.
( ) Nesta técnica, o RNA mensageiro (mRNA) é utilizado a fim de buscar comparar situações
distintas, como, por exemplo, utilizar amostras controle como padrão para expressão do gene de
interesse e, assim, comparar com a amostra de interesse.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A I - II - III.

B I - III - II.

C III - II - I.

D II - I - III.

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O qPCR (PCR em tempo real) utiliza corantes fluorescentes ou sondas específicas, que emitem
fluorescência quando se encontram ligados ou intercalados à fita de DNA no meio de reação da PCR.
Considerando esse fator, a fluorescência, é proporcional à quantidade de material disponível para
iniciar a amplificação. Sobre os parâmetros para quantificação do qPCR, avalie as asserções a seguir e
a relação proposta entre elas:
I- O threshold, também conhecido como linha de corte, demonstra o momento em que a fluorescência
apresentada está livre de ruídos, sendo essencialmente a representação da amplificação da amostra
teste.
PORQUE
II- O equipamento é capaz de determinar em que momento a fluorescência detectada é proveniente
apenas das amostras que estão sendo amplificadas e, assim, determinar a linha de corte.
Assinale a alternativa CORRETA:
A A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.

B As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.

C As asserções I e II são proposições falsas.

D As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.

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7 Os ciclos do PCR (reação em cadeia da polimerase) são críticos para o sucesso da técnica. Em
torno de 20-40 ciclos são programados no termociclador, a fim de se obter milhares de cópias de
DNA. Sobre os ciclos do PCR associe os itens, utilizando o código a seguir:

I- Desnaturação.
II- Anelamento.
III- Extensão.

( ) Estágio em que os primers se ligam à fita do DNA na sua sequência complementar.

( ) Estágio inicial, em que ocorre abertura da dupla fita, liberando os nucleotídeos de cada uma das
fitas simples. Esta etapa ocorre em uma alta temperatura, em cerca de 95º C.
( ) Estágio correspondente à adição de nucleotídeos pela DNA polimerase específica, denominada
como Taq DNA polimerase, em uma temperatura de 72º C.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A III - II - I.

B I - II - III.

C II - I - III.

D I - III - II.

8
[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o roteiro de hibridização, o sucesso dessa prática
depende da capacidade do DNA de se anelar às sequências complementares após a desnaturação
(período em que a fita de DNA é simples). Dessa forma, o ponto de fusão do DNA, ou seja, o
momento em que ocorre a ruptura das pontes de hidrogênio e a abertura da dupla fita de DNA, varia
de um organismo para outro. O ponto de fusão do DNA também depende da quantidade de pares de
base G-C e A-T, sendo que, quanto mais pares G-C, maior o ponto de fusão do genoma. Isso ocorre
porque o par G-C é mais estável, apresentando três pontes de hidrogênio, enquanto o par A-T conta
apenas com duas. Após o anelamento da sonda com sua sequência-alvo complementar, o padrão de
hibridização é visto em microscópio de fluorescência. Além do ponto de fusão, outros fatores podem
interferir na hibridização da sonda de DNA. Sobre esses fatores, analise as opções a seguir:
I- Temperatura de fusão.
II- pH alto para produzir condições de hibridização.
III- Concentração de cátions monovalentes.
IV- Presença de solventes orgânicos.Assinale a alternativa CORRETA:
A As opções I, II, III e IV estão corretas.

B Somente a opção II está correta.

C Somente a opção I está correta.

D Somente a opção III está correta.

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9 Uma das técnicas essenciais em biologia molecular é a capacidade de sequenciar o gene de um

organismo. Esse sequenciamento é importante, pois identifica possíveis mutações, cadeias de
transmissão e origem da chegada do vírus a uma região específica. De acordo com as técnicas
empregadas para o sequenciamento de DNA, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as
falsas:

( ) Os didesoxinucleotídeos (ddNTP) são utilizados para o sequenciamento com o método de

Sanger, em que, posteriormente, faz-se a identificação da sequência com eletroforese.
( ) O pirosequenciamento tem como base a formação de pirofosfato a cada novo nucleotídeo
adicionado à nova fita.
( ) O método empregado na plataforma Illumina foi a base para o desenvolvimento dos testes de
sequenciamento que conhecemos atualmente, sendo a primeira geração de sequenciamento de DNA.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A F - F - V.

B V - V - F.

C V - F - V.

D V - F - F.

10 O mais recente avanço no campo de sequenciamento de DNA foi o desenvolvimento de

plataformas portáteis capazes de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos.
Um exemplo dessas plataformas é a MinION. Sobre a plataforma MinION, avalie as asserções a
seguir e a relação proposta entre elas:

I- Para que seja realizado o sequenciamento por meio da plataforma MinION, as amostras a serem
sequenciadas são ligadas a enzimas de processamento. Essas enzimas induzem o fragmento de DNA a
passar pelo nano poro, onde as variações da corrente elétrica são detectadas.

PORQUE

II- Sendo conhecidas as variações características de cada nucleotídeo, a sequência de nucleotídeos é

formada rapidamente.

Assinale a alternativa CORRETA:

A As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.

B A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.

C As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.

D As asserções I e II são proposições falsas.

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