Departamento de Ciências Experimentais

Área disciplinar de Biologia e Geologia

Ano letivo 2023/2024

Ficha de trabalho de Biologia – 12º Ano

FT8 – ENGENHARIA GENÉTICA E PROCESSOS BIOTECNOLÓGICOS DE MANIPULAÇÃO DE DNA

O Prémio Nobel da Química, em 2020, foi atribuído às cientistas Jennifer Doudna e Emmanuelle Charpentier,
pelo desenvolvimento de um método de edição do genoma, denominado CRISPR/Cas9.
O CRISPR/Cas9 é uma técnica de biologia molecular capaz de editar sequências de DNA localizadas em qualquer
região do genoma. Esta técnica, que permite a edição do DNA humano in vitro, é baseada num sistema de memória
imunológica presente nas bactérias, usado para as proteger dos vírus.
O sistema CRISPR/Cas9 – Figura 1 – consiste em duas moléculas:
• Cas9: uma enzima que atua como um par de “tesouras”, cortando as duas cadeias complementares do DNA num
local específico do genoma;
• RNA guia (gRNA): uma pequena sequência de RNA complementar à sequência de DNA-alvo, que “guia” a Cas9
para a parte do genoma que deverá ser cortada.

Figura 1 – Funcionamento do sistema CRISPR/Cas9. (A) Componentes do sistema CRISPR/Cas9: RNA

guia e enzima Cas9. (B) O sistema reconhece a sequência de DNA-alvo, adjacente à sequência de DNA
PAM1. (C) Após o gRNA reconhecer a sequência de DNA-alvo, ocorre a quebra das duas cadeias da
molécula de DNA pela Cas9. (D) A célula corrige a região da molécula do DNA que foi cortada, com
remoção, adição ou alteração das bases nitrogenadas da sequência.

1
Protospacer adjacent motif (PAM) − é uma sequência nucleotídica existente no DNA-alvo, cuja presença é
essencial para o desenrolamento do alvo pela Cas9. Na ausência da sequência PAM, o DNA-alvo não é
reconhecido pela Cas9 mesmo que a sequência de nucleótidos do gRNA seja totalmente complementar.

Baseado em: C. Costa et al., «Sistema CRISPR/Cas9 e perspectivas de aplicações na cadeia produtiva animal»,
in Rev Bras. Reprod. Anim., Vol. 45(01), 2021.

O CRISPR/Cas9 tem um enorme potencial para ser usado como ferramenta no tratamento de diversas doenças.
Tem sido aplicado, por exemplo, para editar mutações em genes que causam divisão celular descontrolada,
responsáveis pelo aparecimento do cancro, ou em estudos de desenvolvimento de terapia génica para diversas
doenças genéticas, tais como a surdez, a distrofia muscular de Duchenne, a hemofilia e a anemia falciforme.
Baseado em: https://blog.mendelics.com.br/crispr-cas9-edicao-do-dna-e-o-tratamento-de-doencas/
(consultado em agosto de 2022)

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1. Selecione, de entre as afirmações relacionadas com o funcionamento do sistema CRISPR/Cas9, as três
afirmações corretas.
I. O método referenciado consiste num processo semelhante ao da replicação do DNA.
II. O CRISPR/Cas9 é um mecanismo naturalmente presente nas bactérias.
III. Um ser vivo sujeito ao método referido é um organismo geneticamente modificado.
IV. A sequência PAM é eliminada aquando da etapa de reparação do DNA.
V. A edição de genes, pelo método descrito, visa a reparação de DNA em células de pacientes com doenças
genéticas.

2. A sequência de DNA-alvo reconhecida pelo gRNA da Figura 1 é

(A) 3’-TAGCTAGCT-5’
(B) 3’-UAGCTAGCU-5’
(C) 5’-ATCGATCGA-3’
(D) 5’-TAGCTAGCT-3’

3. O sistema CRISPR/Cas9 pode ser utilizado para

(A) inativar os genes responsáveis pela apoptose.
(B) estimular a multiplicação celular.
(C) corrigir mutações em genes supressores tumorais.
(D) impedir a exposição celular a agentes mutagénicos.

4. De acordo com os dados, o sistema CRISPR/Cas9 pode ser utilizado quando se verifica
(A) a inativação de oncogenes pelos agentes mutagénicos.
(B) a transformação de oncogenes em proto-oncogenes.
(C) o aparecimento de mutações no gene p53.
(D) o funcionamento dos pontos de controlo do ciclo celular.

5. Outros estudos demonstraram que, muitas vezes, o sistema CRISPR/Cas9 erra o alvo e acaba por editar
outras regiões do genoma, acontecimento designado por mutações off-targets (fora do alvo).
Explique em que medida a análise de off-targets pode permitir, aos cientistas, aprimorar o sistema CRISPR/Cas9,
de forma a aplicá-lo em larga escala.

6. Vários estudos em células-tronco demonstram o potencial protetor de algumas mutações do gene CCR5
contra o vírus HIV.
Em 2018, um cientista chinês anunciou que duas bebés gémeas nasceram após os embriões serem
geneticamente modificados através do sistema CRISPR/Cas9. O gene CCR5 dos embriões foi modificado
para que fossem resistentes ao HIV. Apesar de as bebés terem nascido saudáveis, o cientista foi condenado.
Explique esta aparente contradição.

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7. Têm sido desenvolvidos estudos em que o sistema CRISPR/Cas9 é conjugado com outras técnicas de
engenharia genética.
Analise, com atenção, a Figura 2 que representa a técnica de PCR.
Baseado em: J. L. Neto et al., «A genética e o mar», in Rev. Ciência Elem., Vol. 7(01):015, 2019.

7.1. As afirmações seguintes dizem respeito à técnica de PCR. Selecione a alternativa que as avalia corretamente.
I. Utiliza enzimas de restrição.
II. É utilizada quando a amostra contém uma pequena quantidade de DNA.
III. Pode ocorrer, in vivo, sujeitando as células vivas a baixas temperaturas.
(A) III é verdadeira; I e II são falsas.
(B) II é verdadeira; I e III são falsas.
(C) I e II são verdadeiras; III é falsa.
(D) II e III são verdadeiras; I é falsa.

7.2. Ordene as expressões identificadas pelas letras de A a E, de modo a reconstituir a sequência correta de
acontecimentos relacionados com a técnica de PCR.
A – Atuação da DNA polimerase.
B – Desnaturação da dupla hélice do DNA.
C – Produção de cópias do fragmento de DNA original.
D – Extração de material genético nuclear.
E – Ligação dos primers às cadeias de DNA originais.

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7.3. Ao fim do terceiro ciclo de PCR, é possível obter, por cada fragmento de DNA inicial,
(A) 4 moléculas de DNA.
(B) 8 moléculas de DNA.
(C) 16 moléculas de DNA.
(D) 32 moléculas de DNA.

7.4. A utilização da Taq polimerase, enzima isolada de bactérias termófilas, trouxe muitas vantagens à técnica de
PCR, uma vez que
(A) permite a sua adição a cada novo ciclo.
(B) pode ser utilizada em todos os seres procariontes.
(C) desnatura à temperatura de desnaturação do DNA.
(D) mantém a estrutura durante o processo experimental.

8. Associe a cada uma das técnicas de engenharia genética, apresentados na coluna I, as características da
coluna II que lhes correspondem.
Cada um dos algarismos deve ser associado apenas a uma letra e todos os algarismos devem ser utilizados.

Coluna I Coluna II

(1) Envolve a atuação da transcriptase reversa.

(2) Ocorre manipulação do genoma.
(a) cDNA
(3) Permite a comparação de amostras distintas de DNA num gel.
(b) DNA fingerprint
(4) Envolve a introdução de genes provenientes de outros organismos.
(c) Transformação
(5) Permite estudar a paternidade de um indivíduo.
genética de organismos
(6) Possibilita a clonagem de genes apenas com regiões codificantes.
(7) Produz-se DNA, a partir de uma molécula de mRNA maturado.

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Correção

1. Afirmações II, III e V

2. Opção A
3. Opção C
4. Opção C

5. A análise de mutações off-targets permite aos cientistas compreender melhor o sistema

CRISPR/Cas9. Deste modo, são necessários estudos mais aprofundados para aprimorar esta
tecnologia, assegurando a sua eficácia e segurança.

6. Neste caso, o sistema CRISPR/Cas9 não trouxe consequências negativas, pelo que os bebés
nasceram saudáveis e resistentes ao vírus HIV. Contudo, a utilização do sistema CRISPR/Cas9 em
humanos (e não só!) levanta muitas questões éticas pois podem ser introduzidas alterações
genéticas irreversíveis e impossíveis de prever que seriam transmitidas às gerações futuras.
Apesar das potencialidades de algumas áreas, a utilização do sistema CRISPR/Cas9 deve ser feita
de forma prudente.

7.1. Opção B
7.2. D-B-E-A-C
7.3. Opção B
7.4. Opção D

8. (a) – 1, 6, 7
(b) – 3, 5
(c) – 2, 4

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