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GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:883916)

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Prova 74656146
Qtd. de Questões 10
Acertos/Erros 10/0
Nota 10,00

1
"A PCR pode ser precedida por uma reação de transcrição reversa (RT) para a obtenção de cDNA a partir de RNA
(RT-PCR), representando, por exemplo, uma possibilidade de análise de expressão gênica em células ou tecidos"
(SANTOS, 2004, s.p.). Sobre os componentes essenciais para a realização da técnica de PCR e RT-PCR, analise
as sentenças a seguir:
I- Para o processo de PCR convencional, utiliza-se a fita molde de DNA, os nucleotídeos ou dNTPs, os primers e
a Taq DNA polimerase.
II- Para o processo de RT-PCR, é utilizada uma enzima denominada como termoestável, como a Taq DNA
polimerase.
III- Para o processo de RT-PCR, utiliza-se a fita molde de mRNA, os nucleotídeos ou dNTPs, primers oligodT e
enzima transcriptase reversa.
Assinale a alternativa CORRETA:
Fonte: SANTOS, Carlos Ferreira dos et al. Transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase: princípios e
aplicações em odontologia. J. Appl. Oral Sci., v. 12, n. 1, p.1-11, 2004.
A As sentenças I e II estão corretas.

B As sentenças I e III estão corretas.

C As sentenças II e III estão corretas.

D Somente a sentença I está correta.

2 A técnica da reação em cadeia da polimerase (PCR) se refere à replicação in vitro de um fragmento de

DNA. Sobre o PCR, assinale a alternativa CORRETA:
A O processo de replicação in vitro, depende do uso de primers (oligonucleotídeos sintéticos), com sequências
de 18 a 22 nucleotídeos, que seja complementar ao gene de interesse.

B A ligação dos primers à fita de DNA é denominado como desnaturação.

C A enzima DNA polimerase humana é uma das principais responsáveis pelo sucesso da técnica in vitro.

D O processo do PCR não necessita da utilização de nucleotídeos.

3
A transcrição reversa é uma reação que ocorre pela ação da enzima transcriptase reversa ou RT. Essa enzima é
uma DNA polimerase dependente de RNA, ou seja, ela é capaz de sintetizar uma fita de DNA utilizando como
molde a fita simples de RNA. Sua descoberta se deu a partir da observação de que, quando os retrovírus, cujo
material genético é um RNA, infectam um hospedeiro, o RNA viral é convertido em DNA. Sobre a RT-PCR,
avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
I- Para o processo de transcrição reversa são necessários Oligonucleotídeos sintéticos, os quatro dNTPs, a
amostra de RNA e os cofatores enzimáticos. Ao invés da Taq DNA polimerase, essa técnica utiliza a enzima
transcriptase reversa.
PORQUE
II- O objetivo final da técnica é originar o DNA complementar ou cDNA, que é formado por essa enzima.
Assinale a alternativa CORRETA:
A As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.

B As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.

C As asserções I e II são proposições falsas.

D A asserção I é uma proposição verdadeira, mas a II é uma proposição falsa.

4 A escolha do gel para a técnica de eletroforese deve-se dar através do tamanho da molécula a ser isolada e
do objetivo do isolamento. Com base nas matrizes de agarose e poliacrilamida para a técnica de eletroforese em
gel, analise as sentenças a seguir:

I- A poliacrilamida pode separar fragmentos de DNA com até mesmo uma única base nitrogenada de diferença.
II- A agarose, apresenta menor resolução, ou seja, cada banda presente no gel, representa um agrupamento de
moléculas de tamanho semelhantes.
III- No gel de poliacrilamida, uma menor faixa de tamanho das moléculas pode se movimentar, enquanto
fragmentos maiores de DNA podem migrar facilmente no gel de agarose.

Assinale a alternativa CORRETA:

A As sentenças I, II e III estão corretas.

B Somente a sentença III está correta.

C Somente a sentença I está correta.

D Somente a sentença II está correta.

5 As endonucleases de restrição são produzidas naturalmente por diversas bactérias. De acordo com essas
enzimas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:

( ) As enzimas de restrição são utilizadas para fragmentar o DNA em regiões específicas, permitindo a
manipulação do DNA.
( ) Cada bactéria produz uma enzima de restrição específica, que pode ser isolada e purificada a partir de
colônias dessas bactérias.
( ) As enzimas de restrição não reconhecem sequências específicas, apresentando regiões de clivagem aleatórias
de 4 a 8 nucleotídeos.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A V - F - F.

B F - V - F.

C F - F - V.

D V - V - F.
 6 A clonagem de DNA se refere à produção, dentro de uma célula, de diversas cópias de uma sequência
específica de um fragmento de DNA. Sobre o exposto, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:

I- A clonagem de DNA depende da utilização de um vetor, do fragmento de DNA e, posteriormente, de um

organismo hospedeiro.

PORQUE

II- O fragmento de DNA de interesse, será inserido em uma molécula de DNA genômico com capacidade de
autorreplicação (DNA do vetor), originando o DNA recombinante. Essa inserção se dá através de enzimas de
restrição e enzimas de ligação.

Assinale a alternativa CORRETA:

A As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.

B A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.

C As asserções I e II são proposições falsas.

D As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.

7 O PCR produz uma série de cópias de um determinado fragmento de DNA ou cDNA de uma maneira
bastante rápida e eficiente. No entanto, de acordo com o seu objetivo de pesquisa, a PCR qualitativa ou
quantitativa se torna mais eficaz para fornecer os resultados esperados. De acordo com essas duas técnicas,
classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:

( ) A PCR qualitativa indica a presença de um fragmento específico de DNA ou cDNA em uma amostra, mas
não indica quanto do gene está expresso na amostra.
( ) A qPCR é conhecida como PCR em tempo real (quantitativa) e fornece informações precisas relativas à
quantidade de expressão de um gene.
( ) A PCR qualitativa necessita de um termociclador específico capaz de quantificar a amplificação dos
fragmentos de DNA ao final de cada ciclo em tempo real.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A F - V - F.

B V - V - F.

C V - F - F.

D F - F - V.
 8
[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o roteiro de hibridização, o sucesso dessa prática depende da
capacidade do DNA de se anelar às sequências complementares após a desnaturação (período em que a fita de
DNA é simples). Dessa forma, o ponto de fusão do DNA, ou seja, o momento em que ocorre a ruptura das pontes
de hidrogênio e a abertura da dupla fita de DNA, varia de um organismo para outro. O ponto de fusão do DNA
também depende da quantidade de pares de base G-C e A-T, sendo que, quanto mais pares G-C, maior o ponto de
fusão do genoma. Isso ocorre porque o par G-C é mais estável, apresentando três pontes de hidrogênio, enquanto
o par A-T conta apenas com duas. Após o anelamento da sonda com sua sequência-alvo complementar, o padrão
de hibridização é visto em microscópio de fluorescência. Além do ponto de fusão, outros fatores podem interferir
na hibridização da sonda de DNA. Sobre esses fatores, analise as opções a seguir:
I- Temperatura de fusão.
II- pH alto para produzir condições de hibridização.
III- Concentração de cátions monovalentes.
IV- Presença de solventes orgânicos.Assinale a alternativa CORRETA:
A Somente a opção I está correta.

B Somente a opção II está correta.

C Somente a opção III está correta.

D As opções I, II, III e IV estão corretas.

9 A descoberta da estrutura do DNA, por James Watson, Francis Crick, Maurice Wilkins e Rosalind Franklin,
em 1950, possibilitou o entendimento a respeito da replicação e transmissão da informação genética de uma
célula à outra. Sobre o DNA, assinale a alternativa CORRETA:
A O DNA é uma estrutura em dupla hélice, composta pela pentose, denominada desoxirribose, os nucleotídeos,
adenina, timina, citocina e guanina, e fosfato.

B O DNA é composto por cinco nucleotídeos, adenina, uracila, timina, guanina e citosina.

C O DNA é uma estrutura em fita simples, composta pelos nucleotídeos adenina, timina, citosina e guanina.

D O DNA é formado por duas fitas que não se complementam entre si.

10
[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Segundo o sumário da aula prática, as amostras
contendo o DNA ou RNA purificados devem ser: 1) ressuspensas em um tampão e armazenadas em tubos, ambos
“livres” de enzimas que possam degradá-las (como DNAse ou RNAse – nucleases); e 2) mantidas em baixas
temperaturas (-20 ºC ou - 80 ºC). Todos os procedimentos devem ser realizados com luvas para evitar a
degradação das amostras, devido à presença de nucleases nos fluidos corporais das mãos. De acordo com o
processo de extração de DNA e RNA identificado na prática, associe os itens, utilizando o código a seguir:
I- Etapa de Lise.
II- Etapa de Ligação.
III- Etapa de Lavagem.
IV- Etapa de Eluição.
( ) Pipete 25 µl da Proteinase K no tubo Eppendorf. Em seguida, pipete 200 µl da amostra de sangue no mesmo
tubo e, por último, pipete 200 µl do tampão lise S no tubo. Tampe o Eppendorf e homogeneíze no Vórtex por 20
segundos. Após esse tempo, incube o Eppendorf por 15 min.
( ) Pipete 210 µl de álcool 96% no Eppendorf e homogeneíze de novo no Vórtex. Em seguida, pipete 640 µl do
Eppendorf para o tubo spin e centrifugue a 11.000 rpm por 1 minuto.
 ( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta.
Em seguida, pipete 500 µl do tampão de lavagem SI no tubo spin e centrifugue novamente. Repita o mesmo
processo de troca de tubo de coleta, porém a lavagem utilizará 600 µl do tampão de lavagem SII, e centrifugue
novamente. Por fim, repita o mesmo processo da troca do tubo de coleta e centrifugue novamente.
( ) Retire o Eppendorf da centrífuga, descarte o tubo de coleta e coloque o tubo spin em um novo tubo de coleta.
Em seguida, pipete 200 µl do tampão de eluição S no tubo spin, espere 1 minuto e centrifugue a amostra.
Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:
A II - III - IV - I.

B I - II - III - IV.

C I - II - IV - III.

D IV - III - II - I.

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