16/11/2023, 19:10 Avaliação I - Individual

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GABARITO | Avaliação I - Individual (Cod.:883916)
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Prova 74656131
Qtd. de Questões 10
Acertos/Erros 10/0
Nota 10,00

1 Para construir uma biblioteca de DNA, utiliza-se técnicas de clivagem com enzimas de restrição
e clonagem em vetor. Com base nas etapas para construção de uma biblioteca de DNA, ordene os
itens a seguir:

I- Fragmentos de DNA são inseridos em vetores idênticos e ligados através da DNA ligase.
II- Clivado do DNA com uma enzima de restrição, formando centenas a milhares de fragmentos de
DNA.
III- Inserção do vetor em células hospedeiras, produzindo a clonagem dos diferentes fragmentos.
IV- Extrair e isolar o DNA genômico de uma célula, tecido ou até mesmo de um organismo.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A I - III - II - IV.

B IV - II - I - III.

C I - IV - III - II.

D IV - II - III - I.

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"A PCR pode ser precedida por uma reação de transcrição reversa (RT) para a obtenção de cDNA a
partir de RNA (RT-PCR), representando, por exemplo, uma possibilidade de análise de expressão
gênica em células ou tecidos" (SANTOS, 2004, s.p.). Sobre os componentes essenciais para a
realização da técnica de PCR e RT-PCR, analise as sentenças a seguir:
I- Para o processo de PCR convencional, utiliza-se a fita molde de DNA, os nucleotídeos ou dNTPs,
os primers e a Taq DNA polimerase.
II- Para o processo de RT-PCR, é utilizada uma enzima denominada como termoestável, como a Taq
DNA polimerase.
III- Para o processo de RT-PCR, utiliza-se a fita molde de mRNA, os nucleotídeos ou dNTPs, primers
oligodT e enzima transcriptase reversa.
Assinale a alternativa CORRETA:
Fonte: SANTOS, Carlos Ferreira dos et al. Transcrição reversa e reação em cadeia da polimerase:
princípios e aplicações em odontologia. J. Appl. Oral Sci., v. 12, n. 1, p.1-11, 2004.
A As sentenças II e III estão corretas.

B As sentenças I e III estão corretas.

C As sentenças I e II estão corretas.

D
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Somente a sentença I está correta.

3 As endonucleases de restrição são produzidas naturalmente por diversas bactérias. De acordo

com essas enzimas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:

( ) As enzimas de restrição são utilizadas para fragmentar o DNA em regiões específicas, permitindo
a manipulação do DNA.
( ) Cada bactéria produz uma enzima de restrição específica, que pode ser isolada e purificada a
partir de colônias dessas bactérias.
( ) As enzimas de restrição não reconhecem sequências específicas, apresentando regiões de
clivagem aleatórias de 4 a 8 nucleotídeos.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A F - F - V.

B V - V - F.

C F - V - F.

D V - F - F.

4 Com o passar do tempo, as técnicas de sequenciamento ficaram mais sofisticadas e

automatizadas. Sobre o sequenciamento de segunda geração, analise as sentenças a seguir:

I- O Next Generation Sequencing (NGS) não utiliza nucleotídeos terminadores de cadeira, permitindo
a criação de plataformas mais eficientes e rápidas.
II- Os métodos de segunda geração compreendem o uso de plataformas portáteis com processamento
rápido e eficiente, em plataformas do tamanho de um pen drive.
III- Os métodos de segunda geração compreendem o pirosequenciamento, o sequenciamento por
síntese, sequenciamento por terminação de cadeia reversível, sequenciamento por hibridização e
ligação, dentre outros.

Assinale a alternativa CORRETA:

A As sentenças I e III estão corretas.

B Somente a sentença II está correta.

C Somente a sentença I está correta.

D As sentenças I e II estão corretas.

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[Laboratório Virtual - Extração e Purificação de DNA e RNA] Conforme o sumário da prática, os
ácidos nucleicos apresentam características estruturais específicas, que permitem que sejam isolados e
manipulados para diversos tipos de aplicações. A técnica de hibridização in situ, por exemplo, baseia-
se na complementaridade das fitas de DNA ou RNA, utilizando sondas fluorescentes para a detecção
da fita complementar em uma determinada amostra. Essa técnica permite o estudo da expressão
gênica. Outra técnica, que também tem o mesmo princípio e finalidade, é a reação em cadeia da
polimerase transcriptase reversa (RT-PCR), muito utilizada no diagnóstico de algumas infecções e
doenças. Considerando esses aspectos, o primeiro passo para a maioria das técnicas citadas é o
isolamento e a purificação das moléculas de DNA e RNA. O processo de extração do DNA pode ser
dividido em etapas.
Com relação às etapas visualizadas na aula prática, assinale a alternativa CORRETA:
A A primeira etapa é a Etapa de Ligação, em que adicionamos 250 µl de Proteinase K, 20 µl da
amostra e 20 µl do tampão de lise S.

B Na Etapa de Lavagem, são adicionados 210 µl de álcool 96%.

C A segunda etapa é denominada como Etapa de Ligação, em que é adicionado álcool 96% no
eppendorf, homogeneizado, e 640 µl são transferidos para o tubo spin.

D O principal composto adicionado na Etapa de Ligação é a Proteinase K.

6 O uso de bibliotecas de DNA ou cDNA permitem a manutenção e replicação do material

genético em grandes coleções mantidas em colônias de bactérias, nas quais um fragmento específico
de DNA ou um gene podem ser procurados. Sobre as bibliotecas de DNA e cDNA, avalie as asserções
a seguir e a relação proposta entre elas:

I- A bactéria E. coli é a principal célula hospedeira utilizada no processo de clonagem em vetores,

inclusive na construção de bibliotecas de DNA e cDNA, em que cada bactéria irá internalizar apenas
um vetor.

PORQUE

II- Assim que o vetor é inserido, em condições adequadas de diluição e meio de cultivo, em poucas
horas corre a formação de diversos clones dos fragmentos inseridos, sendo cada um encontrado em
uma colônia diferente de crescimento bacteriano.

Assinale a alternativa CORRETA:

A As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.

B A asserção I é uma proposição falsa, e a II é uma proposição verdadeira.

C As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.

D As asserções I e II são proposições falsas.

7 O PCR produz uma série de cópias de um determinado fragmento de DNA ou cDNA de uma
maneira bastante rápida e eficiente. No entanto, de acordo com o seu objetivo de pesquisa, a PCR
qualitativa ou quantitativa se torna mais eficaz para fornecer os resultados esperados. De acordo com
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essas duas técnicas, classifique V para as sentenças verdadeiras e F para as falsas:

( ) A PCR qualitativa indica a presença de um fragmento específico de DNA ou cDNA em uma

amostra, mas não indica quanto do gene está expresso na amostra.
( ) A qPCR é conhecida como PCR em tempo real (quantitativa) e fornece informações precisas
relativas à quantidade de expressão de um gene.
( ) A PCR qualitativa necessita de um termociclador específico capaz de quantificar a amplificação
dos fragmentos de DNA ao final de cada ciclo em tempo real.

Assinale a alternativa que apresenta a sequência CORRETA:

A F - F - V.

B V - F - F.

C F - V - F.

D V - V - F.

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A transcrição reversa é uma reação que ocorre pela ação da enzima transcriptase reversa ou RT. Essa
enzima é uma DNA polimerase dependente de RNA, ou seja, ela é capaz de sintetizar uma fita de
DNA utilizando como molde a fita simples de RNA. Sua descoberta se deu a partir da observação de
que, quando os retrovírus, cujo material genético é um RNA, infectam um hospedeiro, o RNA viral é
convertido em DNA. Sobre a RT-PCR, avalie as asserções a seguir e a relação proposta entre elas:
I- Para o processo de transcrição reversa são necessários Oligonucleotídeos sintéticos, os quatro
dNTPs, a amostra de RNA e os cofatores enzimáticos. Ao invés da Taq DNA polimerase, essa técnica
utiliza a enzima transcriptase reversa.
PORQUE
II- O objetivo final da técnica é originar o DNA complementar ou cDNA, que é formado por essa
enzima.
Assinale a alternativa CORRETA:
A As asserções I e II são proposições verdadeiras, e a II é uma justificativa da I.

B As asserções I e II são proposições verdadeiras, mas a II não é uma justificativa da I.

C A asserção I é uma proposição verdadeira, mas a II é uma proposição falsa.

D As asserções I e II são proposições falsas.

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[Laboratório Virtual - Hibridização] Segundo o sumário da aula prática, a hibridização é uma técnica
que tem o princípio da complementariedade das bases nitrogenadas dos ácidos nucleicos como base
(adenina com timina e citosina com guanina). Essa técnica consiste, de forma básica, em localizar
sequências de interesse no genoma de quaisquer organismos, hibridizando-as ao próprio DNA da
espécie.
Considerando a aula prática de hibridização, assinale a alternativa CORRETA:
A A técnica de CGH array é avaliada diretamente no microscópio, sem o uso de scanner.

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B O reagente DAPI é adicionado logo no início da reação, junto à sonda na técnica de FISH, sem
necessidade de incubação.

C A técnica de FISH utiliza a marcação de vários genes.

D Ao final da reação é possível visualizar as células marcadas com pontos verdes e vermelho.

10 A terceira geração de métodos de sequenciamento de DNA, possibilitaram analisar as

sequências de nucleotídeos de uma única molécula de DNA, sem a necessidade de amplificar a
molécula. Sobre esses métodos, assinale a alternativa CORRETA:
É o mais recente avanço em biologia molecular, que permite o sequenciamento de DNA de forma
A portátil, capaz de sequenciar grandes moléculas de DNA em pequenos equipamentos,
semelhantes a pen drives. A plataforma MinION é a mais utilizada.
A terceira geração de sequenciamento utiliza DNA fragmento que é transformado em fragmentos
B de DNA circular, os quais são replicados em chips com nano-poços. A cada novo nucleotídeo
adicionado à nova fita, ocorre a emissão de fluorescência e a detecção ocorre em tempo real.
É um método totalmente automatizado, também conhecido como Illumina, em que o DNA a ser
C sequenciado é fragmentado por nebulização e os fragmentos são acoplados a uma placa de vidro
por meio de primers adaptadores, formando uma biblioteca de DNA, que será submetida ao PCR.
Para os métodos de terceira geração, são utilizadas plataformas 454, que são esferas sólidas, nas
D quais são ligadas as sequências adaptadoras, com o DNA a ser sequenciado, formando uma
biblioteca de DNA.

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