BIOLOGIA - AULA: TÉCNICAS MOLECULARES

Conceitos
1. Engenharia genética: constitui um conjunto de técnicas de análises moleculares
que permitem estudos de caracterização, expressão e modificação do material
genético (DNA e RNA) dos seres vivos.
a. Possibilita: mapeamento de sequências genômicas;
b. Clonagem;
c. Terapia genética;
d. Transgênicos;

2. Manipulação do DNA
a. Molécula de DNA recombinante: molécula de DNA que sofreu alguma
modificação quando comparada com a molécula de origem;
b. Clivagem com enzimas de restrição;
c. A inserção de um plasmídeo.

Extração de DNA (Etapas)

a. Lise da membrana plasmática e nuclear;
b. Degradação das proteínas com a utilização de sais específicos;
c. Isolamento do DNA;
d. Checagem da qualidade do DNA por eletroforese → quanto maior a integridade
melhor é a análise do DNA.

Técnicas de Extração
1. Enzimas de restrição: cortam o DNA, realizam a clivagem;

2. Técnica de PCR (Reação em Cadeia de Polimerase): é uma técnica de replicar

várias cópias de uma região específica do DNA a partir de uma única molécula, de
tal forma que após inúmeros ciclos de amplificação teremos quantidade de DNA
suficiente para ser detectado e manuseado para diversos fins;
A quantidade de DNA obtido no PCR cresce exponencialmente conforme são
passados os ciclos: (2⁰ → 2¹ → 2² → 2³ → 2⁴ … etc.)
a. 1ª etapa: Desnaturação: corresponde à separação da dupla fita de DNA por
elevação de temperatura;
b. 2ª etapa: Anelamento do primer;
c. 3ª etapa: Polimerização: adição de nucleotídeos complementares.

Aplicações do PCR
a. Sequenciamento de genes;
b. Diagnóstico de doenças hereditárias;
c. Testes de paternidade na medicina forense;
d. Diagnóstico de doenças infecciosas;
e. Estudos populacionais.
 Técnica de PCR

3. Eletroforese: processo de diferenciação do tamanho dos DNAs, onde é utilizado um gel

com coloração (que se fixa entre as bases do DNA) que é passado por luz U.V., nessa
técnica é possível reconhecer o número de pares de bases.