Bases Biológicas

Prof. Dr. Layon Zafra Lemos

 TÓPICOS DE BIOLOGIA MOLECULAR

▰ Enzimas de restrição e eletroforese em gel:

▰ A manipulação do DNA e RNA in vitro, depende inicialmente da disponibilidade de

enzimas específicas que possam cortar, ligar e replicar o DNA ou transcrever de
forma reversa o RNA.

▰ Enzimas de restrição, que cortam as moléculas de DNA em fragmentos

específicos podendo os mesmos ser manipulados.
▻ Endonucleases de restrição são encontradas nos procariotos (bactérias):
Exemplo: Eco para Escherichia coli

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• Eletroforese em gel:

• Método habitualmente usado para

separar e também purificar
macromoléculas, principalmente
ácidos nucleicos e proteínas.
• Essas macromoléculas são
submetidas a um campo elétrico, na
qual migram para um polo positivo ou
negativo de acordo com a sua carga. Equipamento de eletroforese em gel –
A)cuba horizontal de eletroforese,
• Gel constituído por agarose e B) B) Fonte de eletroforese.
poliacrilamida.
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• Técnicas de southern, northern e western blots:

• Southern blot: técnicas de hibridização mais importante para detectar sequências

específicas de DNA.

• Northern Blot: expressão gênica, ou seja, verificar se um determinado gene de um

genoma.

• Western blots: detectar proteínas ou um extrato de um tecido biológico.

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• PCR (Reação da polimerase em cadeia):

• Moléculas de DNA são amplificadas milhares ou milhões de vezes de uma forma

bem rápida.

• Todo este procedimento é realizado in vitro aumentando a quantidade da amostra

extraída do DNA de qualquer indivíduo.

• Sua aplicabilidade: testes de identificação genética, na medicina forense, no

diagnóstico de diversas doenças infecciosas, etc.

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• PCR (Reação da polimerase em cadeia):

• A técnica é baseada na capacidade da enzima DNA polimerase sintetizar uma nova

fita de DNA complementar a uma fita molde.

• Etapas de uma PCR:

• Amostra de DNA; Primers; Bases nucleotídicas (dNTPs); Enzima Taq polimerase.
• Desnaturação, Anelamento e Extensão.

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• Etapas de uma PCR:

• Desnaturação: a fita dupla de DNA molde é aquecida e separada em duas fitas

simples. A temperatura pode variar entre 94 – 98°C.
• Anelamento ou Hibridização: a temperatura da reação é reduzida entre 50 e 65°C
por 20 – 40 segundos para que ocorra o anelamento dos primers à fita simples de
DNA molde.
• Extensão ou Polimerização: a temperatura é aumentada e a nova cadeia de DNA
é feita pela enzima Taq polimerase. A temperatura durante esse passo varia
dependendo da polimerase utilizada.

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CRÉDITOS - REFERÊNCIAS

Agradecimentos, citações, referencias:

Imagem Slide 3 : https://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/a/a6/Gel_electrophoresis_apparatus.JPG

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Obrigado!
Prof. Dr. Layon Zafra Lemos
Contatos: layon.zafra@fatecie.edu.br