Engenharia Genética

Construção de novos seres vivos?

A engenharia genética permite manipular os genes
de determinados organismos e transferi-los de umas
espécies para outras.
Técnicas utilizadas:

• Tecnologia do DNA recombinante - rDNA

• Tecnologia do DNA complementar - cDNA

• Reacções de polimerização em cadeia - PCR

• DNA fingerprint ou impressões digitais genéticas

Tecnologia de DNA recombinante
Permite combinar na mesma molécula de DNA genes
provenientes de fontes diferentes, dando origem a uma
molécula de DNA recombinante (rDNA).

Baseia-se na utilização de ferramentas moleculares:

 enzimas de restrição.

 ligases do DNA.

 vectores.
Tecnologia de DNA recombinante
Enzimas de Restrição
Foram descobertas em bactérias
que produzem estas enzimas
(endonucleases de restrição)
para se defenderem de outros
organismos parasitas
por ex. Vírus.

Estas enzimas reconhecem e

cortam sequências específicas
do DNA viral inactivando-o.
Tecnologia de DNA recombinante
Enzimas de Restrição
Reconhecem determinadas sequências de DNA e cortam a molécula
nestes locais - as zonas de restrição.
Estas zonas correspondem a sequências de DNA simétricas que se
lêem da mesma forma nas 2 cadeias na direcção 5`- 3`.

Originam fragmentos de DNA em dupla hélice - Fragmentos de restrição,

com extremidades em cadeias simples - extremidades coesivas.

DNA
Tecnologia de DNA recombinante
Enzimas de Restrição

Actualmente já foram
identificadas mais de
100 Enzimas de
Restrição.

O nome das enzimas

compõe-se das iniciais do
nome da espécie e às
vezes da sigla da
linhagem da bactéria que
a produz.
Tecnologia de DNA recombinante
Ligases do DNA
As extremidades coesivas podem ligar-se por complementariedade a
outro DNA, catalisadas por outras enzimas - ligases do DNA
Tecnologia de DNA recombinante
Vectores
São moléculas de DNA que transportam segmentos de DNA de um
organismo para outro. Os mais utilizados são: Plasmídeos e Vírus
Tecnologia de DNA recombinante
Produção de insulina humana

Actualmente cerca de 50% da

insulina humana é produzida
por leveduras geneticamente
modificadas da espécie
Saccharomyces cerevisiae.
Tecnologia de DNA recombinante
 Biblioteca de genes

Os genes clonados através da

tecnologia do rDNA podem ser
conservados em
bibliotecas genómicas ou
bibliotecas de genes

Ficam assim disponíveis para

posteriores utilizações.

As bibliotecas de Genes podem

também ser conseguidas
utilizando outra tecnologia -
DNA complementar - cDNA.
 DNA complementar - c DNA
Os procariontes são muito utilizados em Engenharia
Genética porque:
• São fáceis de cultivar.
• Têm um crescimento rápido.
• Têm processos bioquímicos bem conhecidos.

No entanto, não processam o mRNA e, quando recebem

genes com intrões, estes não são retirados e a proteína
produzida não é funcional.
Este problema pode ser ultrapassado pela obtenção e
transferência de DNA complementar ou cDNA.
 DNA complementar - c DNA
O cDNA é um DNA sintético, sem intrões, que é produzido a partir de
um mRNA funcional pela acção da transcriptase reversa.
A transcriptase reversa foi isolada em vírus que
possuem a sua informação codificada em RNA e que
necessitam de a passar para DNA quando infectam as
células para se reproduzirem.

1 - Isola-se uma molécula mRNA funcional

das células.
2 - Adiciona-se transcriptase reversa e
nucleótidos livres. A transcriptase reversa
cataliza a síntese de uma cadeia simples de
DNA a partir de uma molécula de mRNA que
funciona como molde.
3 - Junta-se uma enzima que degrada o
mRNA que serviu de molde e DNA
polimerase que cataliza a formação da
cadeia complementar de DNA.
 Reacção de polimerização em
cadeia - PCR
Estas tecnologias, rDNA e cDNA, são muito eficazes mas como o
processo de clonagem é feito em células na sua maioria bactérias,
torna-se muito moroso e trabalhoso.

Para resolver este problema foi desenvolvida uma técnica em 1983 - o

PCR que permite a amplificação de genes in vitro em oposição à
clonagem in vivo.
Obtêm-se assim, muitas cópias de DNA em pouco tempo.

Utiliza-se uma enzima Taq polimerase extraída de uma

bactéria - Termus aquaticus que habita nas fontes
termais com temperaturas iguais ou superiores a100OC.

Recorre-se actualmente a
termocicladores.
 Reacção de polimerização em
cadeia - PCR
O PCR é uma técnica que permite amplificar qualquer porção de DNA
fora das células.
1 - Desnaturação da dupla hélice - O fragmento de DNA é aquecido de modo a separar as 2 cadeias.

2 - Emparelhamento dos
iniciadores - Diminui-se a
temperatura para ocorrer a
ligação dos pequenos
fragmentos iniciadores
(primers).

3 - Polimerização (síntese) de
DNA - Adicionam-se
nucleótidos livres e DNA
polimerase resistente ao
calor -Taq polimerase
Esta liga-se aos iniciadores
promovendo a formação de
uma cadeia complementa
reconstituindo a dupla hélice.
O procedimento é repetido e em cada ciclo a quantidade de DNA duplica.
 Reacção de polimerização em
cadeia - PCR
Esta técnica permite a obtenção de biliões de cópias de uma porção
de DNA em poucas horas (cada ciclo demora alguns minutos) e é
executada por máquinas.
DNA fingerprint ou impressões
digitais genéticas
Com excepção dos gémeos
verdadeiros, cada indivíduo
possui o seu próprio DNA,
que é único.

Em 1984, com base neste

princípio, foi possível
desenvolver uma técnica
destinada a identificar
porções de DNA - DNA
fingerprint ou impressões
digitais genéticas
 DNA fingerprint ou
impressões digitais genéticas
No genoma humano existem sequências de DNA repetitivas que
são reconhecidas e cortadas por determinadas enzimas de
restrição.

Estas enzimas dividem o DNA em fragmentos cujas dimensões e

composição em nucleótidos variam de pessoa para pessoa.

Diferentes fragmentos de DNA movimentam-se de modo diferente

quando sujeitos a electroforese e o resultado é um padrão de
bandas que difere de indivíduo para indivíduo.
 DNA fingerprint ou
impressões digitais genéticas
Os fragmentos de DNA são Técnica de electroforese
aplicados numa camada de gel e
submetidos a um campo
eléctrico.
Quando a corrente é ligada, os
fragmentos movem-se a
velocidades inversamente
proporcionais ao seu tamanho.
Quando o campo é desligado,
fragmentos do mesmo tamanho
estacionam juntos em
determinada posição do gel,
formando faixas.

Fotos do gel tratados sob

iluminação ultravioleta revelam
um padrão de faixas típicas do
DNA analisado que é
característico para cada pessoa
e corresponde à sua impressão
digital genética.
Aplicações
 DNA fingerprint
Aplicações
Determinação da Investigação criminal, forense e
paternidade histórica.

A técnica permite
partir de material
biológico deixado no
local (cabelo,
sangue,esperma,...)
e compará-lo com o
dos suspeitos;
permite a
A comparação das impressões identificação de
digitais genéticas dos cadáveres.
progenitores e do descendente
permite excluir a paternidade ou
confirmá-la com um elevado grau
de certeza.
Tecnologia de DNA recombinante
Aplicações:

• Investigação fundamental
Torna possível isolar genes de organismos complexos e estudar as suas
funções a nível molecular.

• Obtenção de organismos geneticamente modificados -

- OGM
Os OGM são utilizados:

• Agricultura e indústria agroalimentar.

• Saúde e indústria farmacêutica.

• Produção de substâncias com aplicação industrial.

• Ambiente.
Tecnologia de DNA recombinante
Investigação fundamental
É possível estudar a sequência de DNA de muitos organismos quer
eucariontes quer procariontes.

A automatização das técnicas permitiu a criação

de base de dados contendo milhares de
sequências de genes - microchips de DNA.

Todos os cDNA do genoma inteiro podem ser

dispostos em chips.

Os microchips permitem:
• Detectar antecipadamente doenças genéticas.

• Pesquisar informação sobre a estrutura e microchips de DNA - amostras

função de um gene e também estabelecer
possíveis relações evolutivas entre os
diferentes organismos.
de DNA colocadas em certas
disposições ligadas a um “chip”
de vidro.
Tecnologia de DNA recombinante
Agricultura e indústria agroalimentar.

Outros ex:
• Arroz com maior valor nutritivo.
• Batatas com mais amido.
• Plantas resistentes às geadas e
às secas...

Milho resistente às pragas

Tecnologia de DNA recombinante
Saúde e indústria farmacêutica.
Produção de moléculas com Interesse farmacológico.

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Terapia génica

Substituição de genes que provocam doenças hereditárias num indivíduo adulto.

Foi já utilizada em crianças com menos de um ano.
Tecnologia de DNA recombinante
Produção de substâncias com aplicação industrial

O corante indigo dos jeans é produzido por

estirpes de E. Coli geneticamente modificadas

Ambiente

É possivel inserir genes em bactérias que passam

a ser capazes de limpar produtos tóxicos.
Engenharia Genética

Problemas Bioéticos
 Engenharia Genética e os
Problemas Bioéticos
A engenharia genética levanta problemas bioéticos, nomeadamente:

Aspectos ambientais
• Disseminação incontrolada de genes
• Alterações definitivos de genomas de certas espécies
• Redução da biodiversidade

Aspectos humanos
• Alteração do genoma humano
• Hipotética manipulação do indivíduo e da família
• Quebra de privacidade
• Discriminação com base em dados genéticos
• Eugenia
 Engenharia Genética e os
Problemas Bioéticos
É necessário um grande debate publico, a fim de que cada cidadão
ganhe consciência das enormes potencialidades e dos perigos desta
ciência do futuro.
Adoptar uma posição informada e sem preconceitos permite escolher
e decidir, sem fantasmas nem tabus, o futuro que queremos deixar às
novas gerações.

“A genética que entrou timidamente neste século como uma pura

tentativa de explicação da hereditariedade natural, sai dele como uma
ciência de reconstrução artificial dos seres vivos. Entrou como uma
área do interesse estritamente científico e sai agora como uma
ciência que agita toda a sociedade.
A nova genética constitui um forte desafio à humanidade no dealbar
do novo milénio.”
Luís Archer