APLICAÇÕES DA GENÉTICA:

ENGENHARIA GENÉTICA
 Técnicas de DNA recombinante

Utilizando as enzimas de restrição bacterianas, tornou-se

possível cortar dois DNAs diferentes e, pela ação de enzimas
ligases, unir os segmentos resultantes e formar um DNA
recombinante - Tecnologia do DNA Recombinante

Assim, os cientistas têm desenvolvido técnicas que permitem

transferir os genes de um tipo celular para outro (por exemplo,
de plantas e animais para as bactérias).

Cronologia:
1974 (Cohen & Boyer) – Combinam DNA de um anfíbio com o de
uma bactéria (E. coli), produzindo o primeiro ser com DNA
recombinante
 Técnicas de DNA recombinante - cronologia

 A partir daí, teve início a Engenharia Genética ou

Tecnologia do DNA recombinante.
 1976 – Desenvolvida a primeira proteína humana numa
bactéria geneticamente modificada.
 1982 – Iniciou-se a comercialização da primeira droga
recombinante ou transgénica, a insulina humana.
 1982 – Desenvolvido primeiro animal transgénico (rato).
 1983 – Desenvolvida primeira planta transgénica (tabaco).
 1994 – Iniciou-se a comercialização do primeiro produto
transgénico (Tomate Flavr-Savr).
 Técnicas de DNA recombinante

O que permitem fazer?

- Estudar processos biológicos
- Obter benefícios em várias áreas: saúde, biologia,
bioquímica, microbiologia, genética, biotecnologia, agricultura, etc.
 Técnicas de DNA recombinante

O que possibilitam?
- clonagem, identificação e regulação de genes
- estudo de doenças hereditárias e terapia génica
- produção de proteínas, drogas e vacinas
- melhoramento de culturas e animais
- etc..

Utilizam:
- enzimas de restrição
- vetores
- DNA ligase
- células hospedeiras….
 Técnicas de DNA recombinante
É possível ligar DNA de diferentes organismos e produzir uma molécula
de DNA recombinante:

1- O DNA dador e um vetor, são cortados

com a mesma enzima de restrição

2- O DNA dador é ligado ao DNA do vetor,

criando uma molécula recombinante

3 - A molécula recombinante (DNA dador +

vetor) é introduzida num hospedeiro
(procariótico ou eucariótico), de forma a:

i) Conseguir muitas cópias do gene

(clonagem génica)
ii) Induzir a expressão do gene
inserido (produção de proteína
recombinante)
Técnicas de DNA recombinante
 Enzimas de restrição
Enzimas bacterianas que cortam as moléculas de DNA, em
cadeia dupla, em locais que apresentam uma determinada
sequência específica de nucleótidos (com 4 a 8 pares de
bases) → sítio ou local de restrição
 Moléculas de DNA vetores
Molécula de DNA à qual o DNA estranho pode ser ligado e
posteriormente inserido nas células de modo a que o DNA
recombinante se possa replicar

Características:
1- Moléculas pequenas e bem caracterizadas

2- Contêm:
- Uma origem de replicação autónoma
- sítios de corte únicos para enzimas de restrição (polylinker)
- marcador de seleção (ex. gene de resistência a um antibiótico)

3- Fácil de purificar
Moléculas de DNA vetores
 Moléculas de DNA vetores

Tipos de vetores de clonagem

Vetor Tamanho do DNA a clonar

 Vetores de clonagem

Plasmídeos Cosmídeos
- plasmídeos recombinantes
(plasmídeos + bacteriófago λ).
- são moléculas de DNA circulares
pequenas (5.000 a 7.000 pb)

Vírus
 Vetores de clonagem

Bacteriófagos
 DNA ligase
Catalisam a formação de ligações fosfodiéster entre o
segmento do DNA estranho e o DNA vetor
 DNA ligase
Catalisam a formação de ligações fosfodiéster entre o
segmento do DNA estranho e o DNA vetor
Introdução de DNA dentro das células hospedeiras

Hospedeiros Utilização
clonagem
Bactérias / leveduras

Células eucarióticas Terapia génica

 Introdução de DNA dentro das células hospedeiras

1 - Transferência Indireta de Genes

• mediada pelas bactérias Agrobacterium tumefaciens e
Agrobacterium rhizogenes e vírus

2- Transferência Direta de Genes

• Baseada em métodos físicos/químicos
EX. Biolística- Bombardeamento de tungsténio revestido por DNA

Microinjecção

Electroporação
 Introdução de DNA dentro das células hospedeiras
- Infeção das células hospedeiras (Agrobacterium)

Esquema do processo natural de

infeção de uma planta por
Agrobacterium:

A) As bactérias do solo são atraídas

pela planta, após um ferimento,
através de moléculas-sinal

B) T-DNA é transferido da bactéria para o

genoma da planta

C) Os genes presentes no T-DNA então

são expressos, sintetizando opinas e
hormonas vegetais (citocininas e
auxinas) provocando a formação de
galha.
 Introdução de DNA dentro das células hospedeiras

É preciso obter as linhagens “desarmadas”, i.e., linhagens nas quais o T-

DNA original, com os oncogenes, foi eliminado
 Introdução de DNA dentro das células hospedeiras

- Bombardeamento (tungsténio revestido por DNA) e microinjecção

Introdução de DNA dentro das células hospedeiras

- Eletroporação
Introdução de DNA dentro das células hospedeiras

- Micro-injecção
 Aplicação das técnicas do DNA recombinante

- Pecuária: Produção de vacinas, etc..

- Medicina: produção de hormonas, enzimas utilizadas no

tratamento de doenças (insulina humana)

- Indústria: produção de drogas, álcool, lacticínios, antibióticos…

- Agricultura: Aumento do valor nutritivo das culturas, resistência

a pragas, a temperaturas adversas, maior facilidade de colheita e
armazenamento…
Aplicação das técnicas do DNA recombinante: medicina
1 - Produção de proteínas e vacinas em plantas transgénicas
1 - Produção de proteínas e vacinas em plantas transgénicas
2 - Produção de proteínas em animais transgénicos

Ativador tecidual do
plasminogénio – ativa a
plasmina, enzima que dissolve
os trombos (ataque cardíaco)
3 - Produção de anticorpos humanos em animais transgénicos
4 - Produção de anticorpos humanos em plantas transgénicas
5 - Produção de insulina humana
6 - Hemoglobina humana

Ovelhas transgénicas com o gene da hemoglobina humana,

com o objetivo de se utilizar o sangue ao qual lhe será
extraído e purificado a hemoglobina

7 - Animais transgénicos imunogeneticamente preparados

para doar órgãos a pacientes humanos

8 - Terapia génica……
8 - Terapia génica……
No futuro…novas espécies????