1) Escolha um procedimento de análise laboratorial de Biologia Molecular e pesquise dois ou

três artigos técnicos / científicos sobre a aplicação desse método no diagnóstico de uma
doença humana e/ou animal.

Método: LAMP

Artigos:

• https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/32621958/
• https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34241828/
• https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7328634/

Outras fontes:

• https://www.neb.com/en/applications/dna-amplification-pcr-and-qpcr/isothermal-
amplification/loop-mediated-isothermal-amplification-lamp
• https://agronscience.com/amplificacao-isotermica-em-alca-loop-mediated-isothermal-
amplification-lamp-uma-revisao-sobre-aplicacoes/

2) Elabore um resumo descrevendo o método e a importância do uso dele no diagnóstico.

O parvovírus suíno é um dos vírus mais comuns na suinocultura, sendo endêmico na maioria
dos rebanhos. Ele é conhecido por causar falhas reprodutivas como o aborto, mumificação fetal,
morte embrionária e infertilidade. O PVS possui DNA de fita simples linear e capsídeo não
envelopado de simetria icosaédrica com 20 a 25nm de diâmetro.

A técnica de amplificação isotérmica mediada por laços ou em alça, também chamada de

LAMP (Loop-Mediated Isothermal Amplification), é uma ferramenta de diagnóstico molecular que
desempenha um papel importante na detecção rápida e precisa vírus, bactérias e outros agentes
infecciosos. A principal importância de LAMP reside na sua capacidade de amplificar material
genético de forma isotérmica, ou seja, em uma única temperatura constante, sem a necessidade de
ciclos de termociclamento.

Algumas das vantagens do LAMP são:

• Rapidez e Sensibilidade: O LAMP é extremamente sensível e pode amplificar sequências

específicas de DNA ou RNA em questão de minutos, tornando-se uma ferramenta valiosa
para a detecção precoce de infecções.
• Facilidade de Implementação: Comparado a outras técnicas moleculares, o LAMP é mais
simples de executar em termos de infraestrutura e equipamentos necessários.
• Viabilidade em Recursos Limitados: Devido à sua natureza isotérmica, o LAMP pode ser
realizado em equipamentos mais simples, o que é crucial para aplicações em áreas com
recursos limitados.

Para o diagnóstico de PSV, o LAMP é interessante justamente pela rapidez, simplicidade da técnica,
não sendo necessária a compra de equipamentos específicos como termocicladores e,
principalmente, pela possibilidade de ser feita a campo. Podemos usar como amostra, sangue e
tecidos (coração, pulmão, rim, baço e linfonodos) de fetos mumificados, fetos abortados e de leitões
que morrem em até 7 dias após o parto.
 Na LAMP, utiliza-se a enzima DNA polimerase que é capaz de desacoplar a dupla hélice de
DNA à medida que polimeriza uma nova fita e para que essa reação aconteça, devem ser utilizados
dois pares de primers internos e externos, que sejam capazes de reconhecer seis sequências do DNA
alvo. Podemos também utilizar mais um par de primers (loop primers) para acelerar a reação.

Após o preparo da reação e adicionado o DNA extraído em um tubo de eppendorf, a reação

deve ser colocada em banho-maria a 63°C por 30 minutos, e em seguida aquecida a 80°C por 5
minutos para o término da reação. A detecção pode ser feita de diferentes maneiras, como a
utilização de corantes que se ligam nas fitas duplas de DNA, irradiação com luz UV, fluorescência em
tempo real, eletroforese em gel, etc.