para obtenção e nota na disciplina de funcionamentos da enfermagem , turma gerencial PGGER2201BVTAOP Centro Universitário Claretiano.
Professora:Claudia
BOA-Vista-RR Eletroforese:
PRINCÍPIO - O químico sueco Arne Tiselius desenvolveu a eletroforese para o
estudo de proteínas de soro sanguíneo.
PARA QUE SERVE – É usado para separar e também purificar
macromoléculas, principalmente ácidos nucleicos e proteínas.
COMO FUNCIONA - A eletroforese envolve a passagem de uma corrente
através de um gel contendo as moléculas de interesse. Em função de seu tamanho e carga, as moléculas vão se mover através do gel em diferentes direções ou em diferentes velocidades, o que permite que sejam separadas umas das outras.
PARTICULARIDADES - Para serem observados os resultados, a mostra deve
ser exposta a luz ultra violeta onde os raios UV reagem com o brometo de etídio tornando assim possível a visualização das bandas.
PCR:
PRINCÍPIO - O pretensioso bioquímico Kary Mullis inventou a PCR, ferramenta
que redefiniu a ciência genética, enquanto dirigia seu carro no ano de 1983.
PARA QUE SERVE - Reação em cadeia de polimerase (PCR) é um método de
produção de um grande número de cópias de trechos pequenos de DNA a partir de amostras muito pequenas de material genético. O método também é chamado “amplificação” do DNA
TÉCNICA - A técnica de PCR (Polymerase Chain Reaction ou Reação em
Cadeia da Polimerase) é um método semiquantitativo rápido que possibilita a amplificação in vitro de fragmentos específicos de DNA, partindo-se de uma quantidade mínima de DNA-alvo ou de RNA previamente convertido em cDNA, a fim de obter material suficiente para as diversas análises.
UTILIZAÇÃO - A PCR convencional é baseada na amplificação das sequências
alvo seguidas por eletroforese em gel de agarose para visualização dos fragmentos de DNA amplificados e eventualmente sua posterior clonagem
Western blotting:
PARA QUE SERVE - é um método em biologia molecular/bioquímica para
detectar proteínas em um homogenato (células trituradas) ou em um extrato de um tecido biológico.
TÉCNICA - Os passos para a elaboração dessa técnica podem ser resumidos
em cinco etapas:
extração e quantificação das proteínas
eletroforese em gel de poliacrilamida
transferência das proteínas para uma membrana
incubação da membrana com um anticorpo para detectar a proteína específica
a ser analisada
revelação dessa membrana para análise dos dados.
ONDE É UTILIZADO - Bastante utilizada por pesquisadores em ciências
biomédicas e laboratórios de diagnóstico em diversos setores que necessitam de análise biológica como, por exemplo, testes que detectam a presença de HIV.
PARTICULARIDADES - O nome Western blot é um trocadilho do nome
Southern blot, uma técnica para detecção de DNA desenvolvida anteriormente por Edwin Southern. SOUTHERN BLOT:
PARA QUE SERVE - O Southern blot é uma técnica de biologia molecular
utilizada para conferir se uma determinada sequência de DNA encontra-se ou não presente em uma amostra de DNA analisada. Isto é realizado por meio de um realce da eletroforese em gel de agarose. A técnica recebeu esse nome em homenagem ao seu criador, o biólogo britânico Edwin Southern, levando ao batismo de outros métodos blot com trocadilhos ao nome de Southern.
TÉCNICA - O procedimento segue os seguintes passos:
Desnaturação;
Transferência do DNA para uma membrana;
Tratamento com a sonda.
ONDE É UTILIZADO -
Detectar DNA em determinada amostra
Testes de paternidade, identificação criminal, identificação de vítimas
Para isolar e identificar um gene de interesse
Usado no polimorfismo de comprimento de fragmento de restrição
Identificar mutação ou rearranjo gênico na sequência do DNA
No diagnóstico de doenças causadas por defeitos genéticos
Identificar agentes infecciosos
PARTICULARIDADES - Southern blotting é uma técnica versátil e poderosa
que permite aos pesquisadores analisar fragmentos de DNA, identificar sequências específicas, mapear genes e investigar variações genéticas. Ele fez contribuições significativas para pesquisa genética, diagnóstico e ciência forense NORTHERN BLOT:
PARA QUE SERVE : Permite que moléculas individuais de RNA mensageiro
(RNAm) sejam identificadas e medidas após a hibridação de suas sequências de DNA correspondentes.
TÉCNICA: Baseia-se na separação das moléculas de RNA por peso molecular
através de uma electroforese, seguindo-se a transferência para uma membrana e a detecção da molécula de RNA mensageiro de interesse por hibridação parcial de uma sonda específica.
ONDEÉUTILIZADO: na pesquisa em biologia molecular para estudar a
expressão gênica, ou seja, verificar se um determinado gene de um genoma é ou não transcrito em RNA e quantificar isso.
PARTICULARIDADES: Tendo sido descrita por James Alwine, David Kemp,
and George Stark, em 1977 na Universidade de Stanford, adotou o seu nome por ser uma variação ao Southern blot.