ACH5545 — Engenharia Genética

AULA 3: EXTRAÇÃO DE DNA GENÔMICO, PLASMIDIAL E

DE PROTEÍNAS

Relatório apresentado ao Bacharelado em

Biotecnologia como requisito parcial para
avaliação na disciplina de Engenharia Genética
(ACH5545), ministrada pelo professor Felipe
Santiago Chambergo Alcalde.

São Paulo

2022
 1. INTRODUÇÃO

DNA e RNA são polímeros de nucleotídeos arranjados de maneira precisa, cuja

complementaridade estrutural possibilita a preservação e transferência da informação genética
de eucariotos e procariotos. No caso dos eucariotos, o DNA está contido no núcleo, mas pode
também ser encontrado em mitocôndrias e cloroplastos. Se apresenta na forma de dupla
hélice, com fitas em sequência complementar de nucleotídeos interligados por pontes de
hidrogênio. O DNA de bactérias e de muitos vírus possui forma circular. As diferentes
sequências de nucleotídeos formam os diferentes genes, segmentos do DNA que codificam a
produção de determinado polipeptídeo ou RNA. No caso da bactéria Escherichia coli, o DNA
contém cerca de 4 milhões de pares de bases, que codificam cerca de 3300 proteínas
diferentes.
A extração do DNA de células eucarióticas e procarióticas é a etapa inicial
fundamental para procedimentos PCR (reação em cadeia da polimerase), clonagem,
sequenciamento, etc. O PCR possibilita a amplificação in vitro de regiões específicas do
genoma de qualquer organismo, já que possibilita a amplificação de sequências determinadas,
presentes numa mistura complexa, possibilitando diversos tipos de análise, como métodos de
diagnóstico específicos, análise de diversidade genética, testes de paternidade, análise forense,
etc. É um procedimento padronizado desde a obtenção dos ácidos nucleicos até sua
amplificação em si. Embora o DNA em sua forma dupla fita seja bastante estável, é
necessário cuidado para que não haja degradação da amostra. A sua extração, portanto, se dá
em duas fases: lises das células da amostra e a separação e purificação do seu DNA. O DNA é
separado dos demais componentes da célula por precipitação e suspensão desse precipitado
em volume determinado de água ultra destilada ou solução tampão própria. Outros processos
de concentração e purificação podem ser aplicados com o objetivo de melhorar os resultados
das amplificações. Procedimentos semelhantes são utilizados para separação e purificação de
plasmídeos e de proteínas, com pequenas alterações de acordo com o produto desejado.
A levedura Saccharomyces cerevisiae e a bactéria Escherichia coli são
organismos-padrão para estudos em laboratório devido suas características de disponibilidade,
segurança e facilidade de manuseio, crescimento e por serem passíveis das mais diversas
técnicas, sendo utilizadas como modelo em estudos genéticos, estruturas, funções e interações
entre proteínas.
 Sacaromyces cerevisiae foi o primeiro organismo eucarioto com genoma sequenciado
em 1996, e sua ampla caracterização permite estudos de genes de outros organismos
eucariotos. É muito utilizada na produção de proteínas heterólogas, e suas modificações
pós-traducionais permitiram a produção de diferentes proteínas do vírus da Hepatite C, por
exemplo.

2. OBJETIVOS
Extrair o DNA genômico, DNA plasmidial e proteínas recombinantes de um meio,
pontos objetivos de uma clonagem molecular.

3. RESULTADOS

4. DISCUSSÃO

5. CONCLUSÃO

A extração do DNA genômico de um indivíduo possibilita que o pesquisador tenha

acesso ao seu genoma, determinando até mesmo quais são as sequências que codificam para
um transcrito e as que não codificam nada. Sendo assim, pôde-se concluir que em uma
extração de DNA genômico é possível determinar o tamanho de um genoma, identificar até
mesmo a presença de éxons e íntrons, bem como regiões reguladoras desses genes. Além
disso, o grupo observou que existem metodologias adaptáveis a cada processo, onde por mais
que exista um preparo prévio dos kits utilizados nos procedimentos, ainda sim faz-se
importante entender as etapas de cada experimento.
Plasmídeos por sua vez possuem o potencial de atuarem como vetores de genes
direcionados para recombinação de proteínas. Sendo assim, o grupo concluiu que a extração
de seu material genético permite que o pesquisador possa propor edições nessas sequências,
inserindo sequências capazes de codificar uma proteína recombinante, um dos suprassumos
da engenharia genética. Outrossim, por mais que estejamos falando de moléculas de DNA
parecidas com o gDNA, ainda ocorre o manuseio de kits diferentes que asseguram o sucesso
do experimento.
Por sua vez, extrair as proteínas recombinantes de um meio é um dos objetivos de uma
clonagem molecular. Sendo assim, a extração de proteínas intracelulares ou extracelulares
vem sendo amplamente avaliada e direcionada para aprimoramentos. A realização do
experimento permitiu que fossem compreendidos os detalhes acerca de uma extração de
proteínas, bem como como funcionavam as etapas.

6. REFERÊNCIAS
MONTEIRO, Ana R.S.: Uso de Saccharomyces cerevisiae para estudo de organismos
procariotos. Departamento de Biologia Geral, UFMF. 2006

OLIVEIRA, Marcia et al. Fundamentos teórico-práticos e protocolos de extração e de

amplificação de DNA por meio de técnica de reação em cadeia de polimerase.
EMBRAPA Pecuária Sudeste, São Carlos, SP, 2007.