Roteiro de atividade 7

1. O que faz um biomarcador ser considerado bom?

É importante considerar que estes sejam facilmente mensuráveis, acessíveis e possíveis de
serem incluídos com facilidade em rotinas clínicas. De fato, o plasma e tecidos de biópsia são
os mais utilizados na busca por biomarcadores.
2. Pesquise e dê dois exemplos de biomarcadores utilizados para detecção de
alguma doença.
Podem ser de diversos tipos, tais como, fisiológicos (funções de órgãos), físicos (alterações
características em estruturas biológicas), histológicos (amostras de tecido obtidas por biópsia)
e anatómicos. Podem ser células específicas, moléculas, genes, enzimas ou hormonas.
3. Explique a reação de PCR, a função dos componentes que são necessários para
que a mesma ocorra com sucesso e suas etapas.
A PCR, que significa reação em cadeia da polimerase (do inglês polymerase chain reaction),
é uma técnica da biologia molecular para amplificar uma única ou poucas cópias de um
pedaço de DNA e baseia-se no processo de replicação do DNA que ocorre in vivo. Durante o
PCR elevadas temperaturas separam as moléculas de DNA em duas cadeias simples,
permitindo então a ligação de oligonucleotídeos iniciadores (primers), também em cadeia
simples e geralmente constituídos por 15 a 30 nucleótidos, obtidos por síntesis química.
Então, os dois pares de primers são acrescentados na reação. Se a determinada sequência
estiver presente na amostra, ela será multiplicada milhares de vezes, podendo configurar uma
reação positiva.

4. Por que eu preciso fazer uma eletroforese para verificar o resultado de uma PCR
convencional? Por que eu não preciso fazer eletroforese para PCR em tempo
real?
Os resultados de uma reação PCR são geralmente visualizados (tornam-se visíveis) através do
uso da eletroforese em gel. Eletroforese em gel é uma técnica na qual fragmentos de DNA
são puxados por uma corrente elétrica através de uma matriz de gel, e que separa os
fragmentos de DNA de acordo com o tamanho.

5. O que é um plasmídeo? Ele pode ser usado como um vetor de clonagem.

Plasmídeos são moléculas de DNA extra cromossomal capazes de se reproduzir
independentemente do DNA cromossômico, carregam consigo informações genéticas e até
mesmo genes responsáveis por inúmeros casos de restrição a drogas e bactérias.
Na Engenharia Genética, os plasmídeos são utilizados como vetores de clonagem,
transportando genes, ou fragmentos de um DNA a ser clonado para dentro da célula
hospedeira. Os plasmídeos podem ser modificados para carregar novos genes.

6. Quais são os componentes importantes de um vetor de clonagem para que seja

possível utilizá-lo em biotecnologia?
Além dos plasmídeos, outros vetores podem ser utilizados, como vírus, cromossomos
artificiais de bactérias e cromossomos artificiais de fungos. As bactérias são as células
hospedeiras mais utilizadas, mas as células de fungos ou de mamíferos também podem servir
como células hospedeiras.

7. O que é o sequenciamento de Sanger?

Utiliza alguns nucleotídeos modificados com fluoróforos (moléculas que emitem
luminescência), e resulta em cópias com diferentes tamanhos da sequência do DNA de
interesse, mas que se iniciam na mesma posição, como mostrado na figura abaixo.

8. O que é a transgenia? Cite dois exemplos de transgênicos que são utilizados com
frequência no nosso dia a dia.
É a ciência que realiza alteração genética em organismos vivos. Nela é feita a retirada de
genes específicos de uma ser vivo e inserido em outro, que pode ser de uma espécie diferente.
O objetivo dessa técnica é inserir características consideradas algum tipo de benefício de uma
espécie em outra. As principais culturas transgênicas são de milho, algodão, soja e
cana-de-açúcar.