TÉCNICAS DE ESTUDO

EM PATOLOGIA

Augusto Schneider
Carlos Castilho de Barros

Faculdade de Nutrição
Universidade Federal de Pelotas
 EXAMES CITOLÓGICOS

Detecção de células neoplásicas, parasitas e bactérias

Origem:
Liquídos orgânicos
Urina, liquor, liquido ascítico
Punções aspirativas
Pulmão, mama, linfonodos, sangue
Secreções
Escarro, abcessos
Lavados cavitários
Lavado brônquico
Raspados
Cervicovaginal
 EXAMES CITOLÓGICOS

Células devem ser fixadas e coradas

Fixador mais comum é o álcool 95%

Analiza células individualizadas/livres

 EXAMES CITOLÓGICOS

Exemplo:

Exame Papanicolau
Células do canal endocervical
Detecção de cancer do colo do utero
Detecta células anormais que podem desenvolver cancer
 EXAMES CITOLÓGICOS

Células normais
Alteração = aumento/duplicação do núcleo

Pessoa treinada – interpretação dos resultados

 EXAMES CITOLÓGICOS

Esfregaço de células sanguíneas

Contagem de 200 células e classificação morfológica

EXAMES CITOLÓGICOS

Anemia por deficiência de B12

 BIÓPSIAS

Podem ser para diagnóstico ou tratamento

- Ablativa ou excicional
Remoção de toda a lesão para tratamento

- Incisional
Retira parte da lesão para diagnóstico

Importante:
Amostragem deve ser representativa de toda lesão/tecido
Não só superficial
Pode ser com auxílio de ultrassom para atingir ponto desejado
 BIÓPSIAS

Amostras acondicionadas em um fixador

Formaldeído a 4%
Previne autólise e mantem estrutura celular

Volume de 6 a 10 vezes maior que a amostra

Amostras devem ser acompanhadas de informações do

paciente e de outras observações clínicas
Evitar diagnóstico errôneo
 BIÓPSIAS

No laboratório as amostras são parafinizadas, cortadas e

amostras significativas do tecido coletado são coradas e
analizadas

Tecidos corados com corantes simples podem ser

analizados em microscópio de luz
 BIÓPSIAS

Infiltração de gordura hepática

Hematoxilina/eosina
 IMUNO-HISTOQUÍMICA

Método que associa anticorpos com reagentes

específicos para localizar estruturas em células

O produto é analizado em microscópio em corte

histológico

Anticorpos ligados a marcadores fluorescentes

Resultado qualitativo – Presença/ausência de

determinado marcador
 BIÓPSIAS

Tecidos corados com anticorpos fluorescentes podem

ser analizados em microscópio de fluorescência
 IMUNO-HISTOQUÍMICA

Imunofluorescência direta e indireta

Maior especificidade

Produzido em coelho

Produzido em rato
 IMUNO-HISTOQUÍMICA

Técnica imunoenzimática

Imunoglobulinas marcadas com enzima

Mais comum é a peroxidase

Também pode ser acoplada de maneira direta e indireta

Complexo avidina-biotina-peroxidase
 IMUNO-HISTOQUÍMICA

Aplicações

Muito importante em certo tipo de neoplasias

Classificação precisa depende da identificação de proteínas

específicas expressas pelo tipo celular

Podem ajudar na identificação da sede primária do tumor

Identificação de micrometástases em linfonodos sentinelas

 IMUNO-HISTOQUÍMICA

Aplicações

Diagnóstico de agentes infecciosos

IMUNO-HISTOQUÍMICA

Aplicações

Diagnóstico de neoplasias
 CITOMETRIA

Determinação quantitativa de componentes celulares

Ligação de substância específica a um componente

celular e posterior reconhecimento seletivo

● Citometria estática (citofotometria)

● Citometria de fluxo
 CITOMETRIA

Citometria de fluxo

Células em suspensão tratadas com um fluorocromo

Células passam por um canal e intensidade de cada fluorocromo é
mensurada

Identificação de constituintes normais: Neutrófilos, macrófagos, etc

Identicação de células cancerosas de variados tipos

Marcadores na superfície de linfócitos para diagnóstico de leucemia

 CITOMETRIA

Citometria de fluxo

Princípio da técnica
 TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

Técnicas de manipulação de DNA e RNA cada vez mais

comuns e com menor custo

Diagnósticos mais precisos e precoces

 TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

Hibridação molecular

Característica da estrutura do DNA – bases são complementares

 TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

Hibridação molecular

Sondas de DNA

São como os anticorpos porém para sequências específicas de DNA

Sondas são acopladas a compostos fluorescentes ou radioativos

Qualquer tipo de amostra pode ser submetido a esta técnica

TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

Sonda para sequência do cromossomo 3 - Leucemia

REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE

Reação em cadeia da polimerase:

Funciona como uma replicação in vitro

São adicionados todos os ingredientes para

o funcionamento da DNA polimerase

1.Água
2.MgCl2
3.Tampão
4.dNTPs (A, T, C, G)
5.Taq DNA Polimerase
6.Primers
7.DNA

Termociclador: controle da temperatura

REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE
REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE
REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE
REAÇÃO EM CADEIA DA POLIMERASE

Presença de DNA de vírus, bactéria

 TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

Alterações cromossômicas são comuns em diversas neoplasias

Translocações
Genes mudam de posição ou de cromossomo

Amplificações
Genes ou regiões gênicas são duplicadas

Deleções
Genes sao deletados e não são mais detectados
TÉCNICAS DE BIOLOGIA MOLECULAR

Deleção do gene PTEN em cancer de prostata

 AUTOPSIA OU NECROPSIA

Exame post-mortem de órgãos para se determinar a

causa da morte e conhecer as lesões existentes

De interesse cientifico para correlacionar a causa da

morte com achados clínicos e melhorar o diagnóstico
em vida

Ainda há uma discordância entre os diagnósticos

clínicos e de autópsia