ROTEIRO DE TREINO DE HABILIDADES

Data
Eletroforese em gel de agarose
Tema do Treino de Habilidades
Aula

Local onde acontecerá o Laboratório de Biologia Molecular

Treino de Habilidades
Tempo de duração do Treino 50 minutos Horário
de Habilidades
Curso(s) Turma(s) Nº de
Alunos
Biomedicina e Ciências
Biológicas
Docente(s) Unidade(s) Tecnologia Genética: Diagnóstico Molecular e Bioinformática
Curricular(es)
Observações Relevantes sobre a turma:

I. Objetivos de Aprendizagem
a. Empregar os conhecimentos teóricos sobre eletroforese para selecionar a melhor técnica de eletroforese para a análise dos produtos de PCR produzidos
em aula prática.
b. Praticar a técnica de eletroforese em gel de agarose.
II. Materiais Necessários
• EQUIPAMENTOS PARA CENÁRIOS DE APLICAÇÃO DE AMOSTRAS:
• Luvas, máscaras e toucas descartáveis;
• Cuba de eletroforese;
• Fonte;
• Gel pronto com brometo de etídeo(adequar o número de géis de acordo com o tamanho da turma);
• Amostras;
• Tampão de amostra;
• Placa de ELISA com papel alumínio para homogeneização das amostras;
• Pipetas P-10, P-100;
• Ponteiras para Pipetas P-10, P-100;
• Estantes para microtubos.
 III. Organização do Ambiente
Organizar cenários contendo os materiais previamente descritos. Adequar a quantidade de cenários conforme o número de alunos da turma.
Cenários para preparo de gel - tantos quantos aparatos para montagem de gel disponíveis – 1 aparato por cenário.
Cenários para treino de aplicação de amostras – tantos quantas cubas disponíveis – 1 cuba por cenário.
Os cenários para o preparo do gel devem estar em uma bancada diferente dos cenários para o treino de aplicação das amostras.
OBSERVAÇÕES (CUIDADOS ESPECIAIS...):
A utilização de brometo de etídeo ou gel red na construção dos géis fica a critério do professor. Se for utilizar, incluir este reagente nos materiais necessários
para a aula.
IV. Objetivos, Instruções e CheckList das estações de Aprendizagem
Objetivo da Estação 1 de Instruções da Estação 1 de Aprendizagem:
Aprendizagem:
Você deverá lavar as mãos adequadamente, colocar touca, máscara, pró-pés e, por último calçar adequadamente as
luvas. Após a paramentação, você deverá higienizar a bancada aonde irá trabalhar e todos os equipamentos que
Extrair DNA de células sanguíneas serão utilizados para a sua prática. Após a higienização, você deverá seguir o passo a passo descrito no check-list para
através de kit comercial. proceder a execução da prática.

IMPORTANTE: os grupos devem seguir o check-list, para conferir se fizeram todos os passos necessários. Enquanto um
aluno pratica, outro aluno confere o check-list.
Check-list da Estação 1 de Aprendizagem:

1. Retirar as amostras do freezer e deixar no banho maria a 40º C por 10 min.

2. Preparo da amostra em um microtubo: 10uL de DNA + 5uL de tampão de amostra(corante + glicerina) – ajuda na
depoisição da amostra da canaleta.
3. Pipetar as amostras no gel, pulando a primeira canaleta.
4. Pipetar o marcador de peso molecular na primeira canaleta.
5. Correr o gel a 80V por 40 min.
6. Posteriormente, verificar o gel no transiluminador.
 ROTEIRO DE TREINO DE HABILIDADES
Data
Preparo da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR)
Tema do Treino de Habilidades
Aula

Local onde acontecerá o Laboratório de Biologia Molecular

Treino de Habilidades
Tempo de duração do Treino 50 minutos Horário
de Habilidades
Curso(s) Turma(s) Nº de
Alunos
Biomedicina e Ciências
Biológicas
Docente(s) Unidade(s) Tecnologia Genética: Diagnóstico Molecular e Bioinformática
Curricular(es)
Observações Relevantes sobre a turma:

I. Objetivos de Aprendizagem
a. Aplicar conhecimentos sobre reação em cadeia da polimerase em aula prática
b. Compreender a função de cada etapa/reagente para na reação.
II. Materiais Necessários
• EQUIPAMENTOS POR CENÁRIO:
• Luvas, máscaras e toucas descartáveis;
• Pipetas P-2, P-10, P-200 e P-1000;
• Ponteiras para Pipetas P-2, P-10, P-200 e P-1000;
• Microtubos de 200 µL;
• Microtubos de 1,5 mL;
 • Estantes para microtubos;
• Caixa de isopor com gelo.
• Amostras de DNA sanguíneo extraído com kit.
• Oligonucleotídeos iniciadores (primers).
• Tampão da reação de PCR.
• Desoxirribonucleotídeos trifosfatados (dNTPs).
• Enzima Taq DNA Polimerase.
• Água ultrapura (MILI-Q).
• EQUIPAMENTOS DISPONÍVEIS NO LABORATÓRIO:
• Termociclador
• Pipeta P-10.
• Ponteiras para pipeta P-10.
• Amostras de DNA.
• Água ultrapura.

III. Organização do Ambiente

Organizar cenários contendo os materiais previamente descritos. Adequar a quantidade de cenários conforme o número de alunos da turma.
Objetivo da Estação 1 de
Aprendizagem:
Extrair DNA de células sanguíneas
através de kit comercial.
IV. Objetivos, Instruções e CheckList das estações de Aprendizagem
Instruções da Estação 1 de Aprendizagem:
Você deverá lavar as mãos adequadamente, colocar touca, máscara, pró-pés e, por último calçar adequadamente as luvas.
Após a paramentação, você deverá higienizar a bancada aonde irá trabalhar e todos os equipamentos que serão utilizados
para a sua prática. Após a higienização, você deverá seguir o passo a passo descrito no check-list para proceder a execução
da prática. O preparo da reação de PCR deve ser feito dentro da capela de fluxo laminar, com exceção da etapa de adição
de DNA, que deve ser feito na bancada, fora da capela.

IMPORTANTE: os grupos devem seguir o check-list, para conferir se fizeram todos os passos necessários. Enquanto um
aluno pratica, outro aluno confere o check-list.
Check-list da Estação 1 de Aprendizagem:

Preparo da Reação de PCR

1. Marque um tubo de 1,5 mL com a inscrição “MIX”.
2. Neste tubo, pipete os reagentes como consta na tabela abaixo. A mix será preparada para ser suficiente para 4
amostras:
Volume de cada Concentração final em 50
reagente na MIX µL/tubo

Água 25uL Q.s.p. 24µL

Tampão 10X + MgCl2 5uL 1x

Primer 1 2uL 15 mM

Primer 2 2uL 15 mM

dNTP 10uL 200 µM

Taq DNA Polimerase 1uL 1U

Amostra 5uL

3. Coloque os tubos no termociclador para a realização da amplificação eprograme o termociclador para:

Desnaturação inicial: 94ºC – 5 minutos.
30 ciclos de: 94ºC por 30 segundos,
60ºC por 30 segundos, 72ºC por
minuto; Extensão final: 72ºC – 5
minutos; Manutenção: 4ºC – infinito.

4. Após o final da reação de PCR e conserve as amostras em -20° C.