ROTEIRO DE PRÁTICAS LABORATORIAIS ATIVAS REMOTAS

Nome PLA COLORAÇÃO DE GRAM Data

25/03/2021
Cursos ENFERMAGEM Nº de Alunos
Aproximadamente 60 alunos
Docentes Paloma Araújo Unidade(s) MECANISMOS DE AGRESSÃO E DEFESA
Curricular(es)

Observações Relevantes para a turma:

• Estão reservados 10 minutos para orientações antes da prática.

• Após as explicações, os alunos deveram desenvolver a atividade de desenvolver discussão em sala de aula.
I. Objetivos de Aprendizagem

a. Compreender o método de GRAM;

b. Diferenciar bactérias gram positivas e gram negativas
II. Descrição da PLA
Atividade / Estação 1 Coloração de GRAM
Descrição da Realizar a fixação e praticar a coloração.
Atividade
Objetivo Diferenciar bactérias gram positivas e gram negativas

• Acessar o Blackboard -> Laboratórios virtuais -> Microbiologia -> Coloração de GRAM -> Experimento
1. Materiais necessários:
Microscópio; • Lâminas; • Acendedor; • Espátula; • Bico de Bunsen; • Pinça metálica; • Pissetas; • Soro fisiológico; • Óleo de imersão; • Lugol; • Violeta
Atividade de genciana; • Álcool etílico; • Fucsina.
2. Realização do Experimento:
• Conhecendo o laboratório;
PROCEDIMENTOS:
1. SEGURANÇA DO EXPERIMENTO
• Coloque os equipamentos de proteção individual localizados no “Armário de EPIs”.
2. PREPARANDO A AMOSTRA
• Inicialmente, goteje o soro fisiológico na lâmina 1
• Clique em Bico de Bunsen, ligue no botão, ajuste a chama, use o isqueiro para acender e coloque a chama para “azul”
• Clique na alça inoculadora para “esterilizar”, em seguida retira uma amostra biológica e coloque na lâmina 1, realize o procedimento 2 vezes
 3. FIXANDO O MATERIAL NA LÂMINA
• Abra a válvula do bico de Bunsen e ajuste uma chama azul, redutora.
• Passe rapidamente a lâmina à chama do bico de Bunsen, três vezes para fixar o material
4. COLORINDO A AMOSTRA
• Leve a lâmina para a pia.
• Cubra a lâmina com cristal violeta por aproximadamente 1 minuto.
• Enxague em água corrente.
• Cubra a lâmina com lugol, também por 1 minuto e, em seguida, lave a lâmina com água corrente.
• Molhe a lâmina com álcool por aproximadamente 10 segundos e enxague com água corrente.
• Cubra a lâmina com fucsina por 30 segundos e lave em água corrente.
5. OBSERVANDO O RESULTADO
• Mova a lâmina para o microscópio.
• Execute todas os ajustes necessários para visualização.
• Goteje o óleo de imersão sobre a lâmina, para uma melhor análise, e selecione a objetiva de 100x.
• Observe o resultado através da lente ocular.
• Anote suas impressões.
6. REPETINDO OS PROCEDIMENTOS COM AS OUTRAS LÂMINAS
• Após realizar todo procedimento, realize o mesmo procedimento com as lâminas 2 e 3
7. AVALIANDO OS RESULTADOS
• Siga para a seção “Avaliação de Resultados”, neste roteiro, e responda de acordo com o que foi observado nos experimentos.
8. FINALIZANDO O EXPERIMENTO
• Faça a limpeza de todos materiais utilizados, retire a lâmina do microscópio e desligue-o.

AVALIAÇÃO DOS RESULTADOS:

1. Analisando a coloração obtida na primeira lâmina, é possível determinar se o resultado é Gram positivo ou negativo? Caso seja possível, classifique
justificando a resposta.
2. Qual objetivo de realizar o experimento em 3 lâminas? O que se espera observar?

Referências:
MOYES, RB; REYNOLDS, J; BREAKWELL, DP. Differential staining of bacteria: gram stain. Curr Protoc Microbiol. 2009 Nov; Appendix 3:Appendix 3C.
OPLUSTIL, C. P., Microbiologia Clínica. SARVIER): São Paulo. 339p. 2004.
ANVISA, AGÊNCIA NACIONAL DE VIGILÂNCIA SANITÁRIA. Segurança e Controle de Qualidade no Laboratório de Microbiologia Clínica, 2005, 37p.
KONNEMAN, E.W.; et al. Diagnóstico Microbiológico, Texto e Atlas Colorido. Ed. Médica e Científica: RJ. 1465p. 2001