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SUMÁRIO PÁGINA
1. Apresentação 01
2. Estrutura do Curso 02
3. Equipamentos – Introdução 02
4. Potenciômetros 04
5. Autoclaves 05
6. Fornos 06
7. Estufas 07
8. Microscópios 09
9. Centrífugas 18
10. Espectrofotômetros 23
13. Gabarito 41
Apresentação
Olá, pessoal! Eu sou Denise Rodrigues e meu objetivo com esse
curso é auxilia-los no aprendizado de conteúdos sobre
equipamentos, vidraria, reagentes e soluções que comumente
estão nos editais de concursos públicos da área da saúde. Apesar de
não serem assuntos dos mais complexos, apresentam muitos
detalhes e é preciso conhecer de que maneira costumam ser
abordados nas provas! Por isso vamos treinar bastante resolvendo
muitas questões e conhecendo as “pegadinhas” das bancas. Antes de
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iniciar vamos conferir os conteúdos que estão previstos em nosso
curso!
Estrutura do Curso
Equipamentos I
Conteúdo Previsto: potenciômetros, autoclaves e
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fornos, microscópios, centrífugas, espectrofotômetros e
leitores de ELISA.
Equipamentos II
Conteúdo Previsto: citômetros de fluxo,
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termocicladores, cromatógrafos, eletroforese, filtros,
destiladores e purificadores de água.
Vidraria, Reagentes e Soluções I
Aula 02 Conteúdo Previsto: vidraria, preparo, manuseio e
limpeza de vidraria.
Vidraria, Reagentes e Soluções II
Aula 03 Conteúdo Previsto: reagentes e soluções, preparo de
reagentes e soluções.
Equipamentos - Introdução
Grande parte dos equipamentos em um laboratório é
confeccionada em vidro, metal ou plástico e existem em diversos
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formatos e modelos. Muitos deles, como os microscópios e as
centrífugas, necessitam de energia elétrica para o seu
funcionamento.
Os equipamentos utilizados nos laboratórios são os mais
variados, mas, no geral, todos seguem algumas regras básicas para
sua utilização:
- O equipamento nunca deve ser usado para uma função que não a
sua ou fora de suas normas de utilização;
- O equipamento nunca deve ser operado por uma pessoa com
dúvidas a respeito do seu funcionamento;
- Sempre que for ligar o equipamento, deve-se observar a voltagem
correta de funcionamento. No caso de aparelhos bivolt, observar se
existe chave para modificação da voltagem ou se a modificação é
automática;
- O uso de adaptadores e extensões deve ser evitado;
- No caso de aquecimento e/ou manuseio de líquidos, deve-se ter
cuidado em evitar contato com as partes elétricas;
- Após a utilização, o equipamento deve ser deixado em condições
para sua melhor conservação (desligar, limpar, fechar, cobrir,
guardar e etc...);
A correta utilização e conservação dos equipamentos de
laboratório é essencial para que o profissional possa obter resultados
com qualidade. Em caso de dúvidas, sempre procurar o responsável
pelo laboratório.
Vamos agora iniciar o estudo sobre os principais equipamentos
presentes em um laboratório clínico:
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Potenciômetro (pHmetro)
O pHmetro é um equipamento utilizado para medição de pH em
variadas amostras. Consiste em um eletrodo que é acoplado a um
potenciômetro – aparelho que mede a diferença de potencial. Ao ser
submerso na amostra, o eletrodo gera milivolts que são convertidos
para uma escala de pH. Em resumo, o pHmetro permite converter o
valor de potencial do eletrodo em unidades de pH, de 0 a 14.
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Comentário: Nessa questão a banca brincou com os nomes dos
possíveis “tipos de pH obtidos” quando utilizamos um pHmetro e
colocou como alternativas de resposta. Porém, sabemos que o nome
correto é pHmetro. O enunciado também nos dá mais informações
sobre esse equipamento.
Gabarito: B.
Autoclaves
A autoclave é muito utilizada em laboratórios de pesquisa e
hospitais para a esterilização de materiais. O processo de
autoclavagem consiste em manter o material contaminado em
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contato com vapor de água em temperatura elevada, sob pressão,
por um período de tempo suficiente para matar todos os micro-
organismos. Existem diferentes modelos, mas os componentes
básicos de uma autoclave são:
- Cilindro metálico resistente, encontrado tanto na posição horizontal,
como na vertical (autoclaves horizontais x autoclaves verticais). Na
maioria dos modelos de autoclave é nesse cilindro que se encontra a
resistência que realizará o processo de aquecimento da água;
- Tampa com parafusos de orelhas, que possibilita o fechamento
hermético;
- Válvulas de ar e de segurança;
- Chave de comando, que possibilita ao operador controlar a
temperatura;
- Registro indicador de pressão e temperatura.
Fornos
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Geralmente, o forno mufla é mais utilizado em análises químicas de
substâncias complexas ou na quantificação de metais, já que a
maioria dos óxidos metálicos permanece estável a esta temperatura.
Forno Mufla
Estufas
No laboratório, a estufa é utilizada para criar um ambiente
contendo calor de maneira controlada em seu interior para que os
conteúdos nela guardados sejam mantidos em uma temperatura
ideal, de acordo com o objetivo. Geralmente, a temperatura é
mantida maior no seu interior do que externamente e são compostas
de uma caixa e uma fonte de calor. Apresentam controle da
temperatura através de termostato.
A estufa é comumente utilizada para secagem de materiais (ex:
vidraria), evaporação lenta, cultivo de micro-organismos,
armazenagem de substâncias líquidas em baixas temperaturas,
esterilização e etc...
Vamos ver os diferentes tipos de estufa, de acordo com suas
finalidades:
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microbiológico que possa estar nos instrumentos laboratoriais.
Esterilizar os materiais de laboratório é extremamente importante
para que não ofereçam risco de contaminação. Nesta estufa, utiliza-
se a técnica do calor seco, em alta temperatura. Não deve ser
utilizada para secagem de materiais volumétricos ou deve ser
utilizada de acordo com o limite de temperatura definido, pois o calor
pode alterar a calibração desses materiais.
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Microscópios
Esse equipamento é um dos mais cobrados! O microscópio é
muito utilizado nos laboratórios para que se visualize células e/ou
estruturas pequenas, sendo composto por dois sistemas de lentes.
Tipos de microscópio
Para cada tipo de análise temos um microscópio que melhor se
encaixa. São classificados de acordo com o tipo de iluminação
utilizada:
1) Microscópio Óptico ou Composto: a amostra é iluminada com
uma fonte de luz. Estes microscópios apresentam dois sistemas de
lentes, um nas oculares e outro nas objetivas. São amplamente
utilizados nos laboratórios clínicos. Existem ainda subtipos de
microscópios ópticos. Os mais comuns são:
De campo claro: o objeto a ser analisado é visto contra um campo
claro de exame. Adequados para visualizar amostras coradas como,
por exemplo, esfregaços de sangue corados.
De contraste de fase: é melhor para visualizar células não coradas,
que são quase sempre transparentes. Se adicionar um condensador
de fase e objetivas especiais, o microscópio de campo claro pode se
tornar um de contraste. Este microscópio é muito útil para amostras
de sedimentos de urina e na contagem de plaquetas.
De fluorescência: usa luz ultravioleta para iluminar a amostra,
permitindo que objetos corados com corantes fluorescentes sejam
observados. Exemplo de aplicação: detectar presença de anticorpos
conjugados a fluorocromos e em análises de DNA.
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objetos muito menores podem ser visualizados. Existem dois tipos de
microscópios eletrônicos:
Microscópio Eletrônico de Transmissão (MET): possui sistemas
de iluminação e vácuo que produzem feixes de elétrons de alta
energia que, ao incidir sobre uma amostra de tecido ultrafina (na
espessura de nanometro), fornecem imagens planas,
imensamente ampliadas, possuindo a capacidade de aumento útil de
até um milhão de vezes. Assim, permitem a visualização de
moléculas orgânicas, como o DNA, RNA, algumas proteínas, etc. A
interação dos elétrons transmitidos através da amostra forma uma
imagem que é ampliada e focada em um dispositivo de imagem,
como uma tela fosforescente e visualizada com um vidro de proteção,
ou é projetada em um monitor.
Microscópio Eletrônico de Varredura: o feixe de elétrons realiza
uma espécie de varredura, um “escaneamento” da superfície da
amostra revestida por metal e é gerada uma imagem
tridimensional.
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A maioria dos microscópios têm 3 objetivas ou lentes de aumento: de
pequeno aumento (10 ou 20x), a de maior aumento (40, 43 ou
45x) e a objetiva de imersão a óleo (aumenta 95, 97 ou 100x).
Sendo que cada objetiva é marcada com bandas de cores e seu poder
de aumento em geral estará gravado na mesma.
Assim, para poder determinar o aumento de um
microscópio, multiplique o aumento marcado na ocular pelo
aumento da objetiva.
O poder do microscópio fornecer uma imagem clara e com
detalhes finos do objeto analisado é chamado de resolução
(nitidez).
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de 10x (segundo o enunciado) por 10! Logo, nossa resposta será:
100 vezes de aumento final do objeto. Certo?
Gabarito: C.
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Comentário: o óleo de imersão sempre será para a objetiva de
imersão em óleo, ou seja, o maior aumento que se quer ter: aumento
de 100x!
Gabarito: E.
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b) a estufa
c) a autoclave
d) o fluxo laminar
e) a mufla
Comentário: questão muito tranquila essa, certo? Letra B é a
correta. A respeito do fluxo laminar, é discutido na aula de
biossegurança, ok? E a mufla? Bem, o forno mufla é um equipamento
muito utilizado para realizar calcinação de substâncias. Calcinação é o
processo de oxidação das substâncias presentes na amostra, também
utilizado para análises químicas de substâncias complexas ou na
quantificação de metais. Opera em faixas de temperaturas em torno
de 1000 C a 1500 C, dependendo do modelo escolhido.
Gabarito: B.
Centrífugas
Equipamento que gira em alta velocidade, fazendo com que a
substância mais densa seja “forçada” a sedimentar (decantar) devido
a ação da força centrífuga.
Existem tipos de centrifugação:
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Centrifugação diferencial (separação de fases): as amostras
centrifugadas a certa velocidade resultam em sobrenadante e pellet.
Centrifugação baseada no tamanho das partículas: uma suspensão
contendo diferente moléculas é centrifugada e as partículas maiores
sedimentam com mais rapidez.
Ex: separação do sangue em elementos figurados e plasma/soro
- Centrífuga de bancada;
- Centrífuga de bancada refrigerada;
- Centrífuga de alta velocidade;
- Ultracentrífuga;
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- Microcentrífuga;
- Citocentrífuga;
Vamos conhecer melhor cada uma delas:
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Centrífuga de alta velocidade ou alto desempenho refrigerada:
utilizada para precipitações de grandes volumes. Pode ter 2 tipos de
rotor (R24A e R12A3). Apresenta ângulo fixo.
R24A: 8 x 50mL – máximo de 24.000 rpm – 68.900 g;
R12A3: 6 x 300mL –máximo de 12.000rpm – 23.800 g;
Refrigeração: -20°C até +40°C. Apresenta controle de
aceleração/desaceleração e controle de tempo. Com sensor para
funcionamento apenas com tampa fechada.
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Modelos de Centrífugas
Microtubos de centrifugação
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Espectrofotômetro
Equipamento amplamente utilizado nas áreas de bioquímica e
biologia molecular nos laboratórios de análises clínicas e química,
dentre outros. Tem a função de medir e comparar a quantidade de
luz (energia radiante) absorvida por uma determinada solução. Ou
seja, é usado para medir (identificar e determinar) a concentração de
substâncias que absorvem energia radiante, em um solvente.
A radiação eletromagnética se propaga numa velocidade
constante, mas depende do índice de refração do meio que atravessa.
O importante das soluções coloridas ou incolores é que a radiação
absorvida é uma característica da amostra absorvente. O
espectro de absorção é característico para cada espécie química,
sendo possível a identificação de uma espécie química através do seu
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espectro de absorção. O espectro de energia radiante é dividido em
várias regiões e a espectrometria pode ser realizada nas regiões
ultravioleta (UV) e visível.
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- O espectrofotômetro registra dados de absorbância em função do
comprimento de onda ( ). A característica mais importante do
espectrofotômetro é a seleção de radiações monocromáticas.
- Lâmpadas:
Lâmpada de filamento de Tungstênio: é uma fonte de radiação
que emite no visível e no infravermelho próximo, ou seja, produz
uma radiação útil para o funcionamento do espectrofotômetro na
faixa de 320 a 2500 nm. A lâmpada opera em uma temperatura de
3000 K.
Lâmpada de descarga de Deutério: é uma fonte de radiação que
emite no ultravioleta (UV), ou seja, produz radiação útil para o
espectrofotômetro na faixa de 200 a 400 nm. Nessa lâmpada os
elétrons são excitados por uma descarga e quando voltam para seus
estados fundamentais, emitem a radiação.
Lâmpada de vapor de Mercúrio: é uma fonte de radiação que
emite no visível e no ultravioleta, ou seja, produz uma radiação útil
para o espectrofotômetro na faixa de 300 a 600 nm.
Resumindo, a base da espectrofotometria é passar um feixe de
luz através da amostra e fazer a medição da intensidade da luz que
atinge o detector. O espectrofotômetro compara quantitativamente a
fração de luz que passa através de uma solução de referência e uma
solução de teste.
Veja figuras:
Modelos de Espectrofotômetros
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Leitores de Elisa
O termo ELISA vem da sigla em inglês para Enzyme Linked
Immunosorbent Assay. Trata-se de técnica imunoenzimática (ensaio
imunoenzimático ou enzimaimunoensaio), termo genérico para um
grande número de testes que permitem ensaios quali- e
quantitativos, para a detecção tanto de antígenos quanto de
anticorpos em amostras biológicas. Os ensaios imunoenzimáticos tem
como princípio uma interação primária entre Ag-Ac que é visualizada
devido ação de uma enzima sobre seu substrato e formação de
produto solúvel colorido, cuja determinação é feita medindo-se a
densidade ótica da solução por espectrofotometria. O leitor de
ELISA é o equipamento de escolha para leitura espectrofotométrica
ao final da técnica de ELISA devido a algumas vantagens.
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Após as questões básicas, vamos exercitar o que já foi
aprendido e aprofundar o estudo, pois ao resolver mais questões
de concursos iremos abordar em mais detalhes o que já vimos!
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absorbância ou transmitância em função do comprimento de onda.
Das alternativas abaixo, qual representa a sequência CORRETA dos
componentes principais de um espectrofotômetro?
A) Monocromador, Fonte de Luz, Amostra, Detector e Registrador.
B) Amostra, Fonte de Luz, Monocromador, Detector e Registrador.
C) Detector, Fonte de Luz, Amostra, Monocromador e Registrador.
D) Fonte de Luz, Monocromador, Amostra, Detector e Registrador.
Comentário: conforme descrição e figura que vimos, apenas letra D
está correta. Vamos relembrar:
Gabarito: D.
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A) Centrífuga de bancada.
B) Ultracentrífuga.
C) Centrífuga de alta velocidade.
D) Ultracentrífuga de bancada.
E) Centrífuga clínica.
Comentário: atenção para as necessidades descritas no enunciado:
dentre elas, a centrifuga deve possibilitar precipitação de grandes
volumes, logo, deve ser uma centrifuga do tipo de alta velocidade ou
alto desempenho.
Gabarito: C.
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(B) O microscópio comum tem a função de permitir a visualização e
contagem de células, bactérias, fungos e vírus.
(C) O espectrofotômetro, muito utilizado em bioquímica, tem a
função de medir a absorbância e ou a transmitância de uma
determinada substância.
(D) Centrífuga é um aparelho com função de separar partículas de
uma solução na qual estão suspensas. A ultracentrífuga trabalha em
velocidade muito alta e não requer câmara refrigerada.
(E) O pHmetro é o aparelho que serve para verificar o pH das
soluções. Para a medida do pH basta colocar o eletrodo na solução
que se queira medir.
Comentário: Letra A errada, pois o densitômetro mede densidade
óptica, com variadas aplicações. Letra B errada pois com o
microscópio ótico não é possível visualização de vírus, por exemplo.
Letra C é nossa alternativa correta. Letra D errada pois as centrífugas
permitem a separação por promover a sedimentação por ação da
força centrífuga e a ultra centrífuga requer câmara refrigerada para
seu funcionamento. Letra E errada pois a medida do pH requer
correta utilização do pHmetro, o que inclui a lavagem do eletrodo em
solução específica e outras etapas, conforme segue:
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7. Após medir o pH retire os medidores da solução;
8. Lave os medidores novamente, com água destilada;
9. Guarde o medidor de pH dentro da solução protetora.
Importante:
-Sempre se lembre de lavar os medidores antes e depois de colocá-
los em qualquer solução.
- O pHmetro deve ser calibrado uma vez por mês.
- Toda vez que o pHmetro for desligado da tomada é necessário que
seja calibrado novamente.
Gabarito: C.
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(B) A medida quantitativa é realizada por meio da medida da
absorbância do padrão dividido pela absorbância da substância
encontrada multiplicada pela concentração do padrão.
(C) Nesse aparelho, pode-se também medir a transmitância, sendo
esta proporcional à absorbância.
(D) Nesse aparelho, a quantidade de luz emitida por uma quantidade
de substância é inversamente proporcional à sua concentração.
(E) Todo espectrofotômetro possui uma fonte de luz, que é em geral
uma lâmpada de tungstênio para a luz visível e de deutério para a luz
infravermelha.
Comentário: Encontramos a única sentença correta logo na primeira
alternativa:
Padrão: abs. do padrão = concentração conhecida do padrão
Amostra: abs. da amostra = X (concentração desconhedida da
amostra)
Portanto, a concentração da amostra que queremos encontrar
será igual a Abs. da mostra multiplicada pela concentração do
padrão, dividida pela absorbância do padrão. É uma regra de três
básica! As demais contém erros: na letra b temos uma descrição de
cálculo errada, na verdade transmitância é inversamente
proporcional à absorvância! Grave isso! Na espectrofotometria
não se trata de medir emissão de luz por substâncias e a lâmpada de
tungstênio emite luz visível, mas a de deutério emite radiação UV.
Gabarito: A
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Lista de Questões
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b) 10 vezes
c) 100 vezes
d) 1000 vezes
e) 10000vezes
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7. (IBFC/2015/EBSERH/CHC –UFPR – Técnico em Análises clínicas) O
microscópio que permite visualizar detalhes internos de
microrganismos é:
e) microscópio de contraste de fase
f) microscópio de campo claro
g) Microscópio de fluorescência
h) Microscópio de campo escuro
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g) um termociclador
h) uma estufa
i) uma centrífuga
j) um agitador
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13. (AOCP/2015/ Biomédico - EBSERH/HC-UFG) Existem termos
descritivos para tipos de centrífugas, mas não são definições
rigorosas, e uma centrífuga pode se encaixar em várias categorias.
Qual é a centrífuga que pode ser utilizada para precipitações de
grande volume de etanol, peletização de bactérias, colunas rotatórias,
precipitações de proteínas e que é também conhecida como uma
centrífuga de alto desempenho?
(A) Centrífuga de bancada.
(B) Ultracentrífuga.
(C) Centrífuga de alta velocidade. ==0==
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(C) O espectrofotômetro, muito utilizado em bioquímica, tem a
função de medir a absorbância e ou a transmitância de uma
determinada substância.
(D) Centrífuga é um aparelho com função de separar partículas de
uma solução na qual estão suspensas. A ultracentrífuga trabalha em
velocidade muito alta e não requer câmara refrigerada.
(E) O pHmetro é o aparelho que serve para verificar o pH das
soluções. Para a medida do pH basta colocar o eletrodo na solução
que se queira medir.
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(D) Nesse aparelho, a quantidade de luz emitida por uma quantidade
de substância é inversamente proporcional à sua concentração.
(E) Todo espectrofotômetro possui uma fonte de luz, que é em geral
uma lâmpada de tungstênio para a luz visível e de deutério para a luz
infravermelha.
1-B
2-B
3-C
4-A
5-E
6-E
7-A
8-B
9-A
10-D
11-A
12-D
13-C
14-C
15-C
16-E
17-A
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Referências Bibliográficas
-http://www.pucrs.br/edipucrs/online/microscopia.pdf
- http://genoma.ib.usp.br/sites/default/files/protocolos-de-aulas-
praticas/genoma_protocolo_microscopia_mar20111.pdf
- http://www.lb.ufs.br/ap/P1.pdf
http://www.vidrariadelaboratorio.com.br/vidrarias-de-laboratorio-2/
http://www.sorocaba.unesp.br/Home/CIPA/Treinamento_para_utiliza
cao_de_laboratorios_quimicos_e_biologicos_leitura.pdf. Acessado
em: 27 de julho de 2016.
http://www.ebah.com.br/content/ABAAAA1eMAC/laboratorio-
quimica-geral-quimica-basica?part=2. Acesso em 27 de julho de
2016.
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http://www.ebah.com.br/content/ABAAAe8EQAB/destilador
http://wikiciencias.casadasciencias.org/wiki/index.php/Agitador_mag
n%C3%A9tico.
http://www.infoescola.com/materiais-de-
laboratorio/espectrofotometro/
http://www.ufrgs.br/leo/site_espec/componentes.html
http://www.prolab.com.br/produtos/equipamentos-para-laboratorio
http://objetoseducacionais2.mec.gov.br/bitstream/handle/mec/15228
/Como%20funciona%20uma%20autoclave.pdf?sequence=2
http://www.lb.ufs.br/lcb/index.php/phmetro