COMO EXTRAIR E VISUALIZAR A MOLÉCULA DE DNA?

Escola Básica e Secundária Padre Manuel Álvares

Como extrair e visualizar a molécula de DNA?

Bruno Miguel Fernandes Pereira, 11ºA, Nº2

Diogo Tércio de Freitas Gomes, 11ºA, Nº4

José Luís Silva Barros, 11ºA, Nº7

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 COMO EXTRAIR E VISUALIZAR A MOLÉCULA DE DNA?

José Tiago Pereira Andrade, 11ºA, Nº8

Luís Miguel Viveiros Rocha, 11ºA, Nº9

Índice

Introdução...........................................................................................................2
Objetivos..............................................................................................................2
Fundamento Teórico..........................................................................................3
A Molécula de DNA.........................................................................................3
Técnica de Feulgen.........................................................................................4
Material................................................................................................................5
Procedimento......................................................................................................5
Observações.......................................................................................................6
Discussão dos resultados.................................................................................7
Conclusão............................................................................................................7
Bibliografia/webgrafia........................................................................................8

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 COMO EXTRAIR E VISUALIZAR A MOLÉCULA DE DNA?

Introdução

Este relatório foi nos proposto pela professora Maria Lucilina Gonçalves
na aula de Biologia que se realizou na terça-feira, dia 22 de setembro, no
laboratório da nossa escola, das 10:30 horas até às 12:50 horas, pela turma
11ºA. Contém informações sobre a atividade prática “Como extrair e visualizar
a molécula de DNA?”.
Considera-se o DNA como sendo o suporte universal da informação
genética que define as características de cada organismo vivo e que controla
todas as funções possíveis das células, sendo imprescindível para a existência
da vida.
A elaboração do presente relatório torna-se essencial à consolidação e
aprofundamento de todos os nossos conhecimentos teóricos adquiridos.
Acarreta também grande importância para que no futuro tenhamos todas as
nossas observações e conclusões registadas, permitindo um desempenho e
reflexão de competências práticas, facilitando o relembrar deste tema para
outras atividades/investigações.
Para a realização da atividade experimental recorreremos ao protocolo
disponibilizado pelo professor.
Durante as atividade utilizaremos diversos materiais do laboratório de
biologia da escola como por exemplo almofariz, pipeta, proveta, etc.
O relatório encontra-se dividido por introdução, objetivos, fundamento
teórico, procedimento, materiais, resultados obtidos, discussão dos mesmos,
conclusão e por fim a bibliografia.

Objetivos

Esta atividade laboratorial tem como objetivos:

 Conhecer e compreender as técnicas de extração de ADN das plantas

disponíveis (Kiwi, Tomate e Pimentão);
 Conseguir observar o seu novelo de DNA;
 Melhorar as nossas aptidões laboratoriais;

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 COMO EXTRAIR E VISUALIZAR A MOLÉCULA DE DNA?

 Usar com sucesso a Técnica de Feulgen;

 Comprovar que existe DNA em todos os seres vivos, pois é a molécula
da vida.

Fundamento Teórico

A Molécula de DNA

O DNA é uma molécula presente em todos os seres vivos e que define as

características de cada um. Tem estrutura em dupla hélice e é constituída por
Ácido Desoxiribo Nucleico que se encontra no interior do núcleo (no caso das
células eucariotas) e tem um esqueleto de desoxiribose e fosfato com ligações
a bases azoatadas.
Tanto as células animais (fig.1) como as vegetais (fig.2) são eucarióticas,
apresentando por esse motivo várias características em comum, como a
presença de uma membrana celular e de organelos como o núcleo, as
mitocôndrias e o retículo endoplasmático.

Fig.1- Constituintes de uma célula eucariótica animal. Fig.2- Constituintes de uma célula eucariótica vegetal.
(Fonte:https://www.diferenca.com/celula-animal-e- (Fonte:https://www.diferenca.com/celula-animal-e-
celula-vegetal/) celula-vegetal/)

Por sua vez, a dupla hélice (fig.3) é estabilizada por pontes de

hidrogénio entre as bases presas às duas fitas, sendo estas compostas por:
adenina, citosina, guanina e timina.

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Dada a posição dos grupos fosfato no polímero, a sua carga negativa

torna a molécula muito compatível com a água e consequentemente as
moléculas que interagem com o DNA têm normalmente cargas positivas para
que se liguem mais facilmente.

Fig.4- Polímero da molécula de DNA

Fig.3- Estrutura do DNA em dupla hélice
(Fonte:https://www.todamateria.com.br/dna/)
(Fonte: https://www.todamateria.com.br/dna/)

As partes do DNA que são responsáveis por terem a informação

genética são denominados genes. O restante do DNA tem um papel estrutural
ou está envolvido na regulação do material genético que os genes carregam.
A membrana nuclear e a membrana celular são por sua vez constituídas
por uma dupla camada lipídica que engloba o meio intracelular aquoso. Para
que possamos chegar ao DNA temos portanto de romper estas membranas,
podendo fazer isso com a utilização de um detergente.
Para separar o DNA dos restantes componentes celulares, podemos
desnaturar o DNA com a utilização de álcool refrigerado o que provoca a
separação do DNA (e também das proteínas), destruindo a estrutura
tridimensional. Ao final de algum tempo, a molécula de DNA deixa de ser
solúvel e precipita. Por ser uma molécula tão comprida, pode então ser vista a
olho nú.
A extração e análise de DNA é uma técnica laboratorial muito usada na
investigação científica e na ciência forense, sendo usada pelos investigadores
e detetives das forças especiais.

Técnica de Feulgen

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A técnica de Feulgen ou coloração de Feulgen é uma técnica

de coloração descoberta por Robert Feulgen em 1924, em que é utilizada uma
solução corante denominada de reativo de Schiff, usada em histologia para
obter seletivamente o DNA das células. Assim, quanto maior for a intensidade
da coloração maior é, proporcionalmente, a quantidade de DNA, o que
possibilita deste modo efetuar medidas quantitativas de DNA.

Material

Material Biológico:
 Kiwi;
 Tomate;
 Pimentão.

Material Químico:
 10 mL de detergente da loiça, 1 colher de sal e 70 mL de água destilada;
 Álcool refrigerado;
 Reagente de Schiff (fucsina descorada).

Material Laboratorial:
 Almofariz;
 Gobelé;
 Três tubos de ensaio;
 Pipeta, vareta.

Procedimento

1. Descasque e corte o Kiwi em pequenos fragmentos, coloque-os no

almofariz e triture.
2. Deite o sal e o detergente num gobelé com água destilada. Agite
suavemente a mistura.
3. Coloque aproximadamente 10 mL de mistura obtida no almofariz e
triture.
4. Seguidamente coloque a mistura num tubo de ensaio.
5. Faça escorrer, lentamente, um pouco de álcool refrigerado no tubo de
ensaio. Espere algum tempo e procure observar a formação de duas
fases: uma superior, alcoólica, e outra inferior, aquosa.

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6. Para a coloração, pode utilizar a técnica de Feulgen (adaptada a este

material):
 Deite aproximadamente 8 gotas de reagente de Schiff no tubo de
ensaio.
7. Repete os procedimentos descritos nos paços 1 a 6 utilizando o tomate
e o pimentão.

Observações

Novelo de DNA

Fase alcoólica

Fase aquosa

Fig.5– Comparação dos diferentes tubos de
ensaio (Kiwi, Tomate, Pimentão) e dos seus
respetivos novelos de DNA.
Fig.6 – Comparação dos diferentes tubos
de ensaio (Kiwi, Tomate, Pimentão) e dos
seus respetivos novelos de DNA, após a
utilização da Técnica Amostra de Kiwi
de Feulgen.

Amostra de Tomate

Fig.7 – Tubo de ensaio da solução com

a amostra de Tomate e o outro com a
amostra de Kiwi. Novelo de DNA visível.

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Discussão dos resultados

Foi possível a extração e visualização do DNA, através de vários

componentes utilizados, nomeadamente o sal, o detergente e o álcool
refrigerado.
Para a visualização do DNA nos três vegetais foram feitas três etapas, a
trituração com o almofariz, a adição de sal e detergente e por último, para
causar a precipitação do DNA foi usado álcool.
A adição do sal (NaCl) no início da experiência, proporcionou um
ambiente favorável ao DNA, mantendo as proteínas dissolvidas no líquido
extraído, impossibilitando que estas se precipitassem com o DNA. Contribuiu
deste modo, com iões positivos (Na+) que neutralizaram a carga negativa
inviabilizando a repulsão elétrica entre as moléculas de DNA, permitindo a sua
agregação e formação de filamentos mais compridos e espessos e
consequentemente visíveis mais facilmente.
O detergente permitiu dissolver e desagregar as membranas nucleares,
constituídas pela camada fosfolipídica, obtendo-se assim o DNA. Através da
rotura dessas membranas, o conteúdo celular englobando as proteínas e o
DNA, soltam-se dispersando-se na solução, onde algumas proteínas têm como
função manter o DNA enrolado numa espiral muito apertada.
Por fim, o álcool refrigerado, possibilitou a separação do DNA, pois como
é menos denso do que a água, não é solúvel neste composto. Desta forma, as
moléculas dos filamentos de DNA ascendem para a fase alcoólica surgindo
mais próximo da superfície. De salientar, que foi utilizado o álcool refrigerado,
proporcionando que o DNA ficasse menos solúvel.
Na fase final desta atividade experimental, tornou-se possível a
visualização a olho nú de imensas cadeias de moléculas de DNA aglomeradas,
o que de outra forma não seria possível, pois moléculas individuais detêm um
tamanho microscópico.

Conclusão

Este trabalho permitiu-nos aprimorar os nossos conhecimentos teóricos

a nível prático, bem como estimular as nossas competências no desempenho
desta atividade com dedicação e rigor.

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Em conclusão, os objetivos traçados para esta atividade laboratorial,

foram deste modo alcançados com sucesso, salientando que conseguimos a
extração e posterior visualização de moléculas de DNA a olho nú.

Bibliografia/webgrafia

Manual: Da Silva, Amparo Dias; Santos, Maria Ermelinda; Gramaxo, Fernanda;

Mesquita, Almira Fernandes; Baldaia, Ludovina; Félix, José Mário, (2018)
Terra, Universo de Vida – Biologia 11º, 1.ª edição. Porto: Porto Editora.

Técnica de Feulgen em, https://en.wikipedia.org/wiki/Feulgen_stain

https://pt.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_desoxirribonucleico