Relatrio V

Aula prtica 6

Extrao de DNA de clulas do bulbo da cebola

(Allium cepa)

Disciplina: Citologia
Professor: Dr. Jos Aliandro Bezerra da Silva

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1. Introduo
O cido desoxirribonuclico um composto orgnico cujas molculas
contm as instrues genticas que coordenam o desenvolvimento e funcionamento
de todos os seres vivos e alguns vrus. O seu principal papel armazenar as
informaes necessrias para a construo das protenas e RNA. Os segmentos de
DNA responsveis por carregar a informao gentica so denominados genes. O
restante da seqncia de DNA tem importncia estrutural ou est envolvido na
regulao do uso da informao gentica.
A molcula de DNA consiste em duas cadeias de nucleotdeos dispostas
em hlice em torno de um eixo. As bases pricas e pirimdicas de cada cadeia
polinucleotdica situam-se dentro da hlice dupla, em planos paralelos entre si e
perpendiculares ao eixo da hlice (JUNQUEIRA & CARNEIRO, 2005).
Dentro da clula, o DNA pode ser observado numa estrutura chamada
cromossoma. Antes da diviso celular os cromossomas so duplicados atravs de
um processo chamado replicao. Eucariontes como animais, plantas e fungos tm
o seu DNA dentro do ncleo enquanto que procariontes como as bactrias o tm
disperso no citoplasma. Dentro dos cromossomas, protenas da cromatina como as
histonas compactam e organizam o DNA. Estas estruturas compactas guiam as
interaes entre o DNA e outras protenas, ajudando a controlar que partes do DNA
so transcritas. O DNA responsvel pela transmisso das caractersticas
hereditrias de cada ser vivo.
O isolamento do DNA de material vegetal uma etapa importante quando
se tem por objetivo a anlise da estrutura e organizao do material gentico das
plantas. Diversas tcnicas foram e vem sendo desenvolvidas para se obter cidos
nuclicos ntegros, sem modificaes estruturais, e forma a beneficiar os estudos na
rea de biologia celular e molecular vegetal.

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Estrutura de um DNA

2. Objetivo
Observar estruturas de DNA a partir de mecanismos de isolamento em
laboratrio.

3. Materiais e mtodos
a.
Cebola
b.
Detergente sdio dodecil sulfato (SDS)
c.
gua destilada
d.
Banho Maria
e.
Papel filtro
f.
lcool 99%
g.
Cloreto de sdio
h.
Balana analtica
i.
Gelo
j.
Bqueres
k.
Funil
l.
lcool etlico comercial (ou etanol 95%) gelado
m. Tubo de ensaio
4. Procedimento
Picar 50g de cebola em quadrados de 5mm. Misturar em um bquer 10
mL de SDS 10%, 3g de NaCl e completar com gua at obter 100 mL de soluo.
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Agitar at dissolver. Juntar essa soluo com a cebola e levar ao banho maria a 60
C pro 15 minutos. Resfriar rapidamente a soluo no gelo, aguardando de 5 a 10
minutos. Agitar novamente. Coar a mistura em papel de filtro, excluir o material
slido, colocar o material lquido em um tubo de ensaio. Verificar o DNA precipitado
no etanol.

5. Resultados e discusses
O NaCl se dissocia em ons Na + Cl-, depois de imerso em soluo. Tais
ons interagem com os fosfatos das molculas de DNA, neutralizando e
estabilizando-as, possibilitando que o DNA se torne menos solvel em gua.
A funo do detergente sdio dodecil sulfato a de emulsionar gorduras;
o SDS atua nas membranas que so formadas por fosfolipdios, desestruturando-as.
A macerao pode ser substituda pelo uso do liquidificador, sendo que
seu uso limitado a no mximo 5 segundos, pois pode haver degradao das
molculas de DNA.

A temperatura de 60 C por 15 minutos tem a funo de desnaturar as

protenas, inclusive as DNases, alm de degradar a parece celular e lisa da clula. O
gelo em que submetida a soluo aps o aquecimento serve para reduzir a quebra
das molculas de DNA.

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O lcool etlico permite uma maior desidratao das molculas. possvel

a

observao

do

DNA (emaranhado),

que

se

apresenta

por

filamentos

esbranquiados; porm a observao das hlices s possvel atravs do uso de

aparelhos sofisticados.

6. Concluso
O DNA material gentico que compe grande parte dos vrus e todos os
organismos celulares. O armazenamento e a transmisso das informaes
genticas funo primordial do DNA. O estudo do mesmo importante para a
identificao de doenas, bem como a sua posterior correo, alm de proporcionar
modificaes com a finalidade de adaptao das espcies a determinados fatores
externos, o que possibilita uma maior produtividade, se tratando de vegetais.
Compreender como as plantas produzem o alimento que comemos , portanto,

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importante para sermos capazes de alimentar o mundo e fornecer segurana

alimentar para as futuras geraes, como exemplo atravs do cruzamento entre
plantas.

7. Referncias bibliogrficas
JUNQUEIRA, L. C.; CARNEIRO J. Biologia Celular e Molecular. Rio de Janeiro: 8
ed. Guanabara. 2005.

CIDOS desoxirribonuclico. Origem: Wikipdia, a enciclopdia livre. Wikipedia.

Disponvel em:
<http://pt.wikipedia.org/wiki/%C3%81cido_desoxirribonucleico>
Acesso em 5 out. 2009

MENCK, Carlos Frederico Martins.Estudo de reparo de DNA e suas conseqncias

biolgicas. Projetos de pesquisa temticos. Disponvel em:
<http://www.bv.fapesp.br/projetos-tematicos/1865/estudos-reparo-dnaconsequencias-biologicas/>
Acesso em 5 out. 2009

BOTNICA. Origem: Wikipdia, a enciclopdia livre. Wikipedia. Disponvel em:

<http://pt.wikipedia.org/wiki/Bot%C3%A2nica>
Acesso em 5 out. 2009

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