Atividade Laboratorial

Biologia e Geologia

Investigação da presença de
DNA em células eucarióticas

Jéssica Reis 11ºA

01/10/2023
Como extrair e visualizar macroscopicamente o DNA de células eucarióticas vegetais?
REIS, J

Índice
1. Introdução
2. Fundamentação teórica
3. Material
4. Procedimento
5. Resultados
6. Interpretação de resultados
7. Discussão
8. Conclusão
9. Bibliografia

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Como extrair e visualizar macroscopicamente o DNA de células eucarióticas vegetais?
REIS, J

Introdução
Este relatório, realizado no âmbito da disciplina de Biologia e Geologia, tem como
objetivo estudar a extração e visualização macroscópica do DNA de células eucarióticas
vegetais.
O DNA (ácido desoxirribonucleico) é uma biomolécula existente em praticamente
todos os seres vivos (também em alguns vírus), que codifica a informação necessária à
constituição dos organismos.,
Nesta experiência, a fim de estudarmos o melhor funcionamento deste ácido
nucleico, isolamos o DNA, fragmentando as células e separando o DNA do conteúdo
lipídico das membranas dos organitos e das células e posteriormente separando-o das
proteínas.

Fundamentação teórica
Célula eucariótica vegetal: célula que apresenta um núcleo delimitado por um
invólucro e um conjunto de organelos de natureza membranar. O DNA encontra-se no
núcleo da célula.
Parede celular: A parede celular está presente externamente à membrana plasmática
e é uma estrutura extremamente dinâmica. Ela garante forma e rigidez à célula, tem
função de suporte e proteção.
Membrana plasmática: é uma estrutura que delimita a célula, separando o meio
intracelular do meio externo. Ela mantém a integridade da célula e funciona como uma
barreira seletiva, permitindo que apenas algumas substâncias entrem, como oxigênio e
nutrientes, e outras saiam, como os resíduos, ou seja, controla o movimento de
substâncias. Apresenta na sua constituição proteínas, lipídios, entre outras substâncias.

Fig 1. Estrutura da célula eucariótica Fig 2. Membrana plasmática.

vegetal.

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Ácidos nucleicos

Os ácidos nucleicos são as biomoléculas mais importantes no controlo celular, têm

função de armazenamento, transferência de informação genética e síntese proteica.
São moléculas constituídas por unidades básicas designadas nucleótidos.

Nucleótido: é a unidade básica dos ácidos nucleicos. Cada um é constituído por uma
pentose, uma base azotada e um grupo fosfato.

Existem dois tipos de ácidos nucleicos: o ácido ribonucleico (RNA) e o ácido

desoxirribonucleico (DNA).

O DNA é encontrado principalmente nos cromossomas do interior do núcleo celular e

nas mitocôndrias.
Cromossomas: As diferentes sequências de
DNA formam os cromossomos. O ser humano
possui 46 cromossomos: 23 recebidos da mãe
e 23 do pai. Nesse sentido, cada par de
cromossomos é composto de inúmeros genes.
Genes: segmentos de DNA com uma sequência
nucleotídica própria que contém determinada
informação.
Genoma: O Genoma é toda a informação
hereditária codificada no DNA de um
organismo.

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Estrutura e funções do DNA

 A molécula de DNA é uma dupla
hélice de diâmetro uniforme, formada por
duas cadeias polinucleotídicas.
 As duas cadeias são antiparalelas,
correm em sentidos opostos.
 As cadeias enrolam-se em espiral no
sentido dos ponteiros do relógio, em
torno de um eixo imaginário.
 As bases nitrogenadas emparelham
de forma complementar: adenina com
timina e citosina com guanina.
 É o DNA que armazena a informação
hereditária e a transmite ao longo das
gerações.

Material
 1 banana (ou kiwi, morango, cebola)
 Sal de cozinha
 Detergente líquido da loiça
 Vareta
 Balança
 Faca
 Água destilada
 Provetas graduadas
 Almofariz
 Álcool etílico a 96%, a 4°C (frigorífico)
 Gobelés
 Gaze/Papel de filtro
 Sumo de ananás
 Tubo de ensaio
 Funil

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Procedimento
1. Pesou-se cerca de 50 g de banana e cortou-se em pedaços.
2. Deitou-se os pedaços de banana no almofariz e macerou-se bem os pedaços.
3. Misturou-se 3 g de sal de cozinha (NaCl) com 90 mL de água destilada, aquecida
a 60°C, para preparar uma solução de NaCl.
4. Adicionou-se 10 mL de detergente à solução de NaCl e mexeu-se com a vareta
lentamente.
5. Adicionou-se a banana macerada à solução obtida na etapa 4 e envolveu-se com
a vareta durante alguns minutos.
6. Colocou-se a gaze num funil e filtrou-se para um gobelé o preparado obtido na
etapa 5.
7. Adicionou-se 25 mL de sumo de ananás ao filtrado obtido.
8. Mediu-se 20 ml do preparado anterior para um tubo de ensaio ou para uma
proveta.
9. Utilizando uma vareta, adicionou-se muito lentamente cerca de 20 mL de álcool
frio. Observou-se que se forma uma fase alcoólica sobre uma fase aquosa.
10. Deixou-se repousar cerca de 5 minutos.
11. Observou-se e registou-se, na forma de fotografias, as alterações de posição do
agregado molecular nos 40 minutos subsequentes à etapa 10.

Resultados

Fase alcoólica

Fase
Fase aquosa

Fig. 3 Resultado obtido da

extração do DNA, após a 6
etapa 11 do procedimento.
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Interpretação de resultados
Pela observação direta do tubo de ensaio, de baixo para cima, podemos analisar que
no fundo do tubo de ensaio encontra-se a solução aquosa de NaCl e água destilada
inicialmente preparada, esta apresenta uma densidade superior às outras fases e por
isso fica no fundo do tubo de ensaio. Acima da solução aquosa, com a segunda maior
densidade, estão os restos celulares. De seguida observamos a solução alcoólica que é
menos densa que os restos celulares, mas mais densa que o DNA, e é por isso que o
DNA se encontra acima de todas estas camadas, por ser o menos denso, encontra-se na
superfície do tubo, onde é visível na forma de filamentos brancos.

Discussão
Para o sucesso desta atividade laboratorial, todos os procedimentos e materiais
utilizados foram essenciais.
Começando pela maceração do tecido utilizado (neste caso o da banana) que serviu
como quebra mecânica para separar as células da parede celular, destruindo-a. Este
processo foi extremamente necessário para que ocorra o contato das substâncias da
solução com o interior das células vegetais.
O detergente, nesta experiência, tem como principal função dissolver as gorduras,
dado que os organelos que contem o DNA possuem membranas plasmáticas
constituídas por fosfolípidos, assim o detergente irá romper a bicamada fosfolipídica.
Como consequência, o conteúdo do núcleo (DNA e proteínas) dispersa-se na solução
possibilitando a extração de DNA desses organelos.
A função do sal de cozinha (NaCl) usado na experiência foi proporcionar ao DNA um
ambiente estável. O sal contribui com iões positivos (Na+) que neutralizam a carga
negativa do DNA (devido à ionização do grupo fosfato), possibilitando a aglutinação do
DNA suspenso, estabilizando-o e evitando a sua desintegração. É assim possível a sua
visualização a olho nu.
A filtração do extrato permite eliminar os restantes conteúdos celulares, os quais não
são necessários. A filtração torna a solução o mais pura possível.
O álcool etílico tem como função separar o DNA da solução filtrada, permitindo que
o mesmo passe para a fase alcoólica e surja mais à superfície, esta ascensão é a
consequência do DNA ser mais denso que a água e a solução, e como o álcool é menos
denso que a água, faz com que o DNA ascenda até à superfície em direção ao mesmo. O
DNA precipita e vê-se no final sob a forma de filamentos brancos. É utilizado álcool
etílico a 4 graus Celcius para evitar a dissolução do DNA.
O sumo de ananás contém proteases e foi utilizado para destruir as proteínas da
solução, evitando que o DNA seja confundido com estas proteínas.

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O DNA condensou devido ao álcool e ao NaCl. Ocorreu a ascensão do aglomerado

molecular porque este é menos denso que a solução e o sal tornou a água mais densa.
Com a utilização do álcool etílico, que ascende também à superfície, o DNA flutua na
superfície do mesmo.
Considerando o procedimento de extração, não era expectável obter material
genético sem quebras mecânicas e/ou físicas pois não era possível aceder ao DNA, pois
só é possível quebrando a parede celular. Também não era expectável obter material
genético purificado pois para além do DNA a célula apresenta outras biomoléculas que
estarão presentes na solução aquosa. Para garantir que o DNA ficasse purificado
adicionávamos enzimas que destruíssem essas biomoléculas.

Conclusão
A realização desta atividade prática contribuiu para aprofundar os conhecimentos na
área da Biologia, mais concretamente, para analisar o DNA de células eucarióticas
através da sua extração e visualização macroscópica.
O objetivo desta experiência foi cumprido com sucesso, na medida em que
conseguimos realizar a experiência com métodos simples e materiais comuns que se
encontram facilmente nas nossas casas, podendo, finalmente, visualizar o DNA sob a
forma de filamentos brancos e conseguindo assim, avaliar os efeitos de cada processo e
reagente nesta experiência.
Com o procedimento feito, foi possível extrair o DNA das células da banana através
de diversos procedimentos. Numa primeira fase foi possível destruir a parede celular
que envolve a célula vegetal através da maceração. Depois o detergente foi responsável
pelo rompimento da membrana plasmática e da libertação do DNA. E assim, com a
adição do NaCl e do álcool etílico foi possível separar as moléculas de DNA da restante
solução e também tornar esse aglomerado de moléculas visível a olho nu.
Com esta atividade, provámos a existência de DNA através dos resultados obtidos. A
estrutura do DNA não pode ser observada a olho nu devido ao seu tamanho
microscópico mas podemos observar um aglomerado molecular constituído por milhões
de células de DNA.

Bibliografia
- FERREIRA, A; BAÇÃO, F; JACINTO, M; SILVA, P; DUARTE, M; LOBO, S., Biogeo – biologia
11º ano, 1.ª ed. Texto.

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