TRANSCRIÇÃO EM PROCARIOTOS

Síntese de RNA dependente de DNA

Profa Dra Rita de Cássia G. Simão - CCMF

• ZAHA, 5A EDIÇÃO, 2014- BIOLOGIA MOLECULAR BÁSICA- cap.10

• COX BIOLOGIA MOLECULAR: Princípios e técnicas, 2013 – cap 15
 RNA Polimerase (múltiplas atividades):
•Reconhecem e ligam-se a sequências específicas e DNA;
•Separam (desnaturam) a hélice dupla do DNA, expondo a sequência
de nucleotídeos a ser copiada;
•Mantêm as fitas de DNA separadas na região de síntese;
•Mantêm estável o híbrido DNA:RNA na região de síntese;
•Renaturam o DNA na região imediatamente posterior à da síntese
•Sozinhas ou com auxílio de enzimas terminam a síntese do RNA.
NOMENCLATURA (A) E ELEMENTOS (B)
DE PROMOTORES BACTERIANOS
Promotores típicos de E. coli
 TRANSCRIÇÃO
Apenas uma das fitas de DNA é representada e escrita na orientação 5'
para 3'. Essa fita é denominada fita similar ao RNA (RNA-like) e para
obter a sequência da molécula de RNA que será sintetizada,
respeitando seu início e sua terminação, basta substituir as Ts por Us.
Por isso, também podemos chamar essa fita de fita codificante ou
codificadora. A fita de RNA sintetizada é, portanto, copiada da outra fita
de DNA, denominada fita-molde, pois a síntese ocorre por
complementaridade
 TRANSCRIÇÃO

FITA NÃO MOLDE E FITA MOLDE

 A RNA POLIMERASE DE E. coli

Iniciação, liga-se a seq. Reguladoras (rpoA)

Regulação da transcrição
Inciação, Along. , ligações fosfodiéster

Liga-se ao molde de DNA

Reconhece o promotor, inicia a síntese

dissocia-se em seguida (rpoH)
ββ’= rpoB e rpoC
RNA POLIMERASE NA REGIÃO PROMOTORA
DOMÍNIOS DO FATOR SIGMA (C) E ELEMENTOS DE LIGAÇÃO AO
FATOR SIGMA E ELEMENTOS DA RNA Pol BACTERIANA (D)
 Fatores Sigma Alternativos

Gene Fator Função consenso

TTGACAN16-18TATAAT
rpoD σ70 Vegetativo

rpoH σ32 choque térmico CCCTTGAAN13-15CCCGATNT

CTAAAN15GCCGATAA
fliA σ28 genes do flagelo

rpoE σE choque térmico GAAC16-17TCT

extremo (ECF)

rpoN σ54 metabolismo N; outros CTGGNAN6TTGCA

 Sequências dos promotores de genes
de choque térmico de C. crescentus

Promotor Sequência Espaçamento Sequência Fonte

-35 (pb) -10
clpB GACCTTGT 12 CCACACAT Simão et al. 2005

rpoH P2 GCTCTTCA 14 AACTATCT Wu and Newton,

1996

dnaK P1 GGCCTTGC 15 CCCCATAT Gomes et al., 1990

groE P2 GTCCTTGA 15 CGCCTAAC Avedissian and

Gomes, 1996

hrcA AGATTTGA 14 CCGCTTAT Roberts et al., 1996

grpE CGGGTTCC 15 CCCTATAT Roberts et al., 1996

consenso GGCCTTGA 12-15 CCCCATAT Simão et al, 2005

 Processo de transcrição em procariotos

1- O reconhecimento do molde de DNA, quando ocorre o

reconhecimento de sequências específicas do DNA (promotor).

2- Formação do complexo de iniciação, quando a hélice dupla do

DNA é aberta pelo rompimento das pontes de H.

3- O alongamento da cadeia de RNA ou a síntese propriamente

dita.

4- Terminação, quando, com ou sem a participação de proteínas

específicas, sequências no DNA são reconhecidas (terminador)
Disponibilidade dos fatores sigma
Pode ser regulada por:
– transcrição
– tradução
– estabilidade da proteína
– fatores anti-sigma
– competição pela RNA Polimerase
 Ciclos da transcrição

A transcrição é um processo cíclico de síntese de RNA dividido em três fases:

1- O início, em que sequências específicas do DNA (promotores) sinalizam o

local de formação do complexo de transcrição para iniciar a cópia das
sequências do DNA em RNA;

2- A fase de alongamento da cadeia, na qual a molécula do RNA é sintetizada;

3- A terminação da transcrição, o processo em que a síntese do RNA é

terminada em resposta a sinais específicos de terminação da transcrição
(terminadores).
 Ciclos da transcrição

A transcrição é um processo cíclico de síntese de RNA dividido em três fases:

1- O início, em que sequências específicas do DNA (promotores) sinalizam o

local de formação do complexo de transcrição para iniciar a cópia das
sequências do DNA em RNA;

2- A fase de alongamento da cadeia, na qual a molécula do RNA é sintetizada;

3- A terminação da transcrição, o processo em que a síntese do RNA é

terminada em resposta a sinais específicos de terminação da transcrição
(terminadores).
 Ciclos da transcrição

A transcrição é um processo cíclico de síntese de RNA dividido em três fases:

1- O início, em que sequências específicas do DNA (promotores) sinalizam o

local de formação do complexo de transcrição para iniciar a cópia das
sequências do DNA em RNA;

2- A fase de alongamento da cadeia, na qual a molécula do RNA é sintetizada;

3- A terminação da transcrição, o processo em que a síntese do RNA é

terminada em resposta a sinais específicos de terminação da transcrição
(terminadores).
 Propriedades da transcrição

1. A transcrição começa pela iniciação abortiva, que é um estado estático

formado por um complexo aberto no promotor, onde a RNAP ainda
está ligada ao sítio de início da transcrição.

2. A fase produtiva da transcrição é a fase de alongamento da cadeia de

RNA. As RNAPs adicionam processivamente na extremidade 3' um a
um os ribonucleotídeos complementares ao molde de DNA.

3. O complexo de alongamento é dissociado no final da síntese em

resposta a sinais específicos de terminação.

4. A RNAP livre do complexo pode, com auxílio de fatores de iniciação,

ligar-se novamente a um promotor e reiniciar o ciclo de transcricão
 Propriedades da transcrição

1. A transcrição começa pela iniciação abortiva, que é um estado estático

formado por um complexo aberto no promotor, onde a RNAP ainda
está ligada ao sítio de início da transcrição.

2. A fase produtiva da transcrição é a fase de alongamento da cadeia de

RNA. As RNAPs adicionam processivamente na extremidade 3' um a
um os ribonucleotídeos complementares ao molde de DNA.

3. O complexo de alongamento é dissociado no final da síntese em

resposta a sinais específicos de terminação.

4. A RNAP livre do complexo pode, com auxílio de fatores de iniciação,

ligar-se novamente a um promotor e reiniciar o ciclo de transcricão
 Propriedades da transcrição

1. A transcrição começa pela iniciação abortiva, que é um estado estático

formado por um complexo aberto no promotor, onde a RNAP ainda
está ligada ao sítio de início da transcrição.

2. A fase produtiva da transcrição é a fase de alongamento da cadeia de

RNA. As RNAPs adicionam processivamente na extremidade 3' um a
um os ribonucleotídeos complementares ao molde de DNA.

3. O complexo de alongamento é dissociado no final da síntese em

resposta a sinais específicos de terminação.

4. A RNAP livre do complexo pode, com auxílio de fatores de iniciação,

ligar-se novamente a um promotor e reiniciar o ciclo de transcricão
 Propriedades da transcrição

1. A transcrição começa pela iniciação abortiva, que é um estado estático

formado por um complexo aberto no promotor, onde a RNAP ainda
está ligada ao sítio de início da transcrição.

2. A fase produtiva da transcrição é a fase de alongamento da cadeia de

RNA. As RNAPs adicionam processivamente na extremidade 3' um a
um os ribonucleotídeos complementares ao molde de DNA.

3. O complexo de alongamento é dissociado no final da síntese em

resposta a sinais específicos de terminação.

4. A RNAP livre do complexo pode, com auxílio de fatores de iniciação,

ligar-se novamente a um promotor e reiniciar o ciclo de transcricão
Ligação e iniciação da transcrição em procariotos

(após síntese de 8 a
9 nucleotídeos)

Processividade depende do conteúdo GC!!!

TERMINAÇÃO: GRAMPO
Repetições invertidas formam haste alça no RNA
O término da transcrição
 TERMINAÇÃO

DEPENDENTE DE RHO (MODELO ALOSTÉRICO)

 Terminação dependende de Rho
ü Sequências de 50 a 90 b antes do último
nucleotídeo transcrito
ü Proteína Rho (hexâmero – 46KDa)
ü Liga-se ao RNA nascente no sentido da bolha de
transcrição
ü Desestabiliza o complexo de transcrição
ü -10% dos términos
Transcrição em eucariotos
 Transcrição em eucariotos
1. Iniciação
2. Alongamento
3. Terminação

1. Mais diversificado e complexo

1. 7 RNAP
ü RNAPI – nucléolo – rRNA 18S; 5.8 S; 28S
ü RNAPII – nucleoplasma – hnRNA (heterogeneous
nuclear RNA= pré-mRNA); mRNAs; snRNA
ü RNAPIII – nucleoplasma 5SrRNA
ü tRNA, sRNA, snRNA
ü RNAP IV e V: Plantas
ü RNAP mitocondrial
ü RNAP cloroplasto
 Transcrição em eucariotos
ü TAFs – proteínas acessórias
ü Regiões regulatórias da transcrição: elementos promotores (seq. Reguladoras)
ü 1- a montante (upstream)
ü 2- elementos reforçadores (enhacer- a
montante ou a jusante) ativam!!!

ü Promotores 100 a 200 pb TATA box (T/A A A/T)

ü Enhacer – upstream ao promotor (milhares de pb) downstream ao terminador
ü 1- Fatores gerais: proteínas que se ligam aos promotores e interagem com RNA
ü PolII – complexo basal de transcrição
ü 2- Fatores à montante (upstream)
ü Proteínas que se ligam a sequências curtas de DNA, localizadas à montante do
ü Início de transcrição.
ü 3- Fatores indutíveis – ativado em períodos específicos ou em tecidos específicos
9 Elementos reguladores nos promotores eucarióticos
(respondem a enhancers)

Ex.:
1- TATA box
2- BRE
3- Inr (TSS: sítio de início de transcrição)
YYANWYY: D: A, T ou G; K: G ou T; S: C ou G;
Y: C ou T; R: A ou G; M: C ou A; W: T ou A; V: A, C ou G
4- TEM
5- DPE
6- XCPE1
7- Ilhas CpG : promotores dispersos
 Promotor em eucariotos

• TATA box: Hogness boss 25 nt do +1

Promotores em eucariotos
Promotores em eucariotos
Promotores em eucariotos
 Transcrição em eucariotos

ü 3 Subunidades maiores – 210, 140 e 50 KDa (beta´, beta e alfa)

ü 6 a 8 sub. Menores
ü Subunidade CTD – seq. Consenso (Tyr-Ser-Pro-Thr-Ser-Pro-Ser)
ü 26 repetições - yeast
ü 50 repetições - humana
Transcrição em eucariotos
 Em eucariotos:
RNA polimerase
TFIIF
TFIID
TFIIB
TFIIA TFIIE
TBP

TFIIH
CTD Bolha de transcrição

TBP: Proteína de ligação a TATA

TFIIB: liga TBP, recruta TFIIF
TFIIA: estabiliza a ligação de TBP e TFIIB ao promotor
TFIIF: liga-se a RNA pol e TFIIB evita o reconhecimento de seq. inespecíficas
interage com TFIIB
TFIIE : recruta TFIIH, atividade de ATPase e helicase
TFIIH: desenrola o promotor, fosforila RNA pol, recruta o complexo e excisão
de nucleotídeos
TFIID: Interage com proteínas reguladoras positivas e negativas
 Proteína de ligação a TATA
liga TBP, recruta TFIIF
liga-se a RNA pol e TFIIB evita o
recruta TFIIH, atividade reconhecimento de seq.
de ATPase e helicase inespecíficas interage com TFIIB
desenrola o promotor, fosforila RNA pol, recruta o complexo
Interage com proteínas e excisão de nucleotídeos
reguladoras positivas
e negativas
Etapas de Transcrição
RNAPII
 Terminação em eucariotos:

Geralmente, antes da terminação da transcrição, o RNA nascente é clivado

em sua porção 3', portanto, as sequências que demarcam a terminação da
transcrição não estão presentes no RNA sintetizado.

Na maioria dos casos, regiões de simetria invertida, como as que ocorrem

em procariotos, não são encontradas. Da mesma forma, proteínas
relacionadas a Rho não foram encontradas em eucariotos.
 Terminação em eucariotos:
RNA Pol I e III
• Os transcritos sintetizados pela RNAPI são produtos de alto peso molecular e
processados com rapidez, o que gera moléculas funcionais menores. A terminação
da transcrição ocorre em uma região de cerca de 1.500 nt após a extremidade 3' dos
RNAs processados. Sequências específicas ocorrem no DNA após o final da região
correspondente ao RNA maduro. Essas sequências localizam-se em dois sítios,
denominados T1 e T2. Algumas proteínas se ligam a estes sítios, onde também
ocorre a clivagem do RNA que está sendo transcrito. Essa clivagem acontece de 15
a 50 nt após a extremidade 3' do RNA maduro e é mediada por uma endonuclease. A
clivagem no RNA se assemelha àquela mediada pelo complexo de poliadenilação
dos genes transcritos por RNAPII.

• A terminação da transcrição da RNAPIII é definida por sequências ricas em T no

DNA. Esses oligômeros de T desestabilizam o complexo de transcrição e a RNAPIII
se desliga do DNA-molde.
 Terminação em eucariotos:
RNA Pol II

A terminação da transcrição dos RNAs sintetizados pela RNAPII sucede, de forma

difusa, em uma região de aproximadamente 1.500 nt da extremidade 3' dos genes
após a extremidade 3' dos RNAs processados. A clivagem do transcrito pelo
complexo de poliadenilação determina o final da transcrição. Aparentemente as
alterações que ocorrem durante o processamento da extremidade 3' dos mRNAs são
mais relevantes, em termos de controle da expressão, do que o final da transcrição.
 Terminação em eucariotos:
RNA Pol II
2 modelos propostos:

1- TORPEDO: exonuclease 5' → 3', que é capaz de se ligar à extremidade 5' do RNA e
promove a sua degradação em direção à extremidade 3'. A exonuclease se liga à
extremidade 5' do RNA que está sendo transcrito, após a sua clivagem pelo complexo de
poliadenilação. Então, a exonuclease migra em direção ao complexo de transcrição
(lembrando o movimento do complexo Rho nas bactérias), degradando o RNA em
direção à extremidade 3'. Se a velocidade desse processo for maior que a da síntese de
RNA pela RNAPII, a degradação atingiria o complexo e a transcrição seria terminada.

2- ALOSTÉRICO: propõe que a clivagem do RNA nascente no sítio de poliadenilação

desencadearia alterações conformacionais na RNAPII e na cromatina local, levando a
desestabilização do complexo de transcrição e sua terminação..
Obrigada!