MECANISMOS BÁSICOS DA GENÉTICA

MOLECULAR: DO GENE À PROTEÍNA

(Parte 2)

Aula 3
LGN0232 – Genética Molecular

Ilara Budzinski
Departamento de Genética
ilara@usp.br
 LEITURA RECOMENDADA
Fundamentos da Biologia Celular Biologia Celular e Molecular
(Bruce Alberts, etc) (Harvey Lodish)

Genética um enfoque conceitual Fundamentos de Genética

(Benjamin Pierce, etc) (Snustad & Simon)
SUMÁRIO
• Processamento de mRNAs;

• Conceito de gene;

• Conceito de Promotor

• O processo de tradução;

• Aplicação dos conhecimentos adquiridos

 TRANSCRIÇÃO

✓ A informação genética contida num segmento do DNA é reescrita em uma fita

simples de RNA;
✓ Esta fita apresenta uma sequência de ribonucleotídeos complementar a uma das
fitas da dupla hélice de DNA (molde) e idêntica à sequência da outra fita
(codificadora), com substituição de T por U.
 TRANSCRIÇÃO
✓Nos eucariotos a transcrição ocorre no núcleo, enquanto a tradução ocorre
no citoplasma.
✓Já nos procariotos tal separação celular não existe, sendo os dois processos
acoplados.

Isso faz toda a diferença no controle da

expressão de genes e complexidade dos
organismos!
ENZIMA RNA POLIMERASE – UMA ENZIMA
POLIVALENTE!!!

(Alberts et al., 1999)

 RNA POLIMERASE
✓ Reconhece e se liga à sequências específicas de DNA (promotor);
✓ Desnatura o DNA expondo a sequência de nucleotídeos a ser copiada;
✓ Mantém as fitas de DNA separadas na região de síntese;
✓ Mantém o híbrido DNA:RNA estável
✓ Renatura o DNA na região imediatamente posterior à da síntese;
✓ Sozinha, ou com o auxílio de algumas proteínas específicas, termina a
síntese do RNA.

FATORES DE TRANSCRIÇÃO
Proteínas que auxiliam o processo de transcrição no reconhecimento do
promotor.
RNA POLIMERASES EM EUCARIOTOS
 ETAPAS DA
TRANSCRIÇÃO
 CARACTERÍSTICAS GERAIS DA SÍNTESE DE RNA
1. Os precursores são ribonucleotídeos;

2. Apenas 1 fita de DNA é utilizada como molde para a síntese de RNA

complementar;

3. As cadeias de RNA são sintetizadas sem a necessidade de um filamento

primer preexistente (atuação da RNA polimerase);

4. Síntese é complementar ao DNA, no entanto A → U;

5. Polimerização sentido 5’ → 3’;

6. RNA polimerase inicia a transcrição em sequências específicas de

nucleotídeos → promotores;

7. RNA polimerase termina a transcrição em sequências específicas de

nucleotídeos → terminadores (finalizadores).
 DEFINIÇÃO DE GENE

Wilhelm Johannsen

1909 → gene

❑ Um gene → unidade da informação genética que controla a síntese de

polipeptídios ou uma molécula de RNA estrutural

mRNA → polipeptídeo

tRNA e rRNA → RNA estrutural

❑ Gene inclui as regiões 5´e 3´não codificantes, que estão envolvidas na

regulação da transcrição e tradução, e todos os introns dentro do gene
 O que é um gene?
✓ Um segmento de DNA, com uma sequência específica da nucleotídeos, na
qual está codificada a informação para formação de um polipeptídeo
específico. Ou seja, a sequência de DNA que contém as instruções
biológicas para a produção de uma cadeia polipeptídica.

✓ LEMBRAND QUE: essa região do DNA codifica um RNA mensageiro, que

codifica uma proteína ou uma molécula de RNA funcional.

✓ Os genes são essenciais

para todas as funções do
organismo. Alterações nos
genes podem levar a falha no
funcionamento ou não-
formação das proteínas
codificadas.

https://blog.mendelics.com.br/voce-sabe-o-que-e-sequenciamento-do-exoma/
 Organização e Estrutura de um Gene típico

Promotor
 REGIÃO PROMOTORA DE UM GENE

5’ 3’

PROMOTOR: Sequência no DNA que indica o início da transcrição, o local

onde a RNA polimerase e liga para iniciar a transcrição.
Antecede o ponto de início da transcrição, localiza-se à montante (upstream)
e as que o sucedem localizam-se à jusante (downstream);

A posição das bases é numerada nos dois sentidos, a partir do ponto de

início da transcrição, ao qual se atribui o valor +1. Os valores aumentam
(valor positivo) à jusante e diminuem (valor negativo) à montante.
PROMOTOR
Direciona a polimerase para o gene correto
Controla a frequência de transcrição

Mais afinidade → mais mRNA

produzido (se necessário)

Promotores fortes

Promotores fracos
ESTRUTURA DO PROMOTOR EM PROCARIOTOS

Início da transcrição
Reconhecimento da RNA
polimerase
mRNA

-35 -10 +1
TATA box

região regulatória região codante

upstream = a montante
downstream = a jusante
RECONHECIMENTO DO PROMOTOR PROCARIOTOS

A RNA-polimerase bacteriana
contém uma subunidade
denominada fator sigma
(amarelo), que reconhece o
promotor de um gene.
ESTRUTURA DO PROMOTOR EM EUCARIOTOS
Reconhecimento da RNA
polimerase

Início da transcrição

mRNA

-75 -25 +1
CCAAT box TATA box

região regulatória região codante

upstream = a montante
downstream = a jusante
Estruturas de promotores eucariotos típicos

Nome Seq. consenso

TATA box TATAAA
CAAT box GGCCAATCT
GC box GGGCGGG
Octamêro ATTTGCAT
 PROMOTOR E FATORES DE TRANSCRIÇÃO
Início da transcrição

mRNA

✓ A RNA-polimerase de eucariotos requer fatores gerais de transcrição.

✓ Proteínas acessórias que organizam-se sobre o promotor, onde

posicionam a RNA-polimerase, e separam a dupla-hélice do DNA
para expor a fita molde, permitindo que a polimerase inicie a
transcrição.
 AÇÃO DOS FATORES DE
INICIAÇÃO
(B) O TATA box é reconhecido por uma subunidade do fator
geral de transcrição TFIID, denominada proteína de ligação
ao TATA (TBP).

(C) A ligação do TFIID permite a ligação adjacente do TFIIB.

(D) Os demais fatores gerais de transcrição, assim como a

própria RNA-polimerase, se associam ao promotor.

(E) Em seguida, o TFIIH separa a dupla-hélice no ponto de

iniciação da transcrição, utilizando a energia da hidrólise do
ATP, o que expõe a fita molde do gene.

TFIIH também fosforila a RNA- -polimerase II, liberando a

polimerase da maioria dos fatores gerais de transcrição,
para que ela possa dar início à transcrição.
EM SÍNTESE…

REGIÕES CHAVE DO DNA NA TRANSCRIÇÃO

PROCARIOTO

Promotor Éxon 1 Éxon 2 Éxon 3…

Terminador

EUCARIOTO

Promotor Éxon Íntron

Terminador
 Enhancers (ou Acentuador)
São sequências de DNA que aumentam a afinidade da maquinaria de
transcrição por um certo promotor.
✓ Não promove a transcrição
✓ Localizado a montante ou jusante do promotor
✓ Pode estar muito longe do promotor
✓ Aumenta a atividade do promotor (até 200x!!!)
✓ Pode funcionar em ambas as direções
✓ Tem efeito num tecido específico
 TERMINO DA TRANSCRIÇÃO
✓ O término das cadeias de RNA ocorre quanto a RNA polimerase encontra um sinal de
término, quando isso ocorre o complexo é liberado;
 GENE TÍPICO DE PROCARIOTOS

mRNA
 GENE TÍPICO DE EUCARIOTOS
Sinais para a
Regulação da tradução terminação da
Regulação da transcrição
transcrição

Transcrição
Transcrito
primário

Remoção dos
introns
mRNA

Códon de iniciação Códon de terminação

Tradução
Polipeptídeo
PROCESSAMENTO DO RNA (TRANSCRITO) PRIMÁRIO EM
EUCARIOTOS
• As modificações que podem ocorrer nos transcritos nucleares são
basicamente de três tipos:

– Capeamento ("capping") do terminal 5';

– Poliadenilação do terminal 3';
– Montagem de segmentos codificadores ("splicing").

• Este conjunto de modificações no transcrito nuclear originará o mRNA,

pronto para migrar para o citoplasma.

mRNA
 PROCESSAMENTO DO RNA PRIMÁRIO

Capeamento:

❖ Logo após a transcrição, há a ligação de 7-metilguanosina ao

primeiro nucleotídeo 5’ do transcrito de RNA.

FUNÇÕES:
. Proteger o transcrito do ataque de exonucleases;
. Facilitar transporte para citoplasma;
. Auxilia o encaixe dos ribossomos no mRNA.
 PROCESSAMENTO DO RNA PRIMÁRIO
Poliadenilação:
❖ Após o término da transcrição – clivagem terminal do RNA;
❖ Adição de cerca de 200 resíduos de adenilato (AMP)

FUNÇÕES:
. Facilitar transporte para o citoplasma;
. Estabilizar o mRNA;
. Facilitar a tradução.
PROCESSAMENTO DO RNA PRIMÁRIO

Splicing
 Sequências especificas e snRNA (small
nucleolar RNA – pequenos RNA nucleares)
auxiliam junto a proteínas (RPN) na retirada do
introns
SPLICING ALTERNATIVO GERANDO DIVERSAS PROTEÍNAS
 TRADUÇÃO

Interpretação

Colocar em outra linguagem!!

Met -Lys –Trp...

 Código Genético
The Nobel Prize in Physiology or Medicine 1968

Robert W. Holley Har G. Khorana Marshall Nirenberg

✓ Composto por trincas de bases nitrogenadas (portanto, existem 64

possibilidades (43 = 64);
✓ São codificados, pelo código genético, 20 aminoácidos presentes nas proteínas;
✓ Código genético é degenerado e universal;
✓ Cada trinca (códon) codifica um único aminoácido, no entanto, um aminoácido
pode ser codificado por mais do que uma trinca.
 CARACTERÍSTICAS GERAIS DA TRADUÇÃO
✓ Todos os RNAs mensageiros são lidos na direção 5’- 3’;

✓ As cadeias polipeptídicas são sintetizadas da extremidade

amina (NH3) para a carboxila terminal (COOH) – ligação peptídica;

✓ A tradução é realizada nos ribossomos, com os RNA

transportadores como adaptadores entre o molde de mRNA e os
aminoácidos;

✓Cada aminoácido é especificado por três bases (códon) no

mRNA – código genético universal.
 ESTRUTURA DA PROTEÍNA
Aminoácidos (20 tipo): Grupo amino Grupo carboxila

→ grupo amino;
→ grupo carboxila;
→ grupo lateral.

Grupo Lateral (R)

Proteína - direção de sintese

Fases de leitura possíveis na síntese de proteínas

A leitura correta do
código genético pelo
ribossomo é vital!!!
 START CODON E STOP CODON
❖ Delimitam a região codante (região que é transcrita e traduzida!)

Início: códon de iniciação da síntese protéica

- AUG -

METIONINA

Terminação: três códons terminam a síntese protéica

- UAG - UAA - UGA -

 TRADUÇÃO: INÍCIO E FIM

TTCATACTTGGTTAAGACCTTTACAAGCCGACCAACGTGGTGAC
AGTGTCGTCCTTTACGCACCGAATCCCTTTATCATTGAATTAGT
AGAAGAGCGATACTTAGGACGTCTTCGGATGGAATCTTGGTCCC
GTTGCCTGGAACGTCTTGAAACTGAATTCCCGCCAGAAGATGTT
CATACTTGGTTAAGACCTTTACAAGCCGACCAACGTGGTGACAG
TGTCGTCCTTTACGCACCGAATCCCTTTATCATATTGAATTAGT
AGAAGAGCGATACTTAGGACGTCTTCGGGAATTGTTATCCTATT
TCTCAGGAATACGTGAAGTAGTCCTTGCAATTGGCTCACGACCT
AAAACAACAGAACTACCCGTACCAGTAGACACTACAGGACGTTT
GTCTTCAACAGTCCCATTTAACGGAAATCTCGACACACACTATA
ACTTTGATAATTTTGTTGAGGGACGAAGCAATCAACTCGCTCGT
GCTGCAGCTTGGCAAGCGGCACAGAAACCGGGAGACCGTACTCA
CAACCCTCTATTGCTCTATGGTGGGACTGGTTTGGGTAAAACCC
ATTTAATGTTTGCTGCAGGTAACGTAATGCGGCAAGTAAACCCA
ACTTATAAAGTAATGTATCTTCGTTCGGAACAGTTTTTCAGCGC
CATGATAAGAGCGTACAAGATAAAAGTATGGATCATAAGGGTAA
 5’ 3’

START CODON

STOP CODON
DNA

PROMOTOR

-35 -10 +1
TTGACA-14N-TATAATAA-9N-CACAGGAGGATTATTTATGAAATTCCCTTCTTGGTGA

mRNA CACAGGAGGAUUAUCCAUGAAAUUCCCUUCUUGGUGA

PROTEINA MET LYS PHE PRO SER TRY

TRADUÇÃO EM PROCARIOTOS
 TRADUÇÃO
INICIAÇÃO ALONGAMENTO TÉRMINO

DOBRAMENTO DE PROTEÍNAS
 CÓDON E ANTICÓDON
➢ RNA transportador (tRNA) – adaptador
amino-ácido
ligado Phe

forma de trevo
 CÓDON E ANTICÓDON
➢ RNA transportador (tRNA) – adaptador
Aminoacil - tRNA sintetases

pareamento com o códon

ANTICÓDON complementar no mRNA
As aminoacil - tRNA sintetases:
• Enzima que reconhece e liga um aminoácido específico a seu(s) tRNA(s)
correspondente(s), sendo capaz de reconhecer diferentes tRNAs para o
mesmo aminoácido.
• Para que uma molécula de tRNA se ligue ao aminoácido correto são
necessárias 20 enzimas diferentes que reconheçam, especificamente,
aminoácidos e seus tRNAs compatíveis.
• Estas enzimas ligam o aminoácido à hidroxila 3' livre da adenosina terminal
do tRNA.
 A MENSAGEM DO mRNA É DECODIFICADA POR
RIBOSSOMOS
• RIBOSSOMO: grande complexo composto por dezenas de pequenas
proteínas (as proteínas ribossômicas) e várias moléculas essenciais de
RNA, chamadas de RNAs ribossômicos (rRNAs).
 RIBOSSOMOS
• Possuem um sítio de ligação para mRNA e três sítios de ligação para
tRNA.
A TRADUÇÃO OCORRE EM UM CICLO DE QUATRO ETAPAS
PROCARIOTO
EUCARIOTO
SINAIS PARA O INÍCIO DA TRADUÇÃO

(Sequência de Kozak)
5´ - GCC (A ou G) CC AUGG - 3`
Vários polipeptideos
auxiliam o início da
tradução!
INÍCIO
INÍCIO

Movimento até
encontrar a o
códon AUG
INÍCIO

Fatores de iniciação
dissociam-se da
subunidade menor
do ribossomo
Subunidade maior
do ribossomo se
liga à menor
INÍCIO

Aminoacil-tRNa se
liga ao sítio A
INÍCIO

Primeira ligação
peptídica entre os
aa
E continuadamente…. ALONGAMENTO

Vários fatores controlam a continuação da tradução!

TÉRMINO

Ligação do
fator de
liberação no
síto A
TÉRMINO

Terminação
Um único mRNA é traduzido por vários ribossomos !!
VISÃO GERAL
APLICANDO O CONHECIMENTO…
CONSTRUÇÃO PRESENTE NA SOJA RR®
A construção genética requer três elementos básicos:
Promotor: que controla a expressão do transgene no organismo;
Região codificadora: que codifica a proteína de interesse;
Região terminadora: que determina o final do processo de transcrição do
gene.
Além disso, pode ser usado um gene marcador que serve para selecionar as
células que, de fato, foram transformadas.

CaMV35S: promotor 35S do vírus do mosaico da couve flor – promotor constitutivo

CTP: peptídeo de trânsito de cloroplasto da EPSPS
CP4 EPPS: o gene para a proteína EPSPS de Agrobacterium tumefascien)
NOS: terminador do gene da nopalina sintase (NOS), também de Agrobacterium
* Promotor irá determinar os tecidos e as fases do desenvolvimento nos quais o gene será expresso!
PROMOTORES ESPECÍFICOS
FATORES DE TRANSCRIÇÃO:
The basic helix–loop–helix (bHLH) family is the
second largest family of transcription factors in
plants.
VISUALIZANDO O PROCESSO…
http://www.youtube.com/watch?v=983lhh20rGY&feature=related
http://www.youtube.com/watch?v=-ygpqVr7_xs&feature=related
http://qnint.sbq.org.br/qni/visualizarTema.php?idTema=33
http://www.odnavaiaescola.com.br/dna/19/bio.htm
http://www.youtube.com/watch?v=teV62zrm2P0
http://www.youtube.com/watch?v=4PKjF7OumYo
ESTUDO DIRIGIDO
1. Definição de gene;

2. Diferença na estrutura dos genes de eucariotos e procariotos;

3. Região promotora e sua importância para a transcrição em eucariotos e

procariotos.

4. Processamento de RNA.

5. Região codante: start codon e stop codon.

6. Processo de tradução